蔣潔蘭，陳佳宜，林小平，葉 樂，王海山，毛明光

(1.海南熱帶海洋學(xué)院 崖州灣創(chuàng)新研究院，海南 三亞 572022；2.海南熱帶海洋學(xué)院 熱帶海洋生物資源利用與保護(hù)教育部重點實驗室，海南 三亞 572022；3.海南熱帶海洋學(xué)院 海南省熱帶海洋漁業(yè)資源保護(hù)與利用重點實驗室，海南 三亞 572022；4.海南熱帶海洋學(xué)院 水產(chǎn)與生命學(xué)院，海南 三亞 572022)

羅非魚為廣鹽性魚類，能在淡水中養(yǎng)殖，也能生活在不同鹽度的咸水中。與淡水養(yǎng)殖相比，咸水養(yǎng)殖可改善羅非魚的肌肉品質(zhì)及口感、風(fēng)味。我國沿海地區(qū)存在面積廣泛的受海水侵蝕形成的鹽堿地和鹽水湖，受開發(fā)技術(shù)和養(yǎng)殖品種限制，未能得到有效利用。吉富羅非魚是現(xiàn)有養(yǎng)殖尼羅羅非魚中生長最快的一個品系，對環(huán)境的適應(yīng)能力強(qiáng)，耐鹽性較好，本文擬研究不同鹽度對吉富羅非魚受精卵孵化和吉富羅非魚稚魚生存的影響，以期找到最適合吉富羅非魚生存、繁殖的鹽度范圍，為吉富羅非魚的咸水養(yǎng)殖提供理論依據(jù)，也為我國沿海地區(qū)鹽堿地和鹽水湖的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

吉富羅非魚稚魚及受精卵均取自百容水產(chǎn)良種有限公司定安育種基地。選用稚魚全長為(2.15±0.25)cm，平均體重0.28 g。放在吊水池中暫養(yǎng)24 h，并從中挑選活力旺盛、無明顯受傷、染病跡象的個體用于試驗。暫養(yǎng)用水為經(jīng)過消毒處理的自來水，暫養(yǎng)期間定時測量水質(zhì)，確保桶中水質(zhì)始終保持pH值 7.0～7.5，水溫(28±0.5)℃，亞硝酸鹽及氨氮均處于極低水平。

1.2 試驗設(shè)計

1.2.1 鹽度對吉富羅非魚受精卵孵化的影響 向經(jīng)過曝氣處理的自來水中加入適量的海鹽，配置成鹽度分別為3‰、6‰、9‰、12‰、15‰、18‰、21‰、24‰的水體，未加海鹽組為對照組(鹽度為0)，每組設(shè)置三個平行。將挑選后的吉富羅非魚受精卵分組放入30 L不同鹽度的水體中，每桶100粒。試驗過程中水溫控制在(28±0.5)℃范圍內(nèi)，利用氣泵使孵化桶中存在輕微地向上的水流，保證受精卵懸浮在水中。

觀察并記錄吉富羅非魚受精卵的孵化情況，包括孵化時間、孵化周期、孵化率。孵化時間是指同批受精卵中有50%的受精卵孵化出膜時所用的時間；孵化周期指同批受精卵從第一尾仔魚孵化出膜開始至最后一尾仔魚孵化出膜間隔的時間；孵化率即受精卵的孵化比率，孵化率=受精卵出苗數(shù)/受精卵總數(shù)×100%。

1.2.2 鹽度對吉富羅非魚稚魚急性脅迫試驗 配置鹽度為10‰、15‰、20‰、25‰、32‰共5個鹽度組(一般認(rèn)為，32‰是羅非魚能正常生活的最高鹽度)的水體，曝氣自來水(鹽度為0)為對照組，每桶放入吉富羅非魚稚魚30尾，每一鹽度組設(shè)置3個平行。利用恒溫棒將試驗水溫控制在(28±0.5)℃，每天早晚各調(diào)節(jié)鹽度1次。試驗魚死亡標(biāo)準(zhǔn)為鰓蓋停止運動，用解剖針輕扎而無反應(yīng)。試驗開始時持續(xù)觀察3 h，隨后每隔1 h觀察1次，試驗開始8 h后，每隔4 h觀察1次，記錄試驗魚的存活狀況。試驗期間不投喂飼料，不換水。

