袁漢文，呂夢(mèng)穎，羅江溢，邱伊星，劉 楊, 2，彭彩云*，王 煒*

基于特征圖譜和一測(cè)多評(píng)法的黃柏質(zhì)量控制研究

袁漢文1，呂夢(mèng)穎1，羅江溢1，邱伊星1，劉 楊1, 2，彭彩云1*，王 煒1*

1. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中醫(yī)藥民族醫(yī)藥國(guó)際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，中巴中醫(yī)藥民族醫(yī)藥研究國(guó)際合作基地，創(chuàng)新藥物研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410208 2. 湖南省食品藥品檢驗(yàn)研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410001

建立能有效區(qū)分黃柏與其易混淆品種關(guān)黃柏的特征圖譜及一測(cè)多評(píng)方法，促進(jìn)黃柏臨床用藥的安全性與有效性。利用HPLC對(duì)黃柏中化學(xué)成分進(jìn)行分析，對(duì)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳色譜條件，建立特征圖譜，利用主成分分析（principal component analysis，PCA）和正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）對(duì)特征圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，篩選和確認(rèn)差異性化合物，以鹽酸小檗堿為參照物，建立一測(cè)多評(píng)方法測(cè)定黃柏主要有效成分含量。所建立的特征圖譜及一測(cè)多評(píng)方法能鑒別黃柏與關(guān)黃柏，以木蘭花堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿以及一未知化合物（7號(hào)峰）為差異性化合物，黃柏中鹽酸小檗堿含量明顯高于關(guān)黃柏，黃柏中鹽酸巴馬汀峰面積極低而關(guān)黃柏中其峰面積較高。黃柏中木蘭花堿的含量較低而未知化合物（7號(hào)峰）峰面積較高。所建立的特征圖譜和一測(cè)多評(píng)方法簡(jiǎn)便，可作為《中國(guó)藥典》修改標(biāo)準(zhǔn)的參考，用于黃柏的質(zhì)量控制。

黃柏；關(guān)黃柏；特征圖譜；一測(cè)多評(píng)；質(zhì)量控制；木蘭花堿；鹽酸巴馬??；鹽酸小檗堿

黃柏為蕓香科黃柏屬植物黃皮樹(shù)Schneid.的干燥樹(shù)皮，其廣泛分布于中國(guó)西南地區(qū)，又習(xí)稱(chēng)“川黃柏”[1-2]。關(guān)黃柏為蕓香科植物黃檗Rupr.的干燥樹(shù)皮[1]。兩者均為常用中藥，其具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡等作用，常用于濕熱瀉痢、黃疸尿赤、帶下陰癢、熱淋澀痛、腳氣痿壁、骨蒸勞熱等癥[3]。《中國(guó)藥典》2000年版及之前各版本《中國(guó)藥典》中“川黃柏”和“關(guān)黃柏”均收載于黃柏項(xiàng)下[4]，而自從《中國(guó)藥典》2005年版開(kāi)始，“川黃柏”和“關(guān)黃柏”被分列為2種藥材[5]。

盡管被《中國(guó)藥典》分列開(kāi)來(lái)，黃柏與關(guān)黃柏的性味與歸經(jīng)及功能與主治相同。兩者中的主要化學(xué)成分均為生物堿，如小檗堿、木蘭花堿、藥根堿等[6-9]。此外，其具有相似的生物活性或藥理作用如抗菌、利尿、調(diào)血壓、降血糖、抗氧化等[10]。因此臨床應(yīng)用上并未特別強(qiáng)調(diào)二者的差別，藥材市場(chǎng)及成方制劑中也存在混用現(xiàn)象[11]。由于地理和歷史的原因，中藥藥材品種混亂，基原復(fù)雜，加之中藥的同名異物或同物異名現(xiàn)象普遍存在，甄別藥材優(yōu)劣、鑒別真?zhèn)巫兊卯惓＠щy[12]。然而，《中國(guó)藥典》目前還沒(méi)有強(qiáng)調(diào)對(duì)同源近屬品種進(jìn)行區(qū)分。而國(guó)際主流藥典，如《美國(guó)藥典》和《歐洲藥典》均注重利用薄層色譜、指紋圖譜或特征圖譜等分析手段，從化學(xué)成分的角度鑒別同源近屬品種，從而達(dá)到甄別真?zhèn)蝺?yōu)劣的目的[13]。

