王娟 任可樂 孫杰 張朔生 楊五生 楊壯 劉錦云

棗芽紅茶與滇紅茶活性成分含量測定及降糖效果對比研究

王娟1任可樂1孫杰1張朔生1楊五生2楊壯2劉錦云2

（1. 山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥與食品工程學(xué)院 山西晉中 030619；2. 山西茗玥茶葉有限公司 山西呂梁 033000）

為了對比分析棗芽紅茶與滇紅茶對血糖的調(diào)節(jié)作用，采用紫外分光光度法分別測定棗芽紅茶和滇紅茶中總黃酮類、總多糖類、總皂苷類和茶多酚類成分的含量；采用腎上腺素（Adrenaline, AD）和葡萄糖（Glucose, Glu）誘導(dǎo)的高血糖模型小鼠及正常小鼠，對比研究2種茶葉對血糖的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明：棗芽紅茶和滇紅茶中總黃酮類成分含量分別為1.7%和1.76%；總多糖類成分含量分別為0.31%和0.58%；總皂苷類成分含量分別為0.63%和0.46%；茶多酚類成分含量分別為2.3%和1.3%。與模型組相比，棗芽紅茶組和滇紅茶組均可顯著性降低AD、Glu誘導(dǎo)的高血糖小鼠血糖水平（<0.05），2組相比無明顯差異；對正常小鼠棗芽紅茶組與滇紅茶組血糖值僅有升高趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明棗芽紅茶和滇紅茶對AD和Glu誘導(dǎo)的高血糖模型小鼠有明顯的降糖作用，但對正常小鼠血糖無明顯影響。

棗芽紅茶；滇紅茶；活性成分；含量測定；降糖效果

茶作為世界三大飲料之一，在文化傳承與交流中受到世界人民的廣泛推崇[1]。茶葉中生物活性成分主要包含多酚類、生物堿、茶蛋白、茶多糖、茶葉皂苷等，茶葉的藥效作用與功能活性成分的含量密切相關(guān)，準(zhǔn)確全面地對茶葉中的總皂苷、總黃酮、總多糖和茶多酚成分含量分析檢測，對研究其藥效有重要的意義[2-3]。中國北方棗樹資源豐富，且棗樹耐旱，生命力極強(qiáng)，有“鐵桿莊稼”之稱，素有“一日三棗，長生不老”之說。棗芽紅茶是源于棗樹剛生長出來的嫩芽葉，經(jīng)過采摘、萎凋、揉捻、發(fā)酵、曬青、微波殺青、烘干、提香、等級篩選包裝九道古法新工藝加工而成。隨著對茶葉降血糖作用及機(jī)制研究的深入，發(fā)現(xiàn)其能夠保護(hù)胰、肝、腎等器官，減輕胰島細(xì)胞受損，改善胰島素抵抗情況，提高胰島素活力，從而降低血糖、延緩糖尿病人病情進(jìn)程[4]。滇紅茶歷史悠久，品質(zhì)優(yōu)良，內(nèi)含的物質(zhì)豐富，有良好的保健養(yǎng)生功能，可以促進(jìn)血糖的代謝，降低血糖的含量，對控制血壓、血脂及血糖具有輔助治療的功效。棗芽紅茶與滇紅茶都是通過萎凋、揉捏、發(fā)酵、干燥等加工工藝制作而成的全發(fā)酵茶類[5]。棗芽紅茶作為一款小眾茶葉，對其活性成分及營養(yǎng)價(jià)值的研究鮮有報(bào)道。本文以滇紅茶與棗芽紅茶作比較，從含量成分和降糖效果方面探討二者的有效成分含量差異及降糖效果，以期能夠深化大眾對棗芽紅茶成分與藥效的認(rèn)知，進(jìn)而充分發(fā)揮出其所具有的潛在價(jià)值[6]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 RE-2000B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），UV-1200型紫外可見分光光度計(jì)（上海美普達(dá)儀器有限公司），TGL-20B型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），SB-5200DTD型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司），HHS-21-8型電熱恒溫水浴鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），GZX-9140MBE型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），F(xiàn)D-1A-50型冷凍干燥機(jī)（北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），BCD-200MCX美菱電冰箱（合肥美菱股份有限公司），三諾安穩(wěn)＋血糖儀（三諾生物傳感股份有限公司），AR223CN分析天平（美國奧豪斯公司）。

