皮膚中存在眾多的ECM(extracellular matrix,細(xì)胞外基質(zhì))蛋白,其中膠原蛋白、彈性蛋白是最重要的兩種
,它們?cè)谄つw抗衰老中起著非常重要的作用。除了膠原蛋白和彈性蛋白,還有非常多的結(jié)構(gòu)蛋白,結(jié)構(gòu)輔助蛋白
。在這些結(jié)構(gòu)輔助蛋白里,LOXL-1是一種很重要的細(xì)胞外依賴(lài)銅的胺氧化酶
,催化膠原蛋白和彈性蛋白中交叉鏈接形成的第一步,其表達(dá)量的增加能更好地促進(jìn)膠原蛋白和彈性蛋白纖維的生成
。
彈性蛋白是彈性纖維(elastic fbers)的主要成分。彈性纖維主要存在于韌帶和脈管壁。彈性纖維與膠原纖維共同存在, 賦予組織以彈性和抗張能力。盡管彈性蛋白只占真皮總蛋白的2%,但它對(duì)皮膚彈性起著重要作用
。
乙?;?1鯨蠟酯,乙?;碾?2,假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物都是各大化妝品公司經(jīng)常使用的核心原料,原料供應(yīng)商提供的之前的研究資料表明,乙?;?1鯨蠟酯能有效促進(jìn)彈力蛋白的再生,注重彈性纖維的修復(fù),為肌膚打造一層健康、緊致的纖維網(wǎng)絡(luò),抑制表情紋。它同時(shí)被稱(chēng)作肌膚的“彈力素”,可支撐松垮的皮膚,提供緊致上揚(yáng)的彈力。乙酰基四肽-2可以上調(diào)與膠原蛋白合成和黏著斑有關(guān)的基因表達(dá),誘導(dǎo)彈性蛋白、I型膠原蛋白合成,從而增加皮膚緊實(shí)度。假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物具有促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)I型,IV型膠原蛋白和彈性蛋白合成,提高皮膚屏障功能,減少炎性基因表達(dá),抑制脂質(zhì)過(guò)氧化等諸多功效,然而對(duì)這三者進(jìn)行的單獨(dú)和聯(lián)合的功效比較測(cè)試還未有研究,此次研究就評(píng)估了三個(gè)原料的聯(lián)合對(duì)皮膚相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白的協(xié)同增效促進(jìn)作用。
DMEM 培養(yǎng)基(20210121/20210406,Cellmax),血清(2132094P,Gibco),胰酶(20210113/20210323,碧云天),雙抗(20200828,北京索萊寶科技有限公司),TRIzon(03877/35120,康為世紀(jì)),三氯甲烷(20200105,國(guó)藥化學(xué)試劑),HiFiScript cDNA Synthesis Kit(100rxns34520,康為世紀(jì)),UltraSYBR(31420,康為世紀(jì)), 噻唑藍(lán)(MTT,Sigma-Aldrich 公司, M2128-100MG),HFF-1人皮膚成纖維樣細(xì)胞(中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)上海細(xì)胞庫(kù), 培養(yǎng)條件:5% CO
,37℃恒溫培養(yǎng)箱,培養(yǎng)基:89% DMEM+10%FBS+1%雙抗), 乙酰基二肽-1鯨蠟酯(1453629,Sederma),乙?;碾?2 (U19B013-20,Lipotec),假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物(U07K010-19,Lipotec),生物顯微鏡(LWD300-38LT,上海測(cè)維光電技術(shù)有限公司),恒溫水浴鍋(HH-1嘉興俊思電子有限公司),高速冷凍離心機(jī)(Sorvall Legend Micro 17R,Thermo),CO
培養(yǎng)箱(BB150,Thermo),純水儀(Smart-DUF,上海和泰儀器有限公司),多功能酶標(biāo)儀(SpectraMax iD3,Molecular Devices)。
取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液,以1×104 cells/mL的密度接種于96孔板上,用含10%胎牛血清的培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)24 h使細(xì)胞貼壁,培養(yǎng)終體積為0.2mL,而后吸棄上清,加入新鮮制備的不同濃度的藥物(無(wú)血清)或者不加藥物(無(wú)血清)孵育,培養(yǎng)終體積為0.2 mL。24 h后,顯微鏡下觀察細(xì)胞毒性情況。MTT法檢測(cè)細(xì)胞毒性,于490 nm測(cè)定吸光度,計(jì)算細(xì)胞活率。細(xì)胞活率 =A
/A
×100%。
取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液,以1×105 cells/mL的密度接種于6孔板上,用含10%胎牛血清的培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)24 h使細(xì)胞貼壁,培養(yǎng)終體積為2 mL。而后吸棄上清,加入新鮮制備的不同濃度的藥物(無(wú)血清)或者不加藥物(無(wú)血清)孵育,培養(yǎng)終體積為2 mL。24 h后,按RNA提取標(biāo)準(zhǔn)操作流程提取各孔R(shí)NA,qPCR法檢 測(cè)HFF-1細(xì) 胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、Col-Ⅳ、Col-XVII、Elastin、Fibrillin-1 、Fibulin-5、Decorin、LOXL-1 、TGF-β、Integrin mRNA的表達(dá)影響。