為推動(dòng)黃柏現(xiàn)代化及國(guó)際化進(jìn)程，建立有效的、能被國(guó)際社會(huì)認(rèn)可的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)黃柏臨床用藥的安全性和有效性，本研究利用高效液相色譜（HPLC）建立了黃柏的特征圖譜，并在特征圖譜的基礎(chǔ)上建立了一測(cè)多評(píng)的方法，用于測(cè)定黃柏中黃柏堿、木蘭花堿和小檗堿的含量，闡明黃柏和關(guān)黃柏主要化學(xué)成分差異性。此外，為進(jìn)一步驗(yàn)證和篩選差異性化合物，本研究結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法如主成分分析（principal component analysis，PCA）和正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）對(duì)黃柏和關(guān)黃柏的特征圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較分析。本研究系統(tǒng)闡明了易混淆品種黃柏和關(guān)黃柏的化學(xué)成分的差異性，所建立的特征圖譜和一測(cè)多評(píng)含量測(cè)定方法能準(zhǔn)確區(qū)分兩者，可作為中國(guó)藥典修改標(biāo)準(zhǔn)的參考，用于黃柏的質(zhì)量控制。

1 材料與儀器

1.1 材料

27批黃柏藥材采集于四川（HB-1～HB-15）、湖南（HB-16～HB-22）、廣西（HB-23～HB-27），經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)龔力民副教授鑒定為蕓香科植物黃皮樹(shù)Schneid.的干燥樹(shù)皮；6批關(guān)黃柏藥材分別采集于吉林（GHB-1～GHB-2）、遼寧（GHB-3～GHB-4）和黑龍江（GHB-5～GHB-6），經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)龔力民副教授鑒定為蕓香科植物黃檗Rupr.的干燥樹(shù)皮；對(duì)照品鹽酸小檗堿（批號(hào)ST03070120）、鹽酸巴馬?。ㄅ?hào)ST03040120）、鹽酸黃柏堿（批號(hào)ST08670120）、鹽酸藥根堿（批號(hào)ST03080120）、木蘭花堿（批號(hào)ST15050120）均購(gòu)于上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，所有對(duì)照品質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%；色譜級(jí)甲醇和乙腈購(gòu)于美國(guó)Sigma-Aldrich公司；水為純凈水（華潤(rùn)怡寶飲料有限公司）。

1.2 儀器

Mettler-Toledo AE100S型電子天平（梅特勒-托利多公司）；KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Agilent 1260高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司，配備二極管陣列檢測(cè)器）；Waters e2695高效液相色譜儀（沃特世公司，配備2489 UV/Vis檢測(cè)器）；Waters Atlantis? T3色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，Waters公司）；Agilent 5 TC-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，安捷倫科技有限公司）；Agilent Poroshell EC-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，4 μm，安捷倫科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

黃柏和關(guān)黃柏藥材粉碎后過(guò)四號(hào)篩，取樣品粉末0.25 g，精密稱(chēng)定，置于25 mL錐形瓶中，加10 mL鹽酸甲醇溶液（1∶100），超聲提取30 min，取上清液離心后用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿、木蘭花堿、鹽酸黃柏堿適量，精密稱(chēng)定，置于10 mL量瓶中，用鹽酸甲醇溶液（1∶100）溶解并定容，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液，將其置于4 ℃冰箱中保存，備用。用移液管吸取不同體積的各對(duì)照品溶液，于10 mL量瓶中混合后定容，得到不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，備用。