1.1.2 試劑 鹽酸二甲雙胍腸溶片（北京中惠藥業(yè)有限公司，批號C0220190904）；葡萄糖注射液（湖北科倫藥業(yè)有限公司，批號C200810B1）；鹽酸腎上腺素注射液(上海麥克林生化科技有限公司，批號C12027633）；生理鹽水（0.9%氯化鈉，石家莊四藥有限公司，批號1908272004）；蘆丁對照品（成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號131208）；沒食子酸對照品（成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號18032703）；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號17042603）；人參皂苷Rg1對照品（成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號150119）；D-101大孔吸附樹脂（安徽三星樹脂科技有限公司）；中性氧化鋁（上海麥克林生化科技有限公司，批號A800031-500g）；甲醇（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號GB/T683-2006）；乙醇（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號GB/T678-2002）。

1.1.3 試材 棗芽紅茶來源于山西某企業(yè)提供的陽府井棗芽紅茶樣品，滇紅茶來源于市面所售。

SPF級ICR小鼠，雄性，體重(20±5) g，由斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK（京）2019-0010，試驗(yàn)期間小鼠喂養(yǎng)于清潔級動物房，溫度20～26℃，濕度40%～70%，自由進(jìn)食水。

1.2 方法

1.2.1 茶葉水提液制備

稱取干燥棗芽紅茶葉和滇紅茶葉各100 g，分別放置圓底燒瓶中，以10/8倍量水煎煮2次，每次20 min，合并濾液，將濾液減壓濃縮至1 g/mL，即得兩種茶葉水提液，備用。

1.2.2 總黃酮類化合物成分含量測定[7-8]分別取棗芽紅茶和滇紅茶樣品各10 g，粉碎過篩后置于圓底燒瓶中，加70%乙醇200 mL，80℃水浴回流提取1.5 h，收集濾液，濃縮并揮干溶劑，殘?jiān)兴椋吹脳椦考t茶和滇紅茶總黃酮類成分提取物；精密稱定上述提取物粉末各0.01 g，以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度計(jì)法分別測定2種粉末中總黃酮類化合物的含量。

1.2.3 總多糖類化合物成分含量測定[9-10]分別取棗芽紅茶和滇紅茶樣品各10 g，粉碎過篩后置于圓底燒瓶中，加入10倍水，于70℃條件下加熱回流提取2次，每次60 min；收集合并濾液，濃縮至100 mL，按照濃縮液4倍體積加入95%乙醇，邊加邊攪拌，4℃條件下靜置24 h，以3 500 r/min離心15 min，收集沉淀，干燥殘?jiān)⒀兴椋謩e得棗芽紅茶和滇紅茶粗多糖粉末；精密稱定上述粉末各0.01 g，以葡萄糖為對照品，采用苯酚—硫酸法分別測定2種茶葉中總多糖成分的含量。

1.2.4 總皂苷類化合物成分含量測定[11]精密稱取棗芽紅茶和滇紅茶粉末各2 g，置50 mL容量瓶中，加適量水，超聲15 min，用水定容至50 mL，搖勻，放置，吸取上清液1.0 mL進(jìn)行柱層析；取層析柱，內(nèi)裝3 cm D-101大孔吸附樹脂，上加1 cm中性氧化鋁；先用25 mL 70%乙醇洗柱，棄去洗脫液，再用25 mL水洗柱，棄去洗脫液，精確加入1.0 mL上述已處理好的樣品溶液，用25 mL水洗柱，棄去洗脫液，再用25 mL 70%乙醇洗脫總皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置于60℃水浴揮干，備用；精密稱定棗芽紅茶和滇紅茶總皂苷提取物粉末各0.01 g，以人參皂苷Rg1為對照品，采用香草醛—冰醋酸顯色法分別測定2種茶葉中總皂苷成分的含量。