行動(dòng)主張:建議學(xué)院專(zhuān)業(yè)再次結(jié)合現(xiàn)專(zhuān)業(yè)、行業(yè)背景確定什么是基本能力,什么是必要的擴(kuò)展能力,當(dāng)下行業(yè)緊俏的擴(kuò)展能力,但不能設(shè)置的太高,不然達(dá)不到技訓(xùn)的目的。
本研究選取5 μg/mL乙?;?1鯨蠟酯、5 μg/mL乙?;碾?2、5 μg/mL假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物單獨(dú)或聯(lián)合對(duì)HFF-1細(xì)胞孵育24 h,提取細(xì)胞總RNA后,qPCR檢測(cè)膠原蛋白相關(guān)mRNA的表達(dá),結(jié)果如圖2所示。5 μg/mL乙?;?1鯨蠟酯、5 μg/mL乙?;碾?2、5 μg/mL假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物單獨(dú)給藥能促進(jìn)COL-I, COL-III,COL-IV, LOXL-1的表達(dá),與單獨(dú)給藥相比,5 μg/mL 乙酰基二肽-1鯨蠟酯、5 μg/mL乙酰基四肽-2、5 μg/mL假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物聯(lián)合給藥,協(xié)同增加HFF-1細(xì)胞Col-I、LOXL-1mRNA的表達(dá)(
<0.05)。
受試物和對(duì)照品用DMSO或者ddH2O配制成母液,再用無(wú)血清培養(yǎng)基或者PBS稀釋至合適濃度。
本題是培養(yǎng)學(xué)生轉(zhuǎn)化能力的極佳素材,雖然條件一讀就懂、圖形一看就明,但一做卻又難以入手.不過(guò),借助“知識(shí)溯源式目標(biāo)分析法”卻可巧妙地讓解題思維轉(zhuǎn)化路線(xiàn)圖水落石出.
分別用0.1、0.5、1、5、10、20、40 μg/mL 乙酰基二肽-1鯨蠟酯,乙酰基四肽-2,假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物,或乙?;?1鯨蠟酯:乙?;碾?2:假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物質(zhì)量比為1:1:1聯(lián)合給藥,MTT法評(píng)估細(xì)胞毒性,結(jié)果如圖1所示,由圖1可知,乙?;?1鯨蠟酯在20ug/mL下都沒(méi)有細(xì)胞毒性,乙?;碾?2在40ug/mL都沒(méi)有毒性,假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物在40ug/mL下都沒(méi)有細(xì)胞毒性,乙?;?1鯨蠟酯,乙酰基四肽-2,假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物三者1:1:1聯(lián)合給藥,在20ug/mL下非但沒(méi)有細(xì)胞毒性,而且還能促進(jìn)細(xì)胞增殖。
虛擬云桌面就是對(duì)計(jì)算機(jī)桌面進(jìn)行虛擬化,它是通過(guò)在數(shù)據(jù)中心服務(wù)器上創(chuàng)建虛擬桌面為載體,然后運(yùn)用一系列網(wǎng)絡(luò)傳輸協(xié)議將遠(yuǎn)端的操作系統(tǒng)和應(yīng)用發(fā)送給多媒體教室終端設(shè)備的過(guò)程。南京城市職業(yè)學(xué)院多媒體教學(xué)場(chǎng)景所采用的虛擬桌面是通過(guò)VMware vSphere構(gòu)建虛擬化平臺(tái)+瘦客戶(hù)機(jī)的方式實(shí)現(xiàn)的。通過(guò)虛擬化技術(shù)的運(yùn)用,使整個(gè)部署過(guò)程變得十分簡(jiǎn)便,也讓遠(yuǎn)程統(tǒng)一管控變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)。
細(xì)胞給藥后提取總RNA,qPCR,檢測(cè)HFF-1細(xì)胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、Col-Ⅳ、Col-XVII、Elastin、Fibrillin-1、Fibulin-5、Decorin、LOXL-1、TGF-β、IntegrinmRNA的表達(dá)影響。
乙?;?1鯨蠟酯, 乙?;碾?2,假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物單獨(dú)或聯(lián)合給藥24 h對(duì)HFF-1細(xì)胞增殖的影響。
= 3, Mean ± SEM?!?*** ”表示與對(duì)照組相比
< 0.001。
近幾天來(lái),楊力生做生意特別賺錢(qián),他心里高興,想起了老婆一些好處,便想和老婆親熱一番。晚上九點(diǎn)以后,孩子到西間睡去了。楊力生湊到老婆身邊,討好地說(shuō):“怎么樣,今天很累嗎?”
