郭田甜，關(guān)永霞，張 微，劉震遠(yuǎn)，張 蘭，韓 培，畢艷艷，陳意菲，房兆營，崔海霞

（1.魯南厚普制藥有限公司，山東 臨沂 276000；2.中藥制藥共性技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 臨沂 276000；3.魯南貝特制藥有限公司，山東 臨沂 276000；4.臨沂市蘭山區(qū)市場監(jiān)督管理局，山東 臨沂 276000）

婦科調(diào)經(jīng)片收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》[1]，由當(dāng)歸、川芎、白芍等十味藥材組成，具有養(yǎng)血、止痛、調(diào)經(jīng)之功效，常用于月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)期腹痛等臨床癥狀，適用人群數(shù)量多且治療效果顯著，市場需求量較高[2-3]。

婦科調(diào)經(jīng)片成型工藝過程是由多味藥材提取濃縮的浸膏中加入當(dāng)歸、川芎、醋香附、麩炒白術(shù)等4味藥材的生藥粉，混勻后添加適量潤濕劑制粒，最后加入適量輔料后壓片即得[4-5]。但因婦科調(diào)經(jīng)片為半浸膏片劑，制劑成型過程復(fù)雜，影響片劑制備工藝的因素較多，所以對其成型工藝的優(yōu)化有利于提高藥物生產(chǎn)產(chǎn)業(yè)化效率，改進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量[6]。近年來國內(nèi)外對婦科調(diào)經(jīng)片的研究報(bào)道主要集中在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升和方法改進(jìn)方面，而對其成型工藝優(yōu)化相關(guān)內(nèi)容報(bào)道較少，市場對優(yōu)質(zhì)藥品的需求迫在眉睫，因此優(yōu)化婦科調(diào)經(jīng)片的成型工藝顯得尤為重要[7-9]。

本研究采用響應(yīng)面分析法對婦科調(diào)經(jīng)片制劑成型工藝優(yōu)化，試驗(yàn)以素片的重量差異、脆碎度和崩解時(shí)限三項(xiàng)指標(biāo)綜合評分作為考察目標(biāo)，探究了浸膏相對密度、潤濕劑濃度、物料液固比以及助流劑用量4 個(gè)重要參數(shù)對婦科調(diào)經(jīng)片品質(zhì)的影響，并且對優(yōu)選出的工藝條件下生產(chǎn)的成品進(jìn)行了加速與長期穩(wěn)定性對比研究，明確了婦科調(diào)經(jīng)片最佳成型工藝生產(chǎn)條件，為婦科調(diào)經(jīng)片的批量上市生產(chǎn)提供了一定科學(xué)理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

BT-1001 型智能粉體特性測定儀（丹東百特儀器有限公司）；CJY-300C 型片劑脆碎度測定儀LB-2D型崩解時(shí)限測定儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）；CH-20 型臥式混合機(jī)、YK-140 型搖擺式顆粒機(jī)（丹東市五龍背制藥設(shè)備廠）；ZPT-20 型旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)（遼寧天用于億機(jī)械有限公司）；HE83 型快速水分測定儀［梅特勒-托利多科技（中國）有限公司］；ZSH-100B 型恒溫恒濕箱（上海偵翔機(jī)電科技有限公司）。

1.2 試藥

當(dāng)歸（批號：190311）、川芎（批號：190313）、醋香附（批號：190425）、麩炒白術(shù)（批號：190427）、白芍（批號：190410）、赤芍（批號：190405）、醋延胡索（批號：190402）、熟地黃（批號：190520）、大棗（批號：190518）、甘草（批號：190305）均來源于魯南厚普制藥有限公司，經(jīng)魯南厚普制藥有限公司質(zhì)檢中心高級工程師范建偉鑒定為正品。藥用輔料：羧甲基淀粉鈉（批號：20181202）、硬脂酸鎂（批號：20190122）均購于曲阜市天利藥用輔料有限公司，淀粉（批號：20181109）購于山東聊城阿華制藥股份有限公司，綠色胃溶型薄膜包衣預(yù)混劑（批號：190627）購于上海新菲爾生物制藥工程技術(shù)有限公司；阿魏酸對照品（批號：190315-1，純度：99.0%），芍藥苷對照品（批號：190124-4，純度：99.0%）均購于中國食品藥品檢定研究院；甲醇（色譜純）購于安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰?；水為超純水?/p>

1.3 婦科調(diào)經(jīng)片成型工藝

1.3.1 浸膏的制備 取“1.2”項(xiàng)下十味藥材，其中麩炒白術(shù)、醋延胡索、當(dāng)歸、川芎粉碎成細(xì)粉過篩；其余醋香附等六味加水煎煮二次，第一次3 h，第二次2 h，濾過，合并濾液，濃縮至浸膏，備用[10]。