1.2.5 茶多酚類化合物成分含量測定[12-13]精密稱定棗芽紅茶和滇紅茶粉末各10 g，按1∶25（）的比例加入70℃預(yù)熱的70%甲醇，水浴浸提，冷卻至室溫，抽濾，濾渣同法重復(fù)浸提2次，合并濾液，濃縮至原體積的15%～20%；將上述濃縮液采用氯仿3∶1萃取一次，棄去氯仿層，將水萃取層濃縮至原體積的5%，適量超純水復(fù)溶，于10 000 r/min，4℃離心15 min，上清液冷凍干燥，常溫避光干燥保存，即得棗芽紅茶和滇紅茶茶多酚提取物粉末；精密稱定上述提取物粉末各0.01 g，以沒食子酸為對照品，采用酒石酸亞鐵法分別測定2種粉末中茶多酚類化合物的含量。

1.2.6 棗芽紅茶與滇紅茶水提物對AD致高血糖小鼠BG水平的影響[14]取小鼠50只，隨機(jī)分為正常組、腎上腺組、鹽酸二甲雙胍組（100 mg/kg）、棗芽紅茶組（10 g/kg）、滇紅組（10 g/kg），每日灌胃給藥1次，正常組和腎上腺組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)7 d；于末次給藥后1 h，對照組腹腔注射生理鹽水，其余各組均腹腔注射腎上腺素（240 μg/kg），分別在腹腔注射后0.5和1 h，斷尾取血，測定各組小鼠血糖值。

1.2.7 棗芽紅茶與滇紅茶水提物對Glu致高血糖小鼠BG水平的影響[14]取小鼠50只，隨機(jī)分為對照組、葡萄糖組、鹽酸二甲雙弧組（100 mg/kg）、棗芽紅茶組（10 g/kg）、滇紅組（10 g/kg），每組10只，每日灌胃給藥1次，正常組和葡萄糖組給予等體積的生理鹽水，每天1次，連續(xù)7 d；于末次給藥1 h后，對照組腹腔注射等體積生理鹽水，其余各組腹腔注射葡萄糖（2 g/kg）溶液，分別在腹腔注射后0.5、1、2 h后斷尾取血，用血糖儀檢測小鼠血糖值。

1.2.8 棗芽紅茶與滇紅茶水提物對正常小鼠BG水平的影響[15]取正常小鼠40只，隨機(jī)分為空白組、鹽酸二甲雙弧組（100 mg/kg）、棗芽茶紅組（10 g/kg）和滇紅茶組（10 g/kg）；每日灌胃給藥1次，空白組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)7 d；于末次給藥后1 h，斷尾取血，測定各組小鼠血糖值。

2 結(jié)果與分析

2.1 總黃酮類成分含量

以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度計(jì)法測定得到棗芽紅茶和滇紅茶中總黃酮類化合物含量分別為1.7%和1.76%，回歸方程為=11.7940.022 7，=0.999 3，線性范圍為0.02～0.06 mg/mL。

2.2 總多糖類成分含量

以葡萄糖為對照品，采用紫外分光光度計(jì)法測定得到棗芽紅茶和滇紅茶中總多糖類化合物含量分別為0.31%和0.58%，回歸方程為=20.464+ 0.202 2，=0.996 0，線性范圍為0.011 5～ 0.092 mg/mL。

2.3 總皂苷類成分含量

以人參皂苷Rg1為對照品，采用紫外分光光度計(jì)法測定得到棗芽紅茶和滇紅茶中總皂苷類化合物含量分別為0.63%和0.46%，回歸方程為= 22.292+0.004 8，=0.994 9，線性范圍為0.012 1～ 0.03 mg/mL。

2.4 茶多酚類成分含量

以沒食子酸為對照品，采用紫外分光光度計(jì)法測定得到棗芽紅茶和滇紅茶中茶多酚類化合物含量分別為2.3%和1.3%，回歸方程為=10.846+ 0.096 7，=0.998 0，線性范圍為0.01～0.06 mg/mL。

2.5 棗芽紅茶與滇紅茶對AD致高血糖小鼠BG水平的影響

腹腔注射AD后0.5和1 h，模型組小鼠血糖水平顯著升高（<0.001），且小鼠血糖值均≥ 7.6 mmol/L，提示該AD致高血糖小鼠模型穩(wěn)定可靠。腹腔注射AD后0.5 h，與模型組相比，鹽