采用Excel錄入和 GraphPad Prism 7 軟件包統(tǒng)計(jì)處理,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。各組間做單因素方差分析(ANOVA)。認(rèn)為
<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
乙酰基二肽-1鯨蠟酯、乙?;碾?2、假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物單獨(dú)或聯(lián)合給藥24 h對(duì)HFF-1細(xì)胞膠原蛋白相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響。
= 3, Mean ± SEM?!埃北硎九c聯(lián)合給藥組相比
< 0.05, “ ** ”表示與聯(lián)合給藥組相比
< 0.01, “ *** ”表示與聯(lián)合給藥組相比
< 0.001。
給予康復(fù)訓(xùn)練,首先是采用冷刺激閥,刺激患者的口腔、咽喉部,如采用冷凍棉簽按摩口唇、咽頰部與咽腭弓,幫助患者練習(xí)吞咽動(dòng)作,提高其舌體的力量及靈活度等;其次幫助患者進(jìn)行屏氣、發(fā)聲運(yùn)動(dòng),指導(dǎo)其在坐椅上,并用雙手支撐、推壓,同時(shí)做屏氣動(dòng)作,注意應(yīng)保持胸廓的固定,聲門(mén)也應(yīng)緊閉,再突然松手、開(kāi)聲門(mén)、呼發(fā)聲;最后訓(xùn)練其自行攝食,應(yīng)選擇30~60°頸前屈、仰臥位進(jìn)食[3] 。以上訓(xùn)練方法時(shí)間為30 min,1次/d。訓(xùn)練時(shí)間為2周。
5 μg/mL乙?;?1鯨蠟酯、5 μg/mL乙?;碾?2、5 μg/mL假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物單獨(dú)或1:1:1聯(lián)合對(duì)HFF-1細(xì)胞孵育24 h,提取細(xì)胞總RNA后,qPCR檢測(cè)彈性蛋白相關(guān)mRNA的表達(dá),結(jié)果如圖3所示。5 μg/mL乙?;?1鯨蠟酯、5 μg/mL乙酰基四肽-2、5 μg/mL假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物單獨(dú)給藥能促進(jìn)Elastin、Fibrillin-1、Fibulin-5、TGF-β、Integrin 的mRNA表達(dá),與單獨(dú)給藥相比,5 μg/mL 乙?;?1鯨蠟酯、5 μg/mL乙?;碾?2、5 μg/mL 假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物聯(lián)合給藥協(xié)同增加HFF-1細(xì)胞Elastin、Fibrillin-1、Fibulin-5、TGF-βmRNA 的表達(dá)(
<0.05)。
乙?;?1鯨蠟酯,乙?;碾?2,假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物單獨(dú)或聯(lián)合處理24 h對(duì)HFF-1細(xì)胞相關(guān)mRNA表達(dá)的影響。
= 3, Mean ± SEM?!埃北硎九c聯(lián)合給藥組相比
< 0.05,“ ** ”表示與聯(lián)合給藥組相比
< 0.01, “ *** ”表示與聯(lián)合給藥組相比
< 0.001。
軟土路基處理技術(shù)在我國(guó)公路工程建設(shè)中發(fā)揮了重要作用。公路軟土路基處理技術(shù)發(fā)展歷史較長(zhǎng),經(jīng)多年的發(fā)展積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。路基處理技術(shù)的發(fā)展可分為兩個(gè)時(shí)期,建國(guó)初期應(yīng)用路基處理技術(shù)主要為擠密土樁,砂石墊層等。80年代后期,隨著改革開(kāi)放的發(fā)展,建筑工程建設(shè)不斷進(jìn)步。在公路工程建設(shè)中引進(jìn)了大量的國(guó)外先進(jìn)技術(shù),促進(jìn)了我國(guó)建筑事業(yè)建設(shè)發(fā)展。
