血管內(nèi)皮生長因子A在中重度炎癥性腸病患者中的表達(dá)及其臨床意義

程海燕，沈哲

炎癥性腸?。↖BD）是一組反復(fù)發(fā)作的慢性炎癥性腸道疾病，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎（UC）和克羅恩?。–D）。既往研究證實(shí)，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）參與腫瘤血管形成，與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展關(guān)系密切[1]。研究發(fā)現(xiàn)，VEGF家族與酪氨酸激酶受體結(jié)合而調(diào)節(jié)血管生成的效應(yīng)，同樣在IBD的發(fā)病中可能起著重要作用，而起主要作用的因子為VEGF-A。當(dāng)腸道黏膜受到缺氧等刺激后，可促使內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及活化的血小板產(chǎn)生大量的VEGF-A[2]，它可促進(jìn)炎性細(xì)胞的遷移、浸潤，導(dǎo)致炎性反應(yīng)持續(xù)存在，損傷腸道屏障，破壞腸道細(xì)胞間的緊密連接，從而促進(jìn)IBD的發(fā)生及發(fā)展[3]。本研究擬探討VEGF-A在中重度IBD患者中的表達(dá)及其臨床意義，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016年1月至2020年9月浙江省紹興第二醫(yī)院收治的30例中重度IBD患者（CD活動(dòng)指數(shù)評(píng)分＞450分，UC改良梅奧評(píng)分＞6分）的病變結(jié)腸黏膜標(biāo)本及其外周血（觀察組），均符合2018年中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)IBD協(xié)作組推薦的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，其中男20例，女10例；年齡14～74歲，平均（35.9±14.8）歲；中度18例，重度12例。同期選擇30例健康志愿者的正常結(jié)腸黏膜標(biāo)本及其外周血作為正常對(duì)照組，其中男14例，女16例；年齡23～51歲，平均（38.3±14.6）歲。兩組性別比及年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。研究獲得浙江省紹興第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書。

1.2 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELlSA）對(duì)照組在體檢時(shí)空腹，觀察組治療前及治療6個(gè)月后清晨空腹，均抽取肘靜脈血2 ml置于促凝管中，自然凝固后，1 500 r/min離心15 min，取血清保存于－80℃冰箱待檢。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行ELISA操作，于450 nm處測量吸光度值，使用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算血清樣本中VEGF-A含量。

1.3 免疫組化染色 對(duì)照組在體檢時(shí)，觀察組治療前及治療6個(gè)月后，均取內(nèi)鏡活檢標(biāo)本2塊，40%甲醛固定后石蠟包埋，全部石蠟標(biāo)本均行5 mm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟，水洗，室溫下3%甲醇過氧化氫孵育30 min去除內(nèi)源性過氧化氫酶，EDTA修復(fù)，正常羊血清室溫下封閉，加入即用型鼠抗人VEGF-A單抗，4℃冰箱過夜，PBS清洗，加入二抗，溫育0.5 h，沖洗后DAB顯色，蘇木精對(duì)比染色，中性樹膠封片。

結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞所占的百分比＜25%記1分，26%～50%記2分，＞50%記3分；淺黃色記1分，中等強(qiáng)度黃色記3分，深黃或棕色記5分；按陽性細(xì)胞所占的百分比及顯色情況所得分相乘的分值判定各指標(biāo)表達(dá)情況：1～2分判定為低表達(dá)（+），3～4分判定為中表達(dá)2（+），＞5分判定為高表達(dá)3（+）。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)；等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清VEGF-A表達(dá)水平比較 觀察組治療前血清VEGF-A表達(dá)水平為（381.56±31.21）pg/ml，6 個(gè) 月 后 為（250.46±18.97）pg/ml；對(duì) 照 組 為（108.76±9.23）pg/ml。觀察組治療前血清VEGF-A表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（t=13.83，P＜0.05）；觀察組治療后血清VEGF-A表達(dá)水平明顯低于治療前，高于對(duì)照組（t≥28.46，均P＜0.05）。

2.2 腸黏膜組織VEGF-A表達(dá)水平比較 觀察組治療前腸黏膜組織VEGF-A表達(dá)水平為3（+）27例，（+）～2（+）3例；治療6個(gè)月后為3（+）8例，（+）～2（+）22例。對(duì)照組均為（+）～2（+）。觀察組治療后腸黏膜組織VEGF-A表達(dá)水平明顯低于治療前，高于對(duì)照組（2=41.71、49.10，均P＜0.05）。見封三彩圖5～7。

3 討論

IBD是一類慢性反復(fù)發(fā)作的疾病，特別是對(duì)于存在嚴(yán)重活動(dòng)性炎癥的患者，不僅影響生活質(zhì)量，而且威脅生命[5]。腫瘤壞死因子（TNF）-抗體對(duì)IBD患者有明顯療效，且已被廣泛應(yīng)用于臨床，但仍有部分患者出現(xiàn)原發(fā)無應(yīng)答或繼發(fā)性失效等情況[6]。因此，尋找更有效的靶向治療是當(dāng)今國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，腸道炎癥與VEGF-A密切相關(guān)。Algaba等[6]學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎小鼠受累的炎性腸段中，黏膜下血管數(shù)量增多，并檢測到VEGF-A及其受體高表達(dá)。Cromer等[7]發(fā)現(xiàn)IBD中血管密度的增加可提示疾病的嚴(yán)重程度加重。在人體實(shí)驗(yàn)中，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在活動(dòng)期潰瘍性結(jié)腸炎患者的血清和血漿中，VEGF-A的表達(dá)水平均明顯升高，并且檢測到其受體VEGF-1的表達(dá)也增加[4]。Strunk等[8]發(fā)現(xiàn)銀屑病和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者用類克治療后能顯著降低血清中VEGF-A的表達(dá)水平。

本研究探討在IBD患者治療前后及對(duì)照組是否也存在VEGF-A的表達(dá)水平的改變。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在IBD患者治療前，患者血清中及病變腸道組織VEGF-A的表達(dá)水平相對(duì)較高，經(jīng)強(qiáng)的松、硫唑嘌呤及類克等藥物治療6個(gè)月后，患者血清及病變腸道組織VEGF-A的表達(dá)水平較治療前明顯下降，健康志愿者較治療后患者血清及病變腸道組織VEGF-A的表達(dá)水平更低。提示血管生成參與整個(gè)疾病的發(fā)生發(fā)展過程，而血管生成是IBD主要病理學(xué)改變之一，VEGF-A介導(dǎo)的血管內(nèi)皮通透性增加參與了IBD的重要發(fā)病機(jī)制[9]。