砂仁酒制熟地黃不同炮制工藝與毛蕊花糖苷含量比較

馬靈珍

(1.安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院 亳州中醫(yī)藥研究所，安徽 亳州 236800；2.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 亳州 236800)

地黃為玄參科植物地黃(RehmanniaglutinosaLibosch.)的新鮮或干燥塊根，其性甘、苦、寒，具有清熱生津、涼血、止血的功效，臨床用于熱病傷陰、舌絳煩渴以及溫毒發(fā)斑等[1]。地黃主產(chǎn)于河南、河北、陜西等地，主要成分為環(huán)烯醚萜類、紫羅蘭酮類、三萜類等，具有免疫調(diào)節(jié)和抗衰老等多種藥理活性。作為我國(guó)傳統(tǒng)的滋補(bǔ)類中藥，適應(yīng)癥廣,近年又多用于保健食品,又因其生熟異用，在臨床上使用較為廣泛。

地黃的炮制方法有蒸制、酒燉、九蒸九曬、炒炭、砂仁制等，經(jīng)炮制后地黃主要成分發(fā)生變化，從而影響其療效。有文獻(xiàn)報(bào)道[2]，不同地黃炮制品中梓醇含量依次為生地黃>熟地黃>酒熟地黃>蒸熟地黃>砂仁制地黃>生地黃炭>熟地黃炭。當(dāng)前關(guān)于地黃炮制工藝的研究多集中于酒燉、九蒸九曬等，而砂仁酒制地黃的研究尚未見報(bào)道。砂仁酒炮制地黃的目的是抑制熟地黃的滋膩之性。但是該工藝卻沒有嚴(yán)格的、規(guī)范化的炮制工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而導(dǎo)致了市場(chǎng)上很少有砂仁炮制的熟地黃商品，嚴(yán)重影響了中醫(yī)臨床用藥的優(yōu)勢(shì)。

本研究通過分析砂仁酒制熟地黃不同炮制過程中主要成分毛蕊花糖苷變化規(guī)律及對(duì)其炮制工藝進(jìn)行研究，從而使其在中醫(yī)臨床上發(fā)揮更大的作用。

1 材料與方法

1.1 供試材料

實(shí)驗(yàn)分析過程中所使用的試劑、樣品及對(duì)照品包括：地黃、砂仁、黃酒、毛蕊花糖苷、純凈水、甲醇、乙腈、0.1%醋酸、環(huán)己烷以及乙酸乙酯等。

其中地黃及砂仁藥材均由亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院提供，經(jīng)安徽華善堂中藥飲片有限公司質(zhì)量副總郭慶老師鑒定為2020版《中國(guó)藥典》收載正品來(lái)源。實(shí)驗(yàn)過程中用到的砂仁均為破碎過三號(hào)藥典篩的粉末。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備

實(shí)驗(yàn)過程中所使用的儀器設(shè)備包括：電磁爐、蒸煮鍋、水浴鍋、高速多功能粉碎機(jī)、電熱鼓風(fēng)干燥烘箱以及雙頻數(shù)控超聲波清洗器等。

1.3 不同炮制工藝制備砂仁酒制熟地黃

1.3.1 罐蒸制砂仁酒制熟地黃制備方法

取砂仁，按2020版《中國(guó)藥典》揮發(fā)油測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。砂仁揮發(fā)油含量為4.2%，符合2020版《中國(guó)藥典》要求。

高潮回復(fù)一個(gè)“OK”的表情，應(yīng)聲道：好香啊，要抓住一個(gè)男人，只需抓住他的胃，這戰(zhàn)術(shù)，老婆運(yùn)用得咋跟顛鸞倒鳳一般嫻熟呢？

在硅膠G薄層板上，用毛細(xì)管吸取配置好的乙酸龍腦酯和砂仁樣品各1 μL均勻點(diǎn)出1個(gè)對(duì)照品及1個(gè)樣品的小點(diǎn)，放入展開槽中展開(環(huán)己烷-乙酸乙酯(22∶1)為展開劑)，結(jié)束后，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，放置烘箱中加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

