楊朝輝，馬雪連,王 凡，易鵬飛，吳 靜，馮夢迪，陳玉珠，孫亞偉，吾買爾江·牙合甫，王 勝，許建標(biāo)，鐘 旗，周振勇，姚 剛

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，烏魯木齊 830052；2.新疆刀郎陽光農(nóng)牧科技股份有限公司，麥蓋提 844600；3.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，烏魯木齊 830000；4.新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，烏魯木齊 830011)

犢牛成活率是制約養(yǎng)牛業(yè)生產(chǎn)效益的關(guān)鍵基礎(chǔ)環(huán)節(jié)[1-2]。新生犢牛被動免疫轉(zhuǎn)移失敗(failure of passive transfer,FPT)或被動免疫不當(dāng)(inadequate transfer of passive immunity,ITPI)會導(dǎo)致犢牛發(fā)病率和死亡率增加以及后期生產(chǎn)力的下降[3]。被動免疫在抵抗外來病原微生物入侵、促進免疫系統(tǒng)發(fā)育等方面發(fā)揮著重要作用[4-5]。由于牛胎盤是結(jié)締絨毛膜胎盤，免疫球蛋白和大分子物質(zhì)不能通過胎盤進入胎兒血液循環(huán)系統(tǒng)，導(dǎo)致胎兒無法獲得抗體，新生犢牛需要采食初乳獲得被動免疫，抵抗外界病原[6]。初乳中含有免疫球蛋白、生長因子、細(xì)胞因子、非特異性抗菌因子和營養(yǎng)物質(zhì)等[7]，不當(dāng)?shù)某跞楣芾砜赡軙绊懗跞橹械拿庖叱煞旨盃I養(yǎng)物質(zhì)等，進而影響新生犢牛的免疫狀態(tài)和生長發(fā)育情況[8-9]。FPT犢牛在出生后的前6個月內(nèi)死亡的可能性是被動免疫成功犢牛的3～6倍[10-11]。Jaster[12]研究表明，攝取84 mg/mL免疫球蛋白G(IgG)初乳的犢牛比攝取31.2 mg/mL IgG初乳的犢牛有更高的IgG和血清總蛋白。攝入足量高質(zhì)量的免疫球蛋白對建立被動免疫至關(guān)重要[13]。血清總蛋白含量可以反映機體蛋白質(zhì)代謝能力和機體免疫狀態(tài)[14]。犢牛被動免疫評估，即新生犢牛采食初乳后，采集血清測定免疫球蛋白或總蛋白含量，評定被動免疫情況[15]，當(dāng)血清中免疫球蛋白的含量低于10 g/L或總蛋白含量低于55 g/L時，就被認(rèn)為是FPT[16]。新生犢牛出生后未能及時獲得充裕的富含高質(zhì)量免疫球蛋白的初乳從而導(dǎo)致FPT，使發(fā)病率和死亡率增高，甚至影響6月齡至周歲牛[17]。FPT是新生犢?；挤窝缀透篂a的重要危險因素[18-19]。因此，經(jīng)初乳傳遞的被動免疫對新生犢牛有極其重要的作用，與奶犢牛相比，影響肉犢牛被動免疫及其相關(guān)因素的研究相對較少。近幾年新疆引進安格斯肉牛養(yǎng)殖日益增加，但新生安格斯?fàn)倥１粍用庖咝Ч皩?dǎo)致FPT的原因鮮見報道，影響了安格斯?fàn)倥５纳a(chǎn)效率。本研究擬對新疆某安格斯母牛初乳產(chǎn)量、主要營養(yǎng)成分及免疫球蛋白濃度進行測定，并對其新生犢牛被動免疫情況進行評估，以期為指導(dǎo)生產(chǎn)實踐中新生犢牛初乳飼喂提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計及分組

試驗在新疆某安格斯肉牛繁育場進行。隨機選取健康的安格斯待產(chǎn)初產(chǎn)母牛(24月齡)和經(jīng)產(chǎn)(3胎)母牛(36～48月齡)各15頭，以及其新生初產(chǎn)犢牛和經(jīng)產(chǎn)犢牛各15頭，產(chǎn)犢后立即進行人工擠奶，測定初乳產(chǎn)量(產(chǎn)犢后初次擠乳量)，取約50 mL乳樣用于乳成分及免疫球蛋白濃度測定，隨后將剩余的初乳2 h內(nèi)回喂給新生犢牛，其余時間犢牛自然吮乳；犢牛出生后立即測定初生重，并采集血樣用于血清總蛋白及生理生化指標(biāo)測定。由于經(jīng)產(chǎn)母牛護犢行為格外強烈，導(dǎo)致3頭母牛初乳及其新生犢牛血樣未采集到，故相應(yīng)測定結(jié)果的樣本量為12頭。待產(chǎn)母牛均按牧場飼養(yǎng)管理方式管理，分別在09：00及18：00飼喂飼糧，自由飲水。