酸二甲雙胍組小鼠血糖水平顯著降低（<0.001），棗芽紅茶和滇紅茶組小鼠血糖呈降低趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與棗芽紅茶組相比，滇紅組小鼠血糖值降低無顯著差異。腹腔注射AD 1 h后，各組小鼠血糖值均下降，與模型組相比，棗芽紅茶組、滇紅茶組小鼠血糖值均顯著降低（<0.001），棗芽紅茶組與滇紅組相比，兩組小鼠血糖值降低差異不大，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1。

表1 棗芽紅茶與滇紅茶對AD致高血糖小鼠BG水平的影響[()，n = 10]

注：“###”“##”“#”分別表示與空白組相比，差異極顯著（<0.001）、較顯著（<0.01）、顯著（<0.05）；“***”“**”“*”則表示與模型組相比，差異極顯著（<0.001）、較顯著（<0.01）、顯著（<0.05）。下同。

2.6 棗芽紅茶與滇紅茶對Glu致高血糖小鼠BG水平的影響

腹腔注射葡萄糖建立小鼠高血糖模型。腹腔注射葡萄糖0.5和1 h后，與空白組相比，模型組小鼠血糖水平均顯著升高（<0.01），且小鼠血糖值均≥7.6 mmol/L，提示該Glu 致高血糖小鼠模型穩(wěn)定可靠。腹腔注射葡萄糖0.5 h后，與模型組相比，滇紅組小鼠血糖顯著降低（<0.01），棗芽紅茶組小鼠血糖降低趨勢不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；1 h后，與模型組相比，滇紅組和棗芽紅茶組小鼠血糖水平均顯著降低（<0.05），兩組相比無明顯差異。腹腔注射葡萄糖2 h后，各組相比無明顯顯著，葡萄糖在短暫升高之后，經(jīng)過2 h體內(nèi)代謝分解，血液中葡萄糖的濃度恢復(fù)到正常值，所測得血糖無明顯差異。結(jié)果見表2。

2.7 棗芽紅茶與滇紅茶對正常小鼠BG水平的影響

與空白組相比，鹽酸二甲組小鼠血糖值均顯著降低（<0.001），棗芽紅茶組和滇紅組小鼠血糖值有升高趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。棗芽紅茶組與滇紅組小鼠血糖值同樣有升高趨勢，兩者相比差異不明顯。結(jié)果見表3。

表2 棗芽紅茶與滇紅茶對Glu致高血糖小鼠BG水平的影響[()，n = 10]

表3 棗芽紅茶與滇紅茶對正常小鼠BG水平的影響[()，n = 10]

3 討論與結(jié)論

在山西省大力發(fā)展藥茶產(chǎn)業(yè)背景下，棗芽紅茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展也迎來了一個(gè)大的機(jī)遇。棗芽紅茶屬于經(jīng)濟(jì)林藥茶范疇，具有“降三高”、抗菌消炎、抗動脈粥樣硬化、抗輻射、抗疲勞、防治冠心病、利尿消腫、明目減肥等功效，可作為人們?nèi)粘ｏ嬃蟍16]，同時(shí)開發(fā)棗芽紅茶也是對紅棗農(nóng)林經(jīng)濟(jì)的綜合利用，有助于提升紅棗產(chǎn)業(yè)附加值。關(guān)于棗芽紅茶的相關(guān)功效目前研究較少。本次試驗(yàn)以腎上腺素和葡萄糖誘導(dǎo)高血糖小鼠為模型，比較了棗芽紅茶與滇紅茶對血糖的影響，同時(shí)測定了棗芽紅茶與滇紅茶的開發(fā)在不同成分含量上的差別，為棗芽紅茶開發(fā)提供了理論依據(jù)。