將生地黃凈制，再隨機(jī)取樣，取樣800 g，加入10%的黃酒進(jìn)行悶潤(rùn)，約30 min(藥透水盡)后，轉(zhuǎn)移至不銹鋼蒸籠上，加水蒸制，電磁爐加熱(220 ℃)，每3 h往蒸煮鍋內(nèi)補(bǔ)水，8 h后取出蒸制的地黃，放置室外晾至地黃表面黏液不沾手后，伴入收集的熟地黃汁液，取約250 g蒸制的地黃加入40%的黃酒及0.9%砂仁進(jìn)行悶潤(rùn)后，轉(zhuǎn)移至不銹鋼蒸籠上，繼續(xù)蒸制8 h后，取出室外晾至地黃表面黏液不沾手后，伴入收集的熟地黃汁液[3]，繼續(xù)晾至地黃表面黏液不沾手后，裝入自封袋并做好標(biāo)記(得到16 h時(shí)間段)。其余蒸制的地黃加入10%的黃酒繼續(xù)蒸制8 h，重復(fù)上述操作(依次得到24 h/32 h/40 h時(shí)間段砂仁酒制熟地黃，每個(gè)時(shí)間段黃酒總量均為50%，砂仁為0.9%)。另取生地黃200 g，把所取樣放置到瓷盤中，加入50%的黃酒及0.9%砂仁進(jìn)行悶潤(rùn)，約30 min(藥透水盡)后，轉(zhuǎn)移至不銹鋼蒸籠上，進(jìn)行蒸制8 h后，取出室外晾至地黃表面黏液不沾手后，伴入收集的熟地黃汁液，繼續(xù)晾至地黃表面黏液不沾手(得到8 h時(shí)間段)[4]。將所有時(shí)間段的籠蒸砂仁酒制熟地黃裝入自封袋并貼好標(biāo)簽進(jìn)行含量研究。

1.4 砂仁酒制熟地黃蒸制程度考察

色譜結(jié)果見圖3，砂仁樣品與乙酸龍腦酯在相同位置上顯出了相同顏色的斑點(diǎn)。由此可得，熟地黃炮制用砂仁為藥典正品來(lái)源。

那日，王爺沒有哭得“昏迷不醒”。甚至，在外人面前他似乎并沒流多少眼淚。七十多歲的人了，眼淚像他的身體一樣早就干枯了?；蛘?，是倒流回他的身體里，漲得他身體難受卻沒有傾泄的缺口，只好一直那樣漲著。

表1 砂仁酒制熟地黃蒸制程度

2 結(jié)果與分析

2.1 炮制輔料砂仁的鑒別

按照2020版《中國(guó)藥典》法制得對(duì)照品和供試品溶液，待用。

1.3.2 籠蒸制砂仁酒制熟地黃制備方法

將上述不同炮制工藝及炮制時(shí)間得到的砂仁酒制熟地黃成品進(jìn)行編號(hào)，觀察蒸制結(jié)果。蒸制結(jié)果見表1。

2.2 炮制輔料砂仁的含量測(cè)定

先將地黃凈制，再隨機(jī)取樣，取樣1000 g，把所取的樣品放置到瓷盤中，加入50%的黃酒及0.9%砂仁進(jìn)行悶潤(rùn)，約30 min(藥透水盡)后，轉(zhuǎn)移至瓦罐中，封閉，放置不銹鋼蒸煮鍋中，加水約至蒸煮鍋容積的三分之二處，電磁爐加熱(220 ℃)，每3 h往蒸煮鍋內(nèi)補(bǔ)水，按照時(shí)間點(diǎn)取樣(8 h/16 h/24 h/32 h/40 h),每個(gè)時(shí)間段約取250 g(蒸制后重量),再把藥材放置于室外晾至地黃表面黏液不沾手后，裝入自封袋并貼好標(biāo)簽(得到8 h/16 h/24 h/32 h/40 h時(shí)間段罐蒸砂仁酒制熟地黃)進(jìn)行含量研究。