化妝品中的生物多肽類(lèi)化合物具有高生物活性、易吸收、安全無(wú)毒的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。近年來(lái)其在美容護(hù)膚、抗衰老研究課題中的生理作用與生物效應(yīng)逐漸引發(fā)關(guān)注
;多肽的生物學(xué)活性取決于其氨基酸組成和序列,人體內(nèi)各種生理進(jìn)程幾乎都是由特定的氨基酸序列組成的多肽或者蛋白質(zhì)調(diào)控的。因此,生物活性肽為化妝品研發(fā)和應(yīng)用提供了全新方向和思路,并且功能越來(lái)越細(xì)分,如抗衰老、抗過(guò)敏、修復(fù)、抗氧化、抗水腫、促進(jìn)毛發(fā)再生、抑制黑色素生成等。添加多肽到化妝品中能夠幫助改善、修復(fù)皮膚的各種問(wèn)題,但目前單種多肽活性物質(zhì)應(yīng)用報(bào)道較多,而多種多肽和活性物的組合應(yīng)用研究開(kāi)發(fā)較少
,特別是多種不同類(lèi)型的肽類(lèi)和活性物組合針對(duì)抗衰老的靶點(diǎn)協(xié)同增效作用報(bào)道較少。本研究中的多肽提取物組合協(xié)同增效結(jié)果,在活性物組合的研究中,具備較強(qiáng)的創(chuàng)新性。在本研究中,我們采用乙?;?1鯨蠟酯、乙?;碾?2、假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物聯(lián)合給藥,發(fā)現(xiàn)協(xié)同給藥能協(xié)同促進(jìn)HFF-1細(xì) 胞Col-I、LOXL-1、Elastin、Fibrillin-1、Fibulin-5 mRNA的表達(dá),獲得更強(qiáng)、更顯著的抗衰老效果。
本罪為情節(jié)犯,由法條可以看出,分為情節(jié)嚴(yán)重和情節(jié)特別嚴(yán)重,相對(duì)應(yīng)的有兩種輕重不同的法定刑。至于何謂“情節(jié)嚴(yán)重”或“情節(jié)特別嚴(yán)重”,并沒(méi)有明確規(guī)定。一般認(rèn)為,多次、大量非法獲取他人計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)的為情節(jié)嚴(yán)重。
綜上所述,本研究采用乙?;?1鯨蠟酯、乙?;碾?2和假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物提取物三種活性組份,針對(duì)抗衰老的靶點(diǎn)進(jìn)行協(xié)同增效作用,能夠顯著地增加對(duì)抗衰老相關(guān)的重要蛋白的表達(dá)。因而,本研究中的抗衰老組合物、乙?;?1鯨蠟酯、乙?;碾?2、假交替單胞菌發(fā)酵產(chǎn)物的聯(lián)合應(yīng)用,具有更好的協(xié)同增效的抗衰老活性,因?yàn)槁?lián)合作用功效增強(qiáng)了,在同等的功效下,聯(lián)合作用原料可以用量更小,所以這樣的組合具備在化妝品產(chǎn)品中少量添加就能達(dá)到更好效果的應(yīng)用前景。
[1]來(lái)吉祥,何聰芬,董銀卯. 皮膚衰老機(jī)理及延緩衰老化妝品的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)美容醫(yī)學(xué),2009,18(08):1208-1212.
[2]張虹,孔漢文,羅樹(shù)光. 用彈性蛋白改變皮膚老化的研究和應(yīng)用[J].日用化學(xué)工業(yè),1996(06):31-34.