1.2 主要儀器

乳成分分析儀(UL40BC)購自南京銘奧儀器設(shè)備有限公司；Brix折射儀(MC2-1)購自禹城田園信科光學(xué)儀器有限公司；血液細(xì)胞分析儀(XFA6030)購自南京普朗醫(yī)用設(shè)備有限公司；血液生化儀(Catalyst one)購自北京益仁恒業(yè)科技有限公司。

1.3 樣品采集

初乳采集：母牛產(chǎn)犢后1 h內(nèi)人工擠奶，無菌管收集初乳樣于―20 ℃保存，用于乳成分及免疫球蛋白濃度(2 h內(nèi))測定。

血樣采集：犢牛出生后尚未吃初乳時(0 h)和攝食初乳后(24～36 h)頸靜脈采集血樣，抗凝血于4 ℃保存，用于血液生理指標(biāo)檢測；全血分離血清后于液氮保存，用于血清總蛋白檢測。

1.4 檢測指標(biāo)及方法

1.4.1 初乳營養(yǎng)成分和理化指標(biāo) 使用乳成分分析儀測定乳營養(yǎng)成分和乳理化性質(zhì)：主要測定乳蛋白、乳脂、非脂乳固體、灰分、乳糖、電導(dǎo)率、pH、密度。具體方法為：預(yù)熱乳成分分析儀，旋開蓄液筒帽，將清洗液和35～40 ℃蒸餾水加入蓄液筒，手動清洗乳成分分析儀直至洗凈；將乳樣置于室溫融化，待乳樣表面無結(jié)膜和凝結(jié)掛壁時，輕輕充分搖勻，避免產(chǎn)生氣泡，置于分析儀上進行檢測；檢測后經(jīng)進樣管吐出的乳樣棄之不用。每檢測完1個樣品，用35～40 ℃蒸餾水清洗儀器。取一杯蒸餾水放在進樣管口，使用“自動清洗”功能，自動清洗2個循環(huán)。

1.4.2 初乳中免疫球蛋白濃度測定 使用Brix折射計進行測定，開機后選擇免疫球蛋白濃度測定模式(S01)，在滴液口滴入0.2～0.3 mL樣品后蓋遮光蓋測量。判定標(biāo)準(zhǔn)為Brix值>22%為合格[20]。

1.4.3 犢牛血清總蛋白測定 使用Brix折射計測定0、24～36 h犢牛血清總蛋白濃度，開機后選擇血清總蛋白測定模式(S02)，在滴液口滴入0.2～0.3 mL樣品后蓋遮光蓋測量。判定標(biāo)準(zhǔn)為TP值低于55 g/L為FPT。

1.4.4 生理生化指標(biāo)測定 使用血液細(xì)胞分析儀測定24～36 h血樣中白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、中間細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞比值、中間細(xì)胞比值、中性粒細(xì)胞比值、紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞平均體積、平均紅細(xì)胞血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞分布寬度、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)、血小板數(shù)、血小板壓積和血小板平均體積。使用血液生化儀測定24～36 h血樣中血糖、肌酐、血尿素氮、磷離子、鈣離子、白蛋白、球蛋白、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、總膽紅素及膽固醇含量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用統(tǒng)計學(xué)軟件GraphPad Prism 8.0進行非配對Welch’ sttest差異顯著性檢驗并作圖。數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P<0.05表示差異顯著；P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 初產(chǎn)母牛與經(jīng)產(chǎn)母牛的初乳產(chǎn)量

由圖1可知，初產(chǎn)母牛初乳產(chǎn)量(637 mL)極顯著低于經(jīng)產(chǎn)母牛初乳產(chǎn)量(2 421 mL)(P<0.01)。

**，差異極顯著(P<0.01)。圖3同

2.2 初產(chǎn)母牛和經(jīng)產(chǎn)母牛初乳的主要營養(yǎng)成分和理化特性

由表1可知，初產(chǎn)母牛初乳中乳蛋白、非脂乳固體、乳糖和灰分含量，以及密度和電導(dǎo)率均極顯著高于經(jīng)產(chǎn)母牛(P<0.01)，其余指標(biāo)均無顯著差異(P>0.05)。

表1 初產(chǎn)母牛和經(jīng)產(chǎn)母牛初乳的營養(yǎng)成分和理化指標(biāo)

2.3 初乳免疫球蛋白濃度及合格率

由表2可知，初產(chǎn)母牛和經(jīng)產(chǎn)母牛初乳(產(chǎn)后1 h內(nèi))免疫球蛋白濃度分別為28.72%和26.24%，合格率分別為93.33%和91.67%，差異均不顯著(P>0.05)。