1.3.2 顆粒的制備 加入麩炒白術(shù)等細(xì)粉，將浸膏與填充劑淀粉混勻，以適量乙醇做潤濕劑制軟材，混勻，用14 目篩制濕顆粒，60℃以下干燥，16 目篩整粒，計(jì)算顆粒的合格率[10]。

1.3.3 片劑的制備 整粒后的顆粒加入崩解劑羧甲基淀粉鈉、助流劑硬脂酸鎂，壓片，片重0.31 g，包薄膜衣[10]。

1.4 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)明確婦科調(diào)經(jīng)片成型主要影響因素分別為浸膏相對密度、潤濕劑濃度、物料液固比、助流劑用量4 項(xiàng)，試驗(yàn)結(jié)果初步給出了各指標(biāo)參數(shù)范圍，其中浸膏相對密度為1.10 ～ 1.30 g/mL，潤濕劑濃度為70% ～ 90%，物料液固比20% ～ 40%，助流劑用量0.2% ～ 1.0%，由此設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)，見表1。單因素試驗(yàn)時(shí)固定其余參數(shù)恒定均取范圍中值，依次將浸膏相對密度（A）、潤濕劑濃度（B）、物料液固比（C）、助流劑用量（D）作為考察因素，分別選取5 個(gè)響應(yīng)面水平來研究對壓片成型綜合評分的影響。

表1 單因素試驗(yàn)因素水平與編碼Tab. 1 Level of test factors and codes

1.5 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)以婦科調(diào)經(jīng)片的重量差異、脆碎度、崩解時(shí)限三項(xiàng)指標(biāo)綜合評分作為片劑成型工藝評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，明確重量差異、脆碎度、崩解時(shí)限的權(quán)重分別為0.4、0.3、0.3。經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)與《中國藥典》要求給出評分梯度范圍，具體見表2。

表2 片劑成型品質(zhì)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)Tab. 2 Evaluation standard of tablet forming quality

根據(jù)響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理和單因素試驗(yàn)結(jié)果，篩選浸膏相對密度（A）、潤濕劑濃度（B）、物料液固比（C）、助流劑用量（D）4 個(gè)影響因素，以綜合評分作為響應(yīng)值，各取三個(gè)水平進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，試驗(yàn)因素與水平見表3。

表3 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平與編碼Tab. 3 Level of test factors and codes

1.6 穩(wěn)定性考察

1.6.1 加 速 試 驗(yàn) 取 樣 品（ 批 號：190912、191017、191103）在加速條件下［溫度：（40 ± 2）℃，濕度：（75 ± 5）%］放置6 個(gè)月，分別于0、1、2、3、4、5、6 個(gè)月取樣檢測，考察吸濕率、崩解時(shí)限、阿魏酸含量、芍藥苷含量和微生物限度指標(biāo)變化情況。

1.6.2 長 期 試 驗(yàn) 取 樣 品（ 批 號：190912、191017、191103）在常規(guī)條件下［溫度：（25 ± 2）℃，濕度：（60 ±10）%］放置24 個(gè)月，分別于0、3、6、9、12、18、24 個(gè)月取樣檢測，考察吸濕率、崩解時(shí)限、阿魏酸含量、芍藥苷含量和微生物限度指標(biāo)變化情況。

1.7 指標(biāo)測定

1.7.1 重量差異的測定 取20 片婦科調(diào)經(jīng)片，精密稱定后求平均片重，經(jīng)精密稱定得到每片的片重后，平均片重與每片的片重相比，超出重量差異限度±5%的不多于2 片，超出限度1 倍的不能出現(xiàn)[11]。

1.7.2 脆碎度的測定 取總重量小于等于6.5 g 的婦科調(diào)經(jīng)片若干片，使用吹風(fēng)機(jī)將片劑表面的粉末吹去，精密稱重后置于脆碎度測定儀的圓筒中，轉(zhuǎn)動(dòng)100 次。取出后再吹去片劑表面的粉末，精密稱重后，減失重量不大于1%，且不得檢出龜裂、斷裂及粉碎[12]。

1.7.3 崩解時(shí)限的測定 隨機(jī)取樣品12 片，均勻放置于吊籃玻璃孔內(nèi)，加水適量，淹沒過藥片上部0.5 cm，蓋上內(nèi)蓋，防止樣品溢出，開啟崩解儀測定崩解時(shí)限[13]。

1.7.4 吸濕率的測定 將適量氯化鈉飽和溶液放于玻璃干燥器底部，將干燥器于25 ℃、相對濕度75%的環(huán)境中放置1 d，取樣品12 片平鋪于質(zhì)量恒定的稱量瓶內(nèi)，開蓋放在玻璃干燥器中定時(shí)稱質(zhì)量，按以下公式計(jì)算吸濕率[14]。