結(jié)果表明，棗芽紅茶與滇紅茶的總多糖和總黃酮含量接近，但總皂苷類成分和茶多酚類成分含量棗芽紅茶略高于滇紅茶。AD和Glu誘導(dǎo)高血糖小鼠血糖結(jié)果表明，棗芽紅茶與滇紅茶均有降糖效果，但兩者相比無明顯差異，表明還有其他潛在成分影響血糖?，F(xiàn)代藥理研究表明，茶多酚具有抗氧化、降血糖和降血脂等功效，因其活性強(qiáng)、副作用小，可用于研制抗糖尿病和保肝殺菌藥物。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，膳食多酚可以調(diào)節(jié)腸道功能，改變食物的表觀血糖指數(shù)，從而降低代謝綜合征引起的血糖和血脂水平。另有研究表明，抑制葡萄糖苷酶和淀粉酶活性可有效降低血糖和血脂含量，從而起到預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥的作用[17]。皂苷及其衍生物具有降低血糖濃度、減輕糖尿病癥狀的作用[18]。有研究表明，刺五加葉皂苷通過增加進(jìn)食后胰高血糖素樣肽-1的分泌作用，使II型糖尿病患者胰島B細(xì)胞的功能得以改善，從而促進(jìn)胰島素的分泌，維持正常的血糖水平[19]；李健等[20]研究苦瓜皂苷對大鼠的影響表明，苦瓜皂苷對維持機(jī)體進(jìn)食后適度的血糖濃度具有積極的作用，可以維持機(jī)體的正常需要，防止血糖濃度過高。綜上所述，皂苷類成分和茶多酚類成分可能是棗芽紅茶和滇紅茶中起降糖作用的主要成分，同時(shí)也可能有其他未明確成分有類似作用，這有待進(jìn)一步深入研究。

本次試驗(yàn)中棗芽紅茶和滇紅茶對正常小鼠血糖值影響均不明顯，可以推測其對正常人群無明顯降糖作用。另外，本次試驗(yàn)僅以腎上腺素、葡萄糖誘導(dǎo)高血糖為模型，降糖機(jī)制探討不全面，后續(xù)還應(yīng)增加不同高血糖模型試驗(yàn)進(jìn)行機(jī)制探究，充分闡釋棗芽紅茶的降糖機(jī)制，為棗芽紅茶進(jìn)一步開發(fā)研究提供借鑒。

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Determination of Active Ingredients of Jujube Bud Black Tea and Yunnan Black Tea and Comparison on Hypoglycemic Effect

WANG Juan1REN Kele1SUN Jie1ZHANG Shuosheng1YANG Wusheng2YANG Zhuang2LIU Jinyun2

(1. College of Traditional Chinese Medicine and Food Engineering, Shanxi University of Chinese Medicine, Jinzhong, Shanxi 030619, China ; 2. Shanxi Mingyue Tea Co., Ltd , Lüliang, Shanxi 033000, China)

The effects of jujube bud black tea and Yunnan black tea on blood glucose were compared and analyzed.The content of total flavonoids, total polysaccharides, total saponins and tea polyphenols in jujube bud black tea and Yunnan black tea were determined by UV spectrophotometry;Adrenaline(AD) and Glucose(Glu) induced hyperglycemia model mice and normal mice were used to compare the regulatory effects of two kinds of tea on blood glucose. The results showed that the content of total flavonoids in jujube bud black tea and Yunnan black tea were 1.7% and 1.76%, respectively; The content of total polysaccharides were 0.31% and 0.58%, respectively; The content of total saponins were 0.63% and 0.46%, respectively; The content of tea polyphenols were 2.3% and 1.3%, respectively.Compared with the model group, jujube bud black tea group and Yunnan black tea group could significantly reduce the blood glucose level of AD and Glu induced hyperglycemia mice (< 0.05).There was no significant difference between the two groups.Compared with the blank group, jujube bud black tea group and Yunnan black tea group only increased the blood glucose of normal mice, but there was no significant difference.Jujube bud black tea and Yunnan black tea had obvious hypoglycemic effects on AD and Glu induced hyperglycemic model mice but had no obvious effect on blood glucose of normal mice.

Jujube bud black tea; Yunnan black tea; active ingredients; content determination; hypoglycemic effect

R285；TS272.54

A

10.12008/j.issn.1009-2196.2022.06.013

2021-10-31；

2022-03-03

陽府井棗芽紅茶研究項(xiàng)目（No.ZYHC20210401）。

王娟（1997—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幮庐a(chǎn)品開發(fā)與應(yīng)用，E-mail：wj978123@163.com。

張朔生（1965—），博導(dǎo)，教授，研究方向?yàn)橹兴幣谥片F(xiàn)代研究，E-mail：zhangshuosheng@aliyun.com。

（責(zé)任編輯 龍婭麗）