圖1 毛蕊花糖苷色譜圖

2.3 毛蕊花糖苷的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)[5]

2.3.5 精密度實(shí)驗(yàn)

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備

為考察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象是否具有重現(xiàn)性，精密稱取編號(hào)為A1砂仁酒制熟地黃樣品5份，按2020版《中國(guó)藥典》熟地黃項(xiàng)下方法制成供試品溶液[7]，在其他實(shí)驗(yàn)條件不變的情況下，5個(gè)樣品分別進(jìn)樣，測(cè)定熟地黃中毛蕊花糖苷含量。結(jié)果見表4。計(jì)算其RSD為2.40%。

海明威在其創(chuàng)作中一直遵循年輕時(shí)形成的“電報(bào)體風(fēng)格”，在其作品《午后之死》中也正式提出了他在創(chuàng)作上的“冰山原則”。海明威以冰山為喻，表達(dá)了作者只應(yīng)描寫冰山露出水面的一小部分，而隱藏于水下的則應(yīng)該通過文字的延伸由讀者去想象補(bǔ)充這一主張。本文通過解讀《老人與海》，分析小說(shuō)的文體風(fēng)格及人物塑造來(lái)探究“冰山原則”的獨(dú)特之處。

取毛蕊花糖苷對(duì)照品，按照2020版《中國(guó)藥典》規(guī)定制成每l mL含毛蕊花糖苷11.36 μL的對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液制備

“喂，高河。”突然，楊年喜叫住了高河。高河停下了腳步，只聽楊年喜怪里怪氣地說(shuō)：“高河，別忘了那天那晚。”

將已經(jīng)編號(hào)(見表3)的砂仁酒制熟地黃用剪刀剪成2～3 mm的立方塊，再放入電熱鼓風(fēng)干燥風(fēng)箱內(nèi)用120 ℃干燥30 min,取出晾涼后用粉碎機(jī)破碎，取最粗粉，放入自封袋并標(biāo)記。每批樣品做一平行樣，按照2020版《中國(guó)藥典》熟地黃含量項(xiàng)下供試品方法制備，即得A1-A2、B1-B2、C1-C2、D1-D2、E1-E2、a1-a2、b1-b2、c1-c2、d1-d2、e1-e2號(hào)供試品溶液[6]，待用。

2.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

為評(píng)價(jià)HPLC的穩(wěn)定性，精密量取編號(hào)為A1的砂仁酒制熟地黃溶液，在設(shè)定時(shí)間段進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)進(jìn)6針樣，測(cè)定砂仁酒制熟地黃中毛蕊花糖苷的含量。結(jié)果見表2，計(jì)算其RSD為1.57%。

另外，相關(guān)的調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)物流并購(gòu)標(biāo)的企業(yè)所在地主要集中在東部地區(qū)，其中以發(fā)達(dá)地區(qū)、沿海省份為主。這些地區(qū)或城市憑借著經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢(shì)或地域優(yōu)勢(shì)成為近10年物流并購(gòu)的熱點(diǎn)地區(qū)，而且這些地區(qū)并購(gòu)發(fā)生量占全國(guó)總并購(gòu)數(shù)目的68%。

安捷倫C18(150 mm*4.6 mm)色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)334 nm，流動(dòng)相為0.1%醋酸-乙腈溶液(84∶16)，流速1.0 mL/min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量20 μL。理論板數(shù)按毛蕊花糖苷峰計(jì)算不低于5000。毛蕊花糖苷的保留時(shí)間約為18 min(見圖1)。