1.7.5 阿魏酸含量測定 （1） 色譜條件 Agilent ZORBAX Extend-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.3%磷酸溶液（18.5 ∶81.5）；柱溫：50 ℃；流速：0.8 mL/min；檢測波長：320 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

（2） 對照品溶液的制備 取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加50%乙醇制成每1 mL 含5 μg 的溶液，即得。

（3） 供試品溶液的制備 分別取本品20 片（批號：190912、191017、191103），除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，超聲處理（功率：320 W，頻率：40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

（4） 供試品含量的測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得[15]，見圖1。

1.7.6 芍藥苷含量測定 （1） 色譜條件Agilent ZORBAX Extend-C18柱 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14 ∶86）；柱溫：50 ℃；流速：0.8 mL/min；檢測波長：230 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

（2） 對照品溶液的制備 取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含45 μg 的溶液，即得。

（3） 供試品溶液的制備 分別取本品20 片（批號：190912、191017、191103），除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶，精密加入水50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率：320 W，頻率：40 kHz）15 min，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，精密量取上清液25 mL，置分液漏斗中，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次15 mL，合并正丁醇，蒸干，殘?jiān)酉∫掖歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL 容量瓶，加稀乙醇至刻度，搖勻，即得。

（4） 供試品含量的測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得[16]，見圖2。

1.7.7 微生物限度的測定 固體制劑微生物限度測定參考2020 年版《中國藥典》（四部）中的方法，細(xì)菌總數(shù)檢出量≤103cfu/g，霉菌與酵母菌總數(shù)檢出量≤102cfu/g，致病菌不得檢出，即判定為合格[17]。

1.8 數(shù)據(jù)分析

利用Design-Expert 10.0 以及Excel 軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，每個(gè)樣品3 次重復(fù)，取平均值。

2 結(jié)果

2.1 單因素試驗(yàn)

經(jīng)單因素試驗(yàn)可知，浸膏相對密度、物料液固比與潤濕劑濃度直接影響物料的粘性大小，顆粒粒徑受物料粘性制約，從而影響片劑的成型[18]。浸膏相對密度較大，物料液固比較小，潤濕劑濃度偏低時(shí)，軟材較為松散，顆粒粒徑偏小、細(xì)粉多，粉體之間分子引力作用增大，導(dǎo)致粉體顆粒流動(dòng)性變差，從而對片劑裝量差異和片劑崩解時(shí)限產(chǎn)生影響；浸膏相對密度較小，物料固液比較大或潤濕劑濃度偏高時(shí)，軟材粘性大，顆粒粒徑偏大，也會(huì)對片劑裝量差異和崩解時(shí)限產(chǎn)生影響。助流劑用量過少時(shí)，顆粒流動(dòng)性差，對裝量差異產(chǎn)生影響，反之，則會(huì)由于硬脂酸鎂的疏水性導(dǎo)致崩解變遲緩，從而綜合評分降低。由圖3 可知，浸膏相對密度為1.20 g/mL、潤濕劑濃度為80%、物料液固比為30%、助流劑用量為0.6%時(shí)各組綜合評分最高，各在此基礎(chǔ)上取上下浮動(dòng)兩個(gè)水平進(jìn)行后續(xù)響應(yīng)面分析試驗(yàn)。

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用Design Expert 10.0 軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次響應(yīng)面回歸分析，得到的綜合評分（Y）與各因變量的模擬方程為：Y= 91.46 + 1.97A- 2.67B+ 2.32C+1.83D+ 0.33AB+ 0.65AC+ 1.65AD+ 1.22BC- 0.65BD-2.52CD- 8.03A2- 3.52B2- 11.39C2- 7.26D2。見表4。

表4 響應(yīng)面試驗(yàn)方案及結(jié)果Tab. 4 Response surface test scheme and results

2.3 回歸模型顯著性檢驗(yàn)及方差分析

由表5 可知，回歸模型處在極顯著水平，P＜0.001，表明該模型顯著回歸，方程可以正確表明綜合評分與各因素關(guān)系[19]。多元相關(guān)系數(shù)R2為0.897 8，表明實(shí)測值和預(yù)測值間擬合度很高。表中失擬項(xiàng)P值（0.213 6）＞0.05，表示極不顯著，證明了該回歸模型與試驗(yàn)擬合度極高。根據(jù)F值可以看出影響綜合評分因素的主次順序?yàn)椋簼櫇駝舛龋疚锪弦汗瘫龋窘嘞鄬γ芏龋局鲃┯昧俊?/p>

表5 響應(yīng)面二次回歸模型方差分析Tab. 5 Response surface quadratic regression model analysis of variance