2.3 色譜條件

色譜柱：Waters Atlantis?T3（沃特世公司， 250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A）和0.3%磷酸-0.3%三乙胺溶液（B）；梯度洗脫：0～25 min，10%～25% A；25～40 min；25%～40% A；40～55 min，40%～95% A；55～65 min，95% A；柱溫20 ℃；體積流量0.8 mL/min；波長(zhǎng)230 nm；進(jìn)樣量2 μL；黃柏和關(guān)黃柏的高效液相色譜圖如圖1所示。

2.4 特征圖譜建立

2.4.1 精密度考察 按“2.1”項(xiàng)下供試品溶液制備方法，制備同一份樣品（HB-1）溶液，吸取2 μL，按“2.3”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次分析，記錄其色譜圖。以9號(hào)峰（鹽酸小檗堿）為參照，計(jì)算各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于1.35%，各色譜峰相對(duì)峰面積的RSD中，只有3號(hào)峰略大于3.00%，為3.04%，其余均小于3.0%，說(shuō)明該方法精密度良好。

1-鹽酸黃柏堿 2-木蘭花堿 8-鹽酸藥根堿 9-鹽酸小檗堿 10-鹽酸巴馬汀

2.4.2 穩(wěn)定性考察 取同一供試品（HB-1）溶液，吸取2 μL，分別于0、2、4、8、12、24 h，按“2.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，記錄其色譜圖。以9號(hào)峰（鹽酸小檗堿）為參照，計(jì)算各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于1.05%，各共有峰相對(duì)峰面積的RSD小于2.88%，該方法穩(wěn)定性良好。

2.4.3 重復(fù)性考察 取同一樣品（HB-1），按“2.1”項(xiàng)下樣品溶液制備方法，平行制備樣品溶液6份，吸取2 μL，按“2.3”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次分析，記錄其色譜圖。以9號(hào)峰（鹽酸小檗堿）為參照，計(jì)算各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于0.17%，各共有峰相對(duì)峰面積的RSD小于2.11%，該方法穩(wěn)定性良好。

2.4.4 耐用性考察 取同一供試品溶液，分別利用3根不同柱子，在2臺(tái)不同儀器按“2.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣分析并記錄其色譜圖。以9號(hào)峰（鹽酸小檗堿）為參照，2號(hào)峰和3號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)的RSD分別為8.60%和8.34%，其余各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于4.97%，盡管1、2號(hào)峰受色譜系統(tǒng)影響較大，但是各色譜峰出峰順序不變。

2.4.5 特征圖譜的建立 按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣分析，記錄各色譜圖。將色譜圖導(dǎo)入國(guó)家藥典委員會(huì)頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004 A版”進(jìn)行匹配，并生成黃柏及關(guān)黃柏的對(duì)照?qǐng)D譜（圖2）。從特征圖譜可看出，關(guān)黃柏中鹽酸小檗堿（9號(hào)峰）的峰面積要明顯低于黃柏。黃柏樣品中鹽酸巴馬汀吸收峰強(qiáng)度十分低，并且部分樣品中無(wú)法檢出鹽酸巴馬汀。此外，可以看出，黃柏中7號(hào)峰的吸收強(qiáng)度大于關(guān)黃柏，而2號(hào)峰的吸收強(qiáng)度相對(duì)較小。即這些成分為鑒別黃柏與關(guān)黃柏的關(guān)鍵成分，將未知樣品的色譜圖與對(duì)照?qǐng)D譜進(jìn)行比較，可定性鑒別黃柏和關(guān)黃柏。

2.5 PCA與OPLS-DA

2.5.1 PCA 將上述特征圖譜峰面積導(dǎo)入Simia-P 14.1進(jìn)行PCA，從其得分圖（圖3）可以看出，黃柏與關(guān)黃柏之間區(qū)分明顯，從而驗(yàn)證了黃柏與關(guān)黃柏之間化學(xué)成分差異較大。其載荷圖中，2、7、9、10號(hào)峰離原點(diǎn)較遠(yuǎn)，表明這些成分對(duì)各樣品在得分圖上的分布影響較大，即黃柏和關(guān)黃柏中這些成分含量的差異性較大，這些成分可作為鑒別黃柏與關(guān)黃柏的標(biāo)志物。