表2 初產(chǎn)母牛和經(jīng)產(chǎn)母牛初乳免疫球蛋白濃度及合格率

2.4 初產(chǎn)犢牛和經(jīng)產(chǎn)犢牛被動免疫效果評估

由圖2可知，15頭初產(chǎn)犢牛被動免疫失敗5頭，失敗率為33.3%(5/15)；12頭經(jīng)產(chǎn)犢牛被動免疫失敗3頭，失敗率為25.0%(3/12)。

A，0 h血清總蛋白含量；B，24～36 h血清總蛋白含量

2.5 初產(chǎn)犢牛和經(jīng)產(chǎn)犢牛初生重

由圖3可知，初產(chǎn)犢牛和經(jīng)產(chǎn)犢牛的平均初生重分別為31.15和37.74 kg，而被動免疫成功犢牛和被動免疫失敗犢牛的平均初生重分別為35.97和29.6 kg，均存在極顯著差異(P<0.01)。

A，初產(chǎn)犢牛和經(jīng)產(chǎn)犢牛初生重；B，被動免疫成功和被動免疫失敗犢牛初生重

2.6 初產(chǎn)犢牛和經(jīng)產(chǎn)犢牛血液生理生化指標(biāo)

由表3、4可知，被動免疫失敗犢牛紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差顯著高于被動免疫成功犢牛(P<0.05)，被動免疫成功犢牛初乳中球蛋白含量極顯著高于被動免疫失敗犢牛(P<0.01)，其余指標(biāo)無顯著差異(P>0.05)。

表3 初產(chǎn)犢牛和經(jīng)產(chǎn)犢牛血液生理指標(biāo)

表4 初產(chǎn)犢牛和經(jīng)產(chǎn)犢牛血液生化指標(biāo)

3 討 論

3.1 安格斯?fàn)倥１粍用庖咝Чu價

新生犢牛在出生后24 h內(nèi)采食足量的初乳能顯著降低發(fā)病率和死亡率[21]。美國奶犢牛FPT的發(fā)生率為19%，斷奶前犢牛的死亡率在10%左右，且有超過40%的犢牛在出生后24～48 h內(nèi)血清IgG濃度低于10 g/L，25%以上的犢牛血清IgG濃度低于6.2 g/L[22]。Altvater-Hughes等[23]研究發(fā)現(xiàn)，荷斯坦?fàn)倥＜半s交肉牛FPT均達到16%。本研究對安格斯?fàn)倥５谋粍用庖咔闆r進行評估，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)PT率為29.6%，初產(chǎn)犢牛和經(jīng)產(chǎn)犢牛被動免疫失敗率分別為33.3%和25.0%，相比之下該牧場犢牛FPT率較高。提示該牧場FPT率及潛在風(fēng)險較高，不同胎次FPT率不同，需改善犢牛初乳飼喂方式以及關(guān)注初產(chǎn)犢牛的初乳飼喂。

3.2 安格斯母牛初乳質(zhì)量及產(chǎn)量測定

FPT與初乳的產(chǎn)量、質(zhì)量及泌乳胎次等原因均有關(guān)聯(lián)[24-25]。本研究對不同胎次安格斯母牛產(chǎn)后首次初乳平均產(chǎn)量及免疫球蛋白濃度進行測定，結(jié)果顯示，初產(chǎn)母牛初乳產(chǎn)量極顯著低于經(jīng)產(chǎn)母牛，免疫球蛋白濃度相近，低于王祥等[26]測定的荷斯坦牛產(chǎn)后首次初乳平均產(chǎn)量，與Meikle等[27]所測初產(chǎn)母牛產(chǎn)奶量低于經(jīng)產(chǎn)母牛的結(jié)果相符，高于安濤[28]測定的中國荷斯坦牛初乳免疫球蛋白濃度。這可能與母牛品種及胎次不同有關(guān)，但提示其產(chǎn)量不足，應(yīng)重點關(guān)注初產(chǎn)犢牛采食初乳量，必要時進行補飼，降低FPT發(fā)生的可能性。

研究表明，初乳免疫球蛋白濃度隨著胎次增加而增加。Weaver等[29]就多位學(xué)者針對奶牛產(chǎn)犢胎次對初乳品質(zhì)影響的研究結(jié)果進行分析，認(rèn)為第1和2胎次奶牛產(chǎn)犢后初乳中免疫球蛋白含量并沒有顯著差異，但3胎及更高胎次奶牛產(chǎn)犢后初乳中免疫球蛋白含量更高，與本試驗結(jié)果不同。Alves等[25]研究表明，經(jīng)產(chǎn)母牛初乳中免疫球蛋白含量高于初產(chǎn)母牛，但差異不顯著，與本試驗結(jié)果相似。究其原因可能與品種及飼養(yǎng)管理環(huán)境不同有關(guān)，對于不同胎次安格斯肉牛初乳中免疫球蛋白含量的變化應(yīng)展開進一步研究。