耐鹽指標(biāo)：

平均成活時間(mean survival time,MST))：將試驗魚直接從淡水移到試驗所用的鹽水中的平均成活時間。

50%成活時間(median survival time,ST50)：將試驗魚直接從淡水移到試驗所用的鹽水中，50%個體成活的時間。

開始死亡時間(begin time,BT)：將試驗魚直接從淡水移到試驗所用的鹽水中，出現(xiàn)個體死亡現(xiàn)象的時間。

死亡率：將試驗魚直接從淡水移入到試驗所用的鹽水中，在試驗期間，死亡個體所占的百分比。

2 結(jié)果

2.1 鹽度對吉富羅非魚受精卵孵化率的影響

鹽度對吉富羅非魚受精卵孵化的影響如表1所示。不同鹽度下，羅非魚的孵化時間不同，在鹽度0和鹽度24‰條件下孵化時間最長，分別為(77.6±0.075)h和(77.5±0.043)h；鹽度3‰組和鹽度15‰組孵化時間最短，為(75.9±0.45)h和(76.2±0.19)h。吉富羅非魚受精卵的孵化周期大致隨鹽度的增大而增大，以鹽度24‰組最長，為(5.1±0.029)h。當(dāng)鹽度范圍為6‰～15‰時，吉富羅非魚受精卵的孵化率變化范圍在(90.3±0.47)%～93.0%，組間孵化率差異不顯著(>0.05)；當(dāng)鹽度低于或等于3‰時，孵化率隨著鹽度的降低而降低，組間孵化率差異顯著(<0.05)，且顯著低于鹽度6‰～15‰組；當(dāng)鹽度高于或等于18‰時，孵化率隨著鹽度的升高而降低，組間孵化率差異顯著(<0.05)，且顯著低于鹽度6‰～15‰組，當(dāng)鹽度達(dá)到24‰時，孵化率最低，為(5.3±0.47)%。

表1 鹽度對吉富羅非魚受精卵孵化的影響

2.2 鹽度對吉富羅非魚稚魚生存的影響

將稚魚依次放入各鹽度梯度后，鹽度為0、10‰、15‰的組中稚魚無明顯反應(yīng)，經(jīng)過短暫的隨機(jī)游動后即開始集群勻速逆流游動；鹽度為20‰、25‰、32‰的組中稚魚無規(guī)則急游后集群伏于水底，在鹽度25‰、32‰的組中，部分吉富羅非魚稚魚始終處于無規(guī)則急游狀態(tài)。

其中，在鹽度為32‰的試驗組中最先出現(xiàn)試驗魚的死亡，開始死亡時間為(24.3±3.3)min，隨后該組中出現(xiàn)魚的大規(guī)模死亡，該組的50%成活時間出現(xiàn)在試驗開始后的(39.3±2.5)min。鹽度25‰的試驗組中開始死亡時間為(65±3.6)min，50%成活時間出現(xiàn)在試驗開始后的(95.7±10)min。與其他鹽度組相比，鹽度25‰和32‰組的試驗魚在死后體表分泌有較多黏液。

在鹽度20‰的試驗組中，部分稚魚在經(jīng)歷了最開始的應(yīng)激狀態(tài)后逐漸開始恢復(fù)至正常游動狀態(tài)，在(229.3±2.5)min時，稚魚開始死亡，此時組內(nèi)稚魚活動狀態(tài)出現(xiàn)分化，部分魚開始趨流游動，而部分魚臥于桶底，在沒有外力刺激的情況下無明顯活動跡象，刺激(用小抄網(wǎng)和細(xì)竹條輕輕攪動)后緩慢游動片刻。該組的50%成活時間出現(xiàn)在試驗開始后的(1 320±85)min。

吉富羅非魚稚魚的耐鹽指標(biāo)見表2。96 h內(nèi)，鹽度10‰組、15‰組和對照組未出現(xiàn)稚魚死亡；鹽度20‰組稚魚開始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象；鹽度高于25‰時，96 h稚魚的死亡率都達(dá)到了100%。

表2 吉富羅非魚稚魚的耐鹽指標(biāo)