現(xiàn)代經(jīng)濟(jì)管理工作是在一系列數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)之上，用嚴(yán)格的推理得到結(jié)論的學(xué)科，過程需要嚴(yán)密的計(jì)算和邏輯推理。數(shù)學(xué)應(yīng)用的好壞直接決定了經(jīng)濟(jì)學(xué)研究的成敗，數(shù)學(xué)分析可以提供有效手段。例如函數(shù)、極限、推理與證明等內(nèi)容都是基礎(chǔ)的數(shù)學(xué)分析，要全面掌握才能很好理解經(jīng)濟(jì)原理中的各類數(shù)學(xué)模型，為學(xué)習(xí)打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。分析師有著嚴(yán)密邏輯性的，可以探尋出事物內(nèi)部發(fā)展的聯(lián)系和規(guī)律，對(duì)未來(lái)趨勢(shì)做出科學(xué)合理預(yù)測(cè)，指明正確發(fā)展方向。要將數(shù)學(xué)分析和現(xiàn)代經(jīng)濟(jì)管理工作有機(jī)結(jié)合在一起，這樣會(huì)更加具有針對(duì)性，最大限度發(fā)揮出作用，從而不斷優(yōu)化效果。

為評(píng)價(jià)HPLC的精密度，精密量取編號(hào)為A1的砂仁酒制熟地黃溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定熟地黃中毛蕊花糖苷的含量。結(jié)果見表3。計(jì)算其RSD為0.93%。

2.3.6 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

1.把煙戒了；2.高血脂好了；3.以前打架沒幫手,現(xiàn)在隨時(shí)能招呼一群兄弟；4.第一次住上了政府提供的免費(fèi)房屋；5.第一次享受了免費(fèi)醫(yī)療；6.第一次享受了免費(fèi)教育；7.終于掌握了一門手藝；8.同屋有個(gè)局級(jí)貪污犯每天幫他搓背，真正享受了公仆的服務(wù)。

伴隨著新一輪全球科技革命和產(chǎn)業(yè)革命，以云計(jì)算、大數(shù)據(jù)、物聯(lián)網(wǎng)、人工智能等為代表的新經(jīng)濟(jì)正在茁壯成長(zhǎng)，以大數(shù)據(jù)為核心的第四次工業(yè)革命正引領(lǐng)人類社會(huì)由工業(yè)經(jīng)濟(jì)時(shí)代進(jìn)入數(shù)字經(jīng)濟(jì)時(shí)代。高等教育的發(fā)展與技術(shù)的進(jìn)步是密不可分的，每一次技術(shù)的革新都會(huì)給高等教育帶來(lái)創(chuàng)新性的發(fā)展，但最能對(duì)高等教育的發(fā)展產(chǎn)生革命性影響的數(shù)據(jù)卻常常在變革中遭到忽視。當(dāng)前，中國(guó)高校雖然已經(jīng)認(rèn)識(shí)到教育大數(shù)據(jù)將要產(chǎn)生的價(jià)值，但是目前還未能夠?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行有效的應(yīng)用，尚未引起辦學(xué)者的足夠關(guān)注。

2.4 籠蒸砂仁酒制熟地黃中毛蕊花糖苷的含量測(cè)定

籠蒸以蒸制次數(shù)分批(8 h)進(jìn)行取樣。每批籠蒸砂仁酒制熟地黃按2020版《中國(guó)藥典》熟地黃含量項(xiàng)下方法進(jìn)行制備和操作，測(cè)定籠蒸砂仁酒制熟地黃樣品中毛蕊花糖苷的含量。圖2(A1—E2)為HPLC色譜圖。

大多數(shù)寶寶在心肌炎發(fā)病前的1～2周常有感冒等呼吸道感染史，常見癥狀有明顯乏力、蒼白、多汗、心悸、氣短、胸悶、頭暈、心前區(qū)疼、手足涼、肌肉痛等，去醫(yī)院檢查就會(huì)發(fā)現(xiàn)心臟擴(kuò)大，心音低鈍或心律不齊等體征。個(gè)別患病的寶寶會(huì)以心源性休克或心腦綜合征（心臟病變中有腦部癥狀）起病，以急劇腹痛起病時(shí)常被誤診為急腹癥。