圖2 對(duì)照?qǐng)D譜對(duì)比圖(A) 及黃柏(B) 與關(guān)黃柏(C) 特征指紋圖譜

2.5.2 OPLS-DA 將各樣品特征圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入到Simca-P 14.1中進(jìn)行OPLS-DA，得到其得分圖與變量貢獻(xiàn)度圖（Variable important in projection）。其得分圖中（圖4），黃柏與關(guān)黃柏分布區(qū)分明顯，進(jìn)一步驗(yàn)證了黃柏與關(guān)黃柏化學(xué)成分的差異性，同時(shí)，2、7、9、10號(hào)峰VIP值較大，其中2號(hào)和9號(hào)峰VIP值大于1，進(jìn)一步確認(rèn)了該4個(gè)成分可作為鑒別黃柏與關(guān)黃柏的標(biāo)志物。

2.6 多指標(biāo)成分的測(cè)定

上述已經(jīng)建立區(qū)分黃柏與關(guān)黃柏的方法，但其無(wú)法區(qū)分黃柏樣品質(zhì)量的優(yōu)劣，為了對(duì)黃柏更好地進(jìn)行質(zhì)量控制，在特征圖譜的基礎(chǔ)上，建立了一測(cè)多評(píng)的方法測(cè)定鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸小檗堿3個(gè)主要成分含量。其供試品制備、對(duì)照品溶液制備、色譜條件分別如“2.1”“2.2”“2.3”項(xiàng)下所示。

圖3 PCA得分圖(A) 與載荷圖(B)

圖4 OPLS-DA得分圖(A)與變量貢獻(xiàn)度圖(B)

2.6.1 精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗(yàn) 精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性測(cè)定方法同“2.4”項(xiàng)，記錄鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸小檗堿3個(gè)主要成分的峰面積，并計(jì)算其質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD值。結(jié)果表明，各成分精密度的RSD均小于2.53%、穩(wěn)定性的RSD值均小于1.68%、重復(fù)性的RSD值分別小于1.92%，說(shuō)明該方法穩(wěn)定、可靠。

2.6.2 線(xiàn)性方程、定量限與檢測(cè)限 將對(duì)照品儲(chǔ)備液進(jìn)行稀釋?zhuān)苽?份不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，以峰面積為縱坐標(biāo)（），質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。將對(duì)照品溶液進(jìn)行逐級(jí)稀釋?zhuān)謩e以性噪比的3倍和10倍計(jì)算檢測(cè)限與定量限，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6.3 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一樣品（HB1）9份，分別加入鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸小檗堿高、中、低各3份，按“2.1”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，并按“2.3”項(xiàng)進(jìn)行進(jìn)樣分析，鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸小檗堿加樣回收率在95.0%～106%，RSD小于0.5%，說(shuō)明該方法準(zhǔn)確度良好。

表1 線(xiàn)性方程、檢測(cè)限及定量限結(jié)果

Table 1 Results of linearity, LOD and LOQ

化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)R2線(xiàn)性范圍/(mg·mL?1)檢測(cè)限/(mg·mL?1)定量限/(mg·mL?1) 鹽酸黃柏堿Y＝4 733 X＋0.108 80.998 60.005 376～0.336 0000.001 3440.002 688 木蘭花堿Y＝11 966 X－26.3090.998 60.006 368～0.398 0000.001 5920.003 184 鹽酸小檗堿Y＝9 841.2 X＋7.961 70.998 60.005 696～1.78 0000.001 1390.002 848

2.6.4 一測(cè)多評(píng)方法建立

（1）相對(duì)校正因子計(jì)算：利用上述線(xiàn)性關(guān)系研究中6個(gè)不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液的分析結(jié)果，以鹽酸小檗堿為參照物，按下列公式計(jì)算鹽酸黃柏堿和木蘭花堿的相對(duì)校正因子（RCF），其中s和x分別表示參照化合物和待測(cè)化合物的單位響應(yīng)值，s、x分別為參照化合物與待測(cè)化合物的峰面積，s和x分別為參照化合物和待測(cè)化合物的質(zhì)量濃度。計(jì)算得到鹽酸黃柏堿和木蘭花堿的RCF平均值分別為2.071 6、0.822 1，其RSD分別為2.29%、3.00%。

