田紅偉 李慎柯 李訓(xùn)東

非小細胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)具有較高的發(fā)生率，早期無明顯癥狀，且易向遠處轉(zhuǎn)移，大多數(shù)患者經(jīng)臨床診斷時已處于中晚期，從而導(dǎo)致生存率較低，預(yù)后較差[1-2]。積極的尋求與NSCLC發(fā)生發(fā)展與預(yù)后相關(guān)的分子標志物，以此指導(dǎo)臨床施行更具個體化的治療，對于延長患者的生存周期意義重大[3-4]。胰島素樣生長因子1(IGF1)可通過與其受體進行特異性的結(jié)合，參與腫瘤細胞的分化。而微小RNA-148b(miR-148b)能夠調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平過后的基因翻譯。臨床有關(guān)研究顯示，IGF1、miR-148b在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色[5-6]。但臨床關(guān)于兩者在NSCLC患者血清內(nèi)的表達與臨床意義的研究報道較為缺乏。本研究主要探究IGF1與miR-148b在NSCLC患者血清內(nèi)的表達與臨床意義。報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取本院2018年6月至2020年6月診治的78例NSCLC患者為研究對象，同時選擇同期于本院治療的71例良性肺部病變患者作為對照組，研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。納入標準：所有NSCLC患者均經(jīng)胸部影像學(xué)與組織病理學(xué)檢查確診；近期未接受放化療等輔助治療；患者的病歷資料齊全；所有患者的選擇均遵循自愿原則，簽署知情同意書。排除標準：有感染性疾病者；合并免疫系統(tǒng)病癥者；伴有血液系統(tǒng)疾病者；有視聽或語言障礙，無法進行正常溝通者；合并其他惡性腫瘤者；存在凝血功能異常者；妊娠或哺乳期者；存在精神疾病患者。對照組男性37例，女性34例；年齡40～71歲，平均年齡(59.48±3.67)歲；體質(zhì)量指數(shù)18.7～28.4 kg/m2，平均體質(zhì)量指數(shù)(24.25±1.35)kg/m2。觀察組男性40例，女性38例；年齡41～72歲，平均年齡(59.63±3.71)歲；體質(zhì)量指數(shù)18.5～28.7 kg/m2，平均體質(zhì)量指數(shù)(24.33±1.29)kg/m2。

1.2 方法

IGF1檢測：采集2組的晨起空腹靜脈血5 ml，置清潔干燥試管中室溫下靜置4 h后，以3000 r/min的速率進行15 min的離心，分離出血清1.5 ml，放于1.5 ml聚丙二醇脂試管內(nèi)，放入-60 ℃冰箱保存，之后以放射免疫法檢測2組的IGF1水平；以觀察組血清IGF1中心值為基點，在中心值水平之上為高表達，中心值水平之下為低表達，將其分為高表達組(n=52)與低表達組(n=26)。miR-148b檢測：同樣抽取2組的清晨靜脈血5 ml，放于無菌采血管內(nèi)10 ml，在室溫環(huán)境下靜置30 min，之后以4500 r/min的速率施行10 min的離心處理獲取血清過后，于-70 ℃環(huán)境下留存待檢，檢測miR-148b mRNA濃度與純度，設(shè)計待測基因位點的聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)擴增引物和單堿基延伸引物，依據(jù)20 μL模板以及50 μL反應(yīng)液構(gòu)建PCR反應(yīng)體系，擴增程序：97 ℃、92 ℃、63 ℃分別進行6 min、14 s、40 s，共持續(xù)開展50個循環(huán)，63 ℃時采集熒光；反應(yīng)體系：2×μBry一步法RT-qPCR緩沖液，5 μL、正向引物10 μm，0.4 μL、反向引物，10 μm，0.4 μL、超級酶混合物，0.2 μL RNA模板，0.6 μL、無核糖核酸酶水，3.4 μL，實時熒光定量PCR儀測定其表達水平；miR-148b mRNA水平表達定義：觀察組血清miR-148b mRNA相對表達量/對照組miR-148b mRNA相對表達量≥0.5為miR-148陽性，反之則為陰性，分別納為陽性組(n=35)、陰性組(n=43)。

1.3 觀察指標

(1)2組IGF1與miR-148b mRNA表達水平對比。(2)IGF1、miR-148b mRNA表達水平與臨床病理特征的關(guān)系，病理特征包括年齡、性別、吸煙史、腫瘤部位等，探究兩者與NSCLC患者各項病理特征的關(guān)系。(3) IGF1、miR-148b 表達水平與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 2組IGF1與miR-148b mRNA表達水平對比