[3]梁嘉宜,歐婷婷,邱志勇. 含多肽成分眼霜淡化黑眼圈功效研究[J].日用化學(xué)品科學(xué),2021,44(11):25-29
[4]何平. 小分子多肽在化妝品中的應(yīng)用綜述[J]. 廣州化工, 2019,47(24): 14-15
[5]鄔燕紅,譚青蘭,胡新成. 復(fù)合生物活性肽類(lèi)化妝品的功效評(píng)價(jià)[J].香料香精化妝品,2020(05):60-62
[6]Fhayli W, Bo?té Q, Kihal N, et al. Dill Extract Induces Elastic Fiber Neosynthesis and Functional Improvement in the Ascending Aorta of Aged Mice with Reversal of Age-Dependent Cardiac Hypertrophy and Involvement of Lysyl Oxidase-Like-1. Biomolecules. 2020 Jan 23;10(2):173.
[7]A blackberry-dill extract combination synergistically increases skin elasticity. Meza D, Li WH, Seo I, et al. Southall MD.Int J Cosmet Sci.2020 Oct;42(5):444-451. doi: 10.1111/ics.12644. Epub 2020 Aug 25.
[8]Cole M A, Quan T, Voorhees J J, et al. Extracellular matrix regulation of fbroblast function: redefning our perspective on skin aging[J].Journal of Cell Communication and Signaling, 2018, 12 (1): 35-43.
[9]Naylor E C, Watson R E B, Sherratt M J. Molecular aspects of skin ageing[J]. Maturitas, 2011, 69 (3) : 249-256.
[10]Cole M A, Quan T, Voorhees J J, et al. Extracellular matrix regulation of fbroblast function: redefning our perspective on skin aging[J].Journal of Cell Communication and Signaling, 2018, 12 (1): 35-43.
[11]Lin'kova N S, Drobintseva A O, Orlova O A, et al. Peptide regulation of skin fbroblast functions during their aging in vitro[J]. Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 2016, 161 1) : 175-178.
[12]Shi Yueying, Qin Dezhi, Meng Fanling. Efficacy of peptides in cosmetics[J]. China Cosmetics, 2016 (7) : 80-82.
[13]Rossi P, Karsenty G, Roberts A B, et al. A nuclear factor 1 binding site mediates the transcriptional activation of a type I collagen promoter by transforming growth factor-β[J]. Cell, 1988, 52 ( 3) :405-414.
[14]Newton V L, Bradley R S, Seroul P, et al. Novel approaches to characterize age-related remodelling of the dermal epidermal junction in 2D, 3D and in vivo[J]. Skin Research and Technology,2016, 23 ( 2) : 131-148.
[15]Marionnet C, Pierrard Cécile, Vioux-Chagnoleau C, et al. Interactions between fibroblasts and keratinocytes in morphogenesis of dermal epidermal junction in a model of reconstructed skin[J]. Journal of Investigative Dermatology, 2006,126 (5) : 971-979.
[16]Laurent Debelle, Alain J.P. Alix, Shao M. Wei, et al. The secondary structure and architecture of human elastin[J].Eur. J.Biochem., 1998, 258: 533-539.
[17]Jason C. Isenburg,Dan T. Simionescu, Naren R. Vyavahare.Elastin stabilization in cardiovascular implants: improvedresistance to enzymatic degradation by treatment with tannic acid[J].Biomaterials, 2004, 25: 3293-3302.
[18]Laurent Duca, Nicolas Floquet, Alain J.P. Alix, et al. Elastin as a matrikine[J]. Crit. Rev. Oncol. Hematol., 2004,49: 235-244.
[19]Laurent Debelle, A.M. Tamburro. Elastin: molecular description and function[J]. Int. J. Biochem. Cell Biol., 1999, 31:261-272.
[20]Basic Components of Connective Tissues and Extracellular Matrix: Fibronectin, Fibrinogen, Laminin, Elastin, Fibrillins, Fibulins,Matrilins, Tenascins and Thrombospondins. Halper J. Adv Exp Med Biol. 2021;1348:105-126.
[21]PKCepsilon Increases Extracellular Elastin and Fibulin-5/DANCE in Dermal Fibroblasts. Nishizaki T.Cell Physiol Biochem. 2018;46(1):291-302
[22]Choi J, Bergdahl A, Zheng Q, et al. Davis EC.Analysis of dermal elastic fibers in the absence of fibulin-5 reveals potential roles for fbulin-5 in elastic fber assembly. Matrix Biol. 2009 May;28(4):211-20.