RCF＝s/x＝(s/s)/(x/x)

（2）耐用性考察：分別利用3根不同色譜柱，在2臺(tái)不同儀器按“2.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣分析并記錄同一混合對(duì)照品溶液色譜圖。以鹽酸小檗堿（9號(hào)峰）為參照，鹽酸黃柏堿和木蘭花堿的RCF平均值分別為2.106 8、0.844 6，其RSD分別為2.43%、0.73%。

2.6.5 樣品含量測(cè)定 所有樣品按“2.1”制備供試品溶液，并按“2.3”項(xiàng)色譜條件重復(fù)進(jìn)樣3次分析，按一測(cè)多評(píng)法計(jì)算含量，取平均值，各批次樣品含量測(cè)定結(jié)果如表2所示，各批次黃柏中鹽酸小檗堿的含量差異較大，為2.34%～6.89%，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯高于關(guān)黃柏（0.77%～1.74%）。除了樣品HB-11為異常樣品外，其余各批次黃柏中總生物堿量（以鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸小檗堿計(jì)）為3.21%～7.70%，明顯高于關(guān)黃柏（1.09%～2.83%）。利用這些特征也可以鑒別黃柏與關(guān)黃柏，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果也說(shuō)明黃柏和關(guān)黃柏中主要化學(xué)成分均為生物堿，其中鹽酸小檗堿含量最高，但是各批次黃柏樣品中鹽酸小檗堿含量差異大，為保證黃柏臨床用藥的有效性，有必要對(duì)黃柏中鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行限定。

表2 各成分含量測(cè)定結(jié)果

Table 2 Content results of each constituent

編號(hào)質(zhì)量分?jǐn)?shù)/% 鹽酸黃柏堿木蘭花堿鹽酸小檗堿合計(jì) HB-10.290.103.563.96 HB-20.260.062.953.27 HB-30.290.113.503.90 HB-40.430.204.805.43 HB-50.470.185.015.66 HB-60.270.073.503.83 HB-70.360.153.113.62 HB-80.360.074.104.54 HB-90.580.176.156.90 HB-100.390.094.575.05 HB-110.240.072.342.66 HB-120.610.206.267.07 HB-130.570.185.756.50 HB-140.560.205.636.39 HB-150.580.085.436.10 HB-160.440.064.334.83 HB-170.500.115.045.65 HB-180.370.054.584.99 HB-190.590.136.186.90 HB-200.690.126.897.70 HB-210.480.194.495.15 HB-220.620.295.786.69 HB-230.430.064.675.16 HB-240.300.042.873.21 HB-250.190.033.203.42 HB-260.490.234.605.31 HB-270.560.295.336.18 GHB-10.270.821.742.83 GHB-20.240.851.452.54 GHB-30.180.650.811.64 GHB-40.230.651.182.06 GHB-50.200.471.362.03 GHB-60.130.190.771.09

3 討論

針對(duì)市場(chǎng)和臨床應(yīng)用中黃柏與關(guān)黃柏存在混用的情況，本實(shí)驗(yàn)建立了能區(qū)分鑒別黃柏與關(guān)黃柏的特征圖譜，并結(jié)合PCA和OPLS-DA，確認(rèn)了黃柏和關(guān)黃柏的差異性化合物為木蘭花堿（2號(hào)峰）、鹽酸小檗堿（9號(hào)峰）、鹽酸巴馬?。?0號(hào)峰）以及一未知化合物（7號(hào)峰），通過(guò)分析特征圖譜中這些化合物的色譜吸收強(qiáng)度可準(zhǔn)確鑒別黃柏和關(guān)黃柏。