觀察組IGF1表達水平高于對照組，miR-148b mRNA表達水平低于對照組，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

表1 2組IGF1與miR-148b mRNA表達水平對比

2.2 IGF1、miR-148b mRNA表達水平與臨床病理特征的關(guān)系

NSCLC患者IGE1、miR-148b表達與性別、年齡、吸煙史、腫瘤部位無關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、組織分化程度、腫瘤大小有關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 IGF1、miR-148b mRNA表達水平與臨床病理特征的關(guān)系/例

2.3 IGF1、miR-148b表達水平與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

IGF1高表達患者3年生存率低于IGF1低表達者，miR-148b陰性表達患者的3年生存率低于miR-148b陽性表達者，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見圖1。

圖1 IGF1和miR-148b表達與患者生存關(guān)系的曲線分析

3 討論

NSCLC在臨床的發(fā)病率處于較高水平，具有極高的致死率[7-8]。NSCLC的發(fā)病機制較為復(fù)雜，與肺部慢性疾病、環(huán)境、家族史等密切相關(guān)。由于NSCLC在發(fā)病早期無典型表現(xiàn)，加之極易出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移等情況，從而導(dǎo)致早期診斷較為困難，致使大部分患者經(jīng)臨床確診時已處于中晚期，已失去根治性手術(shù)治療機會，整體生存率較低[9-10]。因此，臨床需探尋一快速鑒別診斷NSCLC的手段，以提高早期診斷率，指導(dǎo)臨床進行規(guī)范化治療，延長患者生存周期。

IGF1多作為一種生長激素，在幾乎所有細胞內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)作用，廣泛表達于多種類型的細胞表面，可通過調(diào)節(jié)癌細胞對內(nèi)皮的粘附性與血管生成，進而影響腫瘤的侵襲能力[11-12]。而當IGF1過度表達時，細胞會向惡性表型轉(zhuǎn)化，當IGF1與靶細胞上的受體結(jié)合后，將會引發(fā)下游信號的級聯(lián)反應(yīng)，觸發(fā)蛋白合成等通路，在不同的腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。miR-148b在調(diào)節(jié)細胞基因表達層面存在重要功能，且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中亦至關(guān)重要[13]。本研究結(jié)果顯示，觀察組IGF1表達水平高于對照組，miR-148b mRNA表達水平低于對照組，提示NSCLC患者機體內(nèi)IGF1呈高表達，miR-148b呈低表達。閆明等[14]研究顯示，非小細胞肺癌組IGF1蛋白高表達率高于癌旁對照組，與本研究結(jié)果類似。分析原因在于IGF1表達水平較高將會增加腫瘤發(fā)生的易感性，并會促使腫瘤過度生長；而miR-148b基因?qū)蛹毎鲋嘲l(fā)揮重要抑制作用，并可促使細胞凋亡，故呈低表達水平[15]。本研究結(jié)果顯示，NSCLC患者IGE1、miR-148b mRNA表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、組織分化程度、腫瘤大小有關(guān)，提示臨床需對以上病理特征予以高度重視。本研究結(jié)果還顯示，IGF1高表達患者3年生存率低于IGF1低表達患者，miR-148b陰性表達患者的3年生存率低于miR-148b陽性表達患者，提示IGF1高表達與miR-148b陰性表達與患者預(yù)后聯(lián)系密切。其原因在于高水平的IGF1會增加細胞內(nèi)有絲分裂信號傳導(dǎo)，增加細胞內(nèi)DNA損傷，從而增加惡性轉(zhuǎn)化發(fā)生風險，進而加快患者病情發(fā)展，不利于預(yù)后。而miR-148b的陰性表達將無法發(fā)揮阻斷腫瘤血管生成的生物學(xué)作用，故患者預(yù)后較差。同時，仍需注意的是，本次研究尚存在納入樣本量較少等不足，可能會對本次研究結(jié)果的可信度造成一定的影響。因此，后續(xù)臨床還需不斷的完善試驗設(shè)計，繼續(xù)擴大樣本量的納入，以此進行更深層次的探究。

綜上所述，IGF1與miR-148b表達水平與NSCLC患者的預(yù)后密切相關(guān)，臨床需予以高度重視，IGF1與miR-148b可作為早期診斷NSCLC的重要參考。