酪蛋白在初乳蛋白質(zhì)中約占80%，在一定條件下酪蛋白可沉淀為乳清蛋白[30]，乳清蛋白中含有大量的免疫因子、生長因子和酶等成分[31]。有研究報道，乳清蛋白可以刺激機體免疫系統(tǒng)，提供大量必需氨基酸，增強機體抵抗力[30]。乳脂肪為機體提供能量，可維持機體的葡萄糖動態(tài)平衡，在胃腸道中消化產(chǎn)生的游離脂肪酸也能抵抗外界病原[32]。乳糖是初乳中主要的碳水化合物，可為機體提供熱能，促進新陳代謝及微量元素的吸收，還可抑制腸內(nèi)致病菌的繁殖[33]。本研究對初乳中主要成分及理化特性進行檢測，結(jié)果顯示，初產(chǎn)母牛初乳中乳蛋白、非脂乳固體、乳糖、灰分含量及密度、電導(dǎo)率均極顯著高于經(jīng)產(chǎn)母牛。本試驗所測結(jié)果與Kovács等[34]所測安格斯牛初乳成分相比，乳糖及pH較高，乳脂含量略低。乳糖和pH增高可能會增加新生犢牛腹瀉率，且適口性不好不利于犢牛自然采食初乳[35]，乳脂低可能會導(dǎo)致能量攝入不足不利于后期生長發(fā)育[36]。初產(chǎn)犢牛被動免疫成功率低于經(jīng)產(chǎn)犢牛的原因可能是：雖然初產(chǎn)母牛的初乳質(zhì)量較高，但產(chǎn)量過低，犢牛無法獲得足量初乳而導(dǎo)致FPT。Jaster等[12]研究也表明，初乳攝入不足的犢牛FPT的可能性會更高。

3.3 安格斯?fàn)倥３跎丶把荷砩笜?biāo)測定

初生重和活力程度是新生犢牛的關(guān)鍵生存特征，初乳的采食量及對初乳的吸收率也會受其影響，無論是自然采食初乳還是人工飼喂初乳，新生幼畜必須具有足夠的活力，能夠盡快找到乳頭并采食初乳[37-38]。據(jù)報道，體重較高的羔羊比體重較輕的羔羊站立和找到乳房的時間更短，而體重較高的仔豬出生后采食初乳的時間更早[39]；較高體重的犢牛能攝入更多初乳以保證被動免疫成功[38]；初生重較大的仔豬在采食初乳時占據(jù)優(yōu)勢，能采食到更多初乳[40]。本研究對犢牛初生重進行記錄分析，初產(chǎn)犢牛體重顯著低于經(jīng)產(chǎn)犢牛，被動免疫成功犢牛體重顯著高于被動免疫失敗犢牛。提示體重不足的弱犢?？赡軙驗闊o法獲得足量初乳或?qū)Τ跞槲漳芰Σ疃鴮?dǎo)致FPT。

紅細(xì)胞分布寬度(RDW)反映了紅細(xì)胞體積大小的變異系數(shù)[41]，有研究報道，RDW上升與機體缺鐵有關(guān)[42-43]。本研究中，被動免疫失敗犢牛RDW標(biāo)準(zhǔn)差顯著高于被動免疫成功犢牛，被動免疫成功犢牛球蛋白含量極顯著高于被動免疫失敗犢牛，而初乳中含有大量乳鐵蛋白及球蛋白，提示FPT犢牛的初乳攝入不足。在英國動物福利法中，為確保犢牛能夠采食足量初乳，犢牛出生后1 d內(nèi)應(yīng)被存留于母牛身邊采食初乳。盡管如此，還是有相當(dāng)比例的犢牛被動免疫失敗，據(jù)估計30%～40%的犢牛即使在出生后的12～26 h內(nèi)被留在圈舍中也會發(fā)生FPT[7]。McGee等[44]研究發(fā)現(xiàn)，給新生犢牛飼喂出生體重5%的初乳，6～8 h后再補飼一定量初乳能確保其獲得充足的被動免疫。建議該牧場在犢牛出生后派專人看管，觀察犢牛自然采食初乳情況，確保在一些環(huán)境因素影響下及弱犢牛也能及時足量采食初乳。

4 結(jié) 論

新疆安格斯?fàn)倥PT可能與母牛初乳產(chǎn)量低導(dǎo)致新生犢牛初乳攝入不足密切相關(guān)。初生重較低的犢牛FPT的風(fēng)險性較高。因此，應(yīng)加強圍產(chǎn)期母牛飼養(yǎng)管理與營養(yǎng)，提高初乳產(chǎn)量和質(zhì)量。