此外，本實(shí)驗(yàn)建立的一測(cè)多評(píng)方法可有效測(cè)定黃柏和關(guān)黃柏中主要有效成分鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿和木蘭花堿的含量。27批次黃柏樣品中三者的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2.34%～6.89%、0.19%～0.69%和0.03%～0.29%。黃柏中鹽酸小檗堿的含量明顯高于關(guān)黃柏，其3個(gè)生物堿的總含量也相對(duì)較高。鑒于黃柏和關(guān)黃黃柏中主要有效成分生物堿存在較大差異，兩者的臨床療效應(yīng)該也有所不同，因此，在臨床用藥中，黃柏和關(guān)黃柏應(yīng)區(qū)別使用。

目前對(duì)單一成分的含量測(cè)定已經(jīng)難以滿(mǎn)足質(zhì)量控制的需求，在中藥或植物藥的質(zhì)量控制中，國(guó)際上主流藥典標(biāo)準(zhǔn)均強(qiáng)調(diào)對(duì)其中的多指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定，此外，中藥基原復(fù)雜，中藥要想被國(guó)際主流藥典認(rèn)可并走進(jìn)國(guó)際市場(chǎng)，就必須建立合適的方法對(duì)齊其同源近屬品種進(jìn)行區(qū)分。本實(shí)驗(yàn)建立的黃柏特征圖譜及一測(cè)多評(píng)法能夠在有效的區(qū)分其易混淆品種關(guān)黃柏的同時(shí)，對(duì)其多指標(biāo)活性生物堿進(jìn)行含量測(cè)定，本研究可為黃柏的現(xiàn)代化和國(guó)際化提供參考依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quality control ofbased on HPLC characteristic fingerprint and single standard to determine multi-components method

YUAN Han-wen1, LYU Meng-ying1, LUO Jiang-yi1, QIU Yi-xing1, LIU Yang1, 2, PENG Cai-yun1, WANG Wei1

1. TCM and Ethnomedicine Innovation & Development International Laboratory, Innovative Material Medical Research Institute, School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China 2. Hunan Institute for Food and Drug Control, Changsha 410001, China

To establish HPLC characteristic fingerprint and single standard to determine multi-components methods to effectively distinguish Huangbai () from its confusing species,, so as to promote the efficacy and safety of.HPLC was used to analyze the chemical components from. The chromatographic conditions were optimized, the best chromatographic conditions were determined, and then the characteristic chromatogram was established. The differential compounds were screened and confirmed through PCA and OPLS-DA based on characteristic chromatogram data. Berberine hydrochloride was used as the reference compound to establish a single standard to determine multi-components method for the determination of the main effective components in.The established characteristic profile and the multiple evaluation methods were able to identifyand. Magnoflorine, palmatine hydrochloride, berberine hydrochloride and one unknown compound were identified to be the differential compounds. The level of berberine hydrochloridee was significantly higher inthan in. Berberine hydrochloride was not detected in, but its peak area was high in. The level of magnoflorine inis lower than that in, contrary to the peak area of the unknown compound (peak 7).The methods developed herein were simple and crudible for the discrimination ofand. They therefore can be the references for improving the quality control standard of Chinese Pharmacopoeia when revising the Chinese Pharmacopoeia.

;; characteristic fingerprint; quantitative analysis of multi-components by single marker; quality control; magnoflorine; palmatine hydrochloride; berberine hydrochloride

R286.2

A

0253 - 2670(2022)17 - 5491 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.17.026

2022-02-16

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究重點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)-中藥國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)示范研究（2018YFC1707900）；長(zhǎng)沙市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（kq2014086）；湖南省科學(xué)技術(shù)廳重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2018SK2119）；湖南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2020JJ4064）

袁漢文（1994—），男，助教，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)與分析。Tel: 18711103975 E-mail: hanwyuan@hnucm.edu.cn

彭彩云（1972—），女，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)成分與活性研究。E-mail: caiyunpeng-hucm@qq.com

王 煒（1972—），男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)與資源。E-mail: wangwei402@hotmail.com

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]