表2 籠蒸砂仁酒制熟地黃中毛蕊花糖苷含量

由表5可知不同蒸制次數(shù)砂仁酒制熟地黃毛蕊花糖苷平均含量符合2020版《中國(guó)藥典》不得少于0.020%的規(guī)定。

2.5 罐蒸砂仁酒制熟地黃中毛蕊花糖苷的含量測(cè)定[8]

罐蒸制按時(shí)間段(8 h)進(jìn)行取樣。每時(shí)間段按2020版《中國(guó)藥典》熟地黃含量項(xiàng)下方法進(jìn)行制備和操作，測(cè)定罐蒸砂仁酒制熟地黃樣品中毛蕊花糖苷的含量。圖2(a1—e2)為HPLC色譜圖，結(jié)果見表8。

表3 籠蒸砂仁酒制熟地黃中毛蕊花糖苷含量

由表6可知采用罐蒸砂仁酒制熟地黃不同時(shí)間段毛蕊花糖苷平均含量低于2020版《中國(guó)藥典》不得少于0.020%的規(guī)定[9]。

圖2 毛蕊花糖苷含量測(cè)定色譜圖

罐蒸砂仁酒制熟地黃中毛蕊花糖苷從蒸制8 h到40 h時(shí)間段，毛蕊花糖苷含量逐漸降低，其中在24 h時(shí)間段有一反彈，但整體呈下降趨勢(shì)。

3 結(jié)語(yǔ)

地黃作為我國(guó)傳統(tǒng)的滋補(bǔ)類中藥，適應(yīng)癥廣,近年又多用于保健食品,又因其生熟異用，在臨床上使用較為廣泛。砂仁酒炮制地黃的目的是抑制熟地黃的滋膩之性。但是該工藝卻沒有嚴(yán)格的、規(guī)范化的炮制工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而導(dǎo)致了市場(chǎng)上很少有砂仁炮制的熟地黃商品，嚴(yán)重影響了中醫(yī)臨床用藥的優(yōu)勢(shì)。

本實(shí)驗(yàn)主要研究熟地黃采用砂仁和黃酒作為輔料的不同炮制方法。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出，當(dāng)砂仁酒制熟地黃采取不同的炮制工藝及炮制時(shí)間時(shí)[10]，砂仁酒制熟地黃中毛蕊花糖苷的含量變化明顯。此外，采用籠蒸制時(shí)，從一蒸(8 h)一曬、二蒸(16 h)二曬、三蒸(24 h)三曬、四蒸(32 h)四曬、五蒸(40 h)五曬后的砂仁酒制熟地黃中的毛蕊花糖苷均達(dá)到2020版《中國(guó)藥典》規(guī)定的要求，依次分別為0.048%、0.063%、0.077%、0.055%、0.032%。采用罐蒸制8 h、24 h后的砂仁酒制熟地黃中的毛蕊花糖苷含量達(dá)標(biāo)，依次為0.042%、0.021%，而罐蒸制16 h、32h、40h后的砂仁酒制熟地黃中的毛蕊花糖苷含量不達(dá)標(biāo)，依次為0.010%、0.010%、0.004%。值得一提的是無(wú)論是籠蒸還是罐蒸24 h時(shí)間段毛蕊花糖苷均有一次反彈，具體原因，有待于進(jìn)一步論證。

實(shí)驗(yàn)過程中熟地黃蒸制工藝操作過程所用設(shè)備較為簡(jiǎn)單，操作方法方便、可控，所蒸制的熟地黃毛蕊花糖苷含量符合藥典要求，為砂仁酒制熟地黃蒸制工藝提供了科學(xué)參考。