3 討論

3.1 鹽度對羅非魚受精卵孵化的影響

鹽度對于魚類受精卵，尤其是淡水魚類受精卵的孵化有著不可忽視的作用。在一定鹽度范圍內(nèi)(1‰～12‰)，鹽度越大，鯉()受精卵的孵化率越小，其受精卵孵化的最佳鹽度為1‰左右；陳昆慈等通過對寶石鱸()受精卵孵化的研究發(fā)現(xiàn)，其最適鹽度范圍為0～8‰，當(dāng)鹽度為8‰時，受精卵的孵化率最高，正常孵化鹽度不能高于12‰。廣東魴()在鹽度1‰～7‰的條件下孵化情況最好，受精卵正常孵化的最大鹽度不能超過11‰。雖然羅非魚成魚可以在淡水中正常生活，但在本次試驗中，鹽度為0的對照組中吉富羅非魚受精卵的孵化率只有(10±0.47)%，孵化效果非常不理想，而實際生產(chǎn)中淡水土塘中雌魚孵化的效果卻很好，這可能與羅非魚受精卵在雌魚口腔孵化過程中口腔的理化環(huán)境以及可能存在的分泌出的某種對孵化有益的物質(zhì)有關(guān)。在本次試驗中，當(dāng)鹽度為6‰～15‰時，吉富羅非魚受精卵的孵化率變化范圍在(90.3±0.47)%～93.0%，而鹽度低于3‰或高于18‰時，孵化率均隨著鹽度的變化而顯著降低。無論鹽度過高或過低，吉富羅非魚的受精卵孵化率都處于較低的水平，鹽度大小是影響吉富羅非魚受精卵孵化率的重要因素，在其他條件相同的情況下，孵化周期隨著鹽度的增大而增大。通過對不同鹽度下吉富羅非魚受精卵的孵化時間、孵化周期和孵化率的統(tǒng)計與觀察得出結(jié)論，適合吉富羅非魚受精卵孵化的鹽度范圍為6‰～15‰。在實際生產(chǎn)中，出于降低成本和簡化操作的考慮，可以在適宜鹽度范圍內(nèi)選擇較低的鹽度作為生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)鹽度。

3.2 鹽度脅迫對羅非魚稚魚生存的影響

當(dāng)魚類處于高鹽度脅迫的環(huán)境條件時，由于外界的滲透壓與魚體內(nèi)的滲透壓存在著明顯的差異，因此，魚類需要消耗比正常情況下更多的能量，這些額外消耗的能量大多被用以維持魚體內(nèi)滲透壓在一定范圍內(nèi)的平衡。在這種情況下，發(fā)育完全、抵抗能力強(qiáng)的成魚受到的影響尚且較小，而還未完全成熟對環(huán)境變化抵抗能力弱的仔魚、稚魚和幼魚則尤其敏感，極易影響到這些魚的活力與正常的攝食活動等，進(jìn)而導(dǎo)致魚的死亡率上升。本研究中，將吉富羅非魚稚魚直接放入不同鹽度水體中，由于稚魚對體內(nèi)滲透壓的調(diào)節(jié)能力較弱，因此在試驗的最初階段，便出現(xiàn)了鹽度25‰組和鹽度32‰組稚魚的全部死亡與鹽度20‰組的部分死亡，而存活的稚魚在生理及行為方面做出調(diào)整，使得魚體內(nèi)外的滲透壓逐漸平衡，適應(yīng)了環(huán)境鹽度的急劇變化，最終存活率趨于穩(wěn)定。對吉富羅非魚稚魚的急性鹽度脅迫試驗結(jié)果與其他淡水魚類在高鹽度脅迫下相近，當(dāng)鹽度低于或等于15‰時，96 h內(nèi)各組別中羅非魚無死亡現(xiàn)象；當(dāng)鹽度高于或等于20‰時，吉富羅非魚稚魚的成活率和平均存活時間隨鹽度增長而快速降低，鹽度25‰組和鹽度32‰組稚魚在96 h內(nèi)全部死亡。

綜上得出，最適合吉富羅非魚孵化的鹽度為6‰～15‰；在沒有經(jīng)過長期鹽度馴化的情況下，吉富羅非魚稚魚適合在鹽度低于15‰的條件下養(yǎng)殖。