2.4 響應(yīng)曲面及等高線分析

等高線圖和響應(yīng)面圖可以直觀的反應(yīng)出各因素交互作用對婦科調(diào)經(jīng)片制劑綜合評分的影響[20]。由圖4a 可知，浸膏相對密度與物料液固比的交互作用對綜合評分的影響與4b、4c 組比較相對較為顯著，這與二次回歸模型方差分析結(jié)果一致。各組中兩因素的交互作用均在水平0 左右時(shí)取得峰值，這可能是因?yàn)楫?dāng)浸膏相對密度過高，物料液固比小及助流劑用量較少時(shí)會(huì)導(dǎo)致物料堅(jiān)硬緊實(shí)、粘性差，壓片后易皸裂，反之這些因素取值過高則會(huì)導(dǎo)致物料松散，成粒性差，擠壓難以成片。

2.5 工藝驗(yàn)證

根據(jù)Design Expert 10.0 軟件優(yōu)化出響應(yīng)面最優(yōu)解為浸膏相對密度1.192 5 g/mL、潤濕劑濃度78.28%、物料液固比30.415%、助流劑用量0.644 6%。根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)條件將工藝參數(shù)優(yōu)化為浸膏相對密度1.20 g/mL、潤濕劑濃度80%、物料液固比30%、助流劑用量0.6%。此條件下制備3 批婦科調(diào)經(jīng)片素片，試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表6。試驗(yàn)結(jié)果與理論預(yù)測值相比相對誤差小于0.05%，表明婦科調(diào)經(jīng)片成型工藝條件參數(shù)準(zhǔn)確可靠，具有實(shí)際生產(chǎn)價(jià)值。

表6 婦科調(diào)經(jīng)片成型工藝結(jié)果驗(yàn)證Tab. 6 Validation of molding process results of gynecological menstruation tablets

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取婦科調(diào)經(jīng)片素片（批號：190912、191017、191103）進(jìn)行薄膜包衣后開展加速與長期穩(wěn)定性試驗(yàn)，結(jié)果見表7、8。數(shù)據(jù)表明試驗(yàn)期結(jié)束時(shí)片劑外觀性狀表現(xiàn)為平整、光滑，未出現(xiàn)裂紋、碎片等現(xiàn)象，檢測藥片的吸濕率、崩解時(shí)限、阿魏酸苷含量、芍藥苷含量以及微生物限度也均在2020 年版《中國藥典》要求范圍內(nèi)，藥品符合規(guī)定。

表7 穩(wěn)定性加速試驗(yàn)結(jié)果Tab. 7 Stability accelerated test results

表8 穩(wěn)定性長期試驗(yàn)結(jié)果Tab. 8 Long-term stability test results

續(xù)表8

3 討論

為了有效提高婦科調(diào)經(jīng)片藥品質(zhì)量及發(fā)揮其最佳藥用價(jià)值，同時(shí)提升車間產(chǎn)能以滿足廣泛的市場需求。本試驗(yàn)利用響應(yīng)面法對婦科調(diào)經(jīng)片成型工藝進(jìn)行了優(yōu)化，該方法能夠有效解決多因素的試驗(yàn)設(shè)計(jì)問題，優(yōu)選出最佳生產(chǎn)條件參數(shù)，此條件下生產(chǎn)的藥物與優(yōu)化前的工藝相比，可操作性、重復(fù)性強(qiáng)，藥物有效成分檢出量高，有效延長了藥物保質(zhì)期。經(jīng)優(yōu)化后驗(yàn)證的三批藥品檢測結(jié)果與理論預(yù)測值相似，藥品在后期加速及長期穩(wěn)定性試驗(yàn)中外觀性狀、吸濕率、崩解時(shí)限、阿魏酸、芍藥苷含量及微生物限度等指標(biāo)均符合2020 年版《中國藥典》要求。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)利用響應(yīng)面法優(yōu)化出的婦科調(diào)經(jīng)片成型工藝條件參數(shù)準(zhǔn)確、可靠，與前人進(jìn)行的研究相比，此工藝條件的應(yīng)用顯著提高了車間生產(chǎn)效率，擴(kuò)大了車間生產(chǎn)批次量，為婦科調(diào)經(jīng)片的生產(chǎn)上市提供了理論依據(jù)的支持與實(shí)際生產(chǎn)的保障。另外，本研究主要考察的內(nèi)容為婦科調(diào)經(jīng)片素片成型工藝，而對后期包衣條件的篩選未進(jìn)行深入研究，為了進(jìn)一步優(yōu)化生產(chǎn)工藝，提高車間生產(chǎn)效率，后續(xù)可以繼續(xù)開展婦科調(diào)經(jīng)片包衣工藝條件優(yōu)化的相關(guān)試驗(yàn)研究。