謝家誠，馬曉聰，羅偉生

(1.廣西中醫(yī)藥大學，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530011)

1 丙型肝炎病毒概述

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)是屬于黃病毒科的一種單鏈陽性RNA病毒，病毒顆粒體積小(40～80 nm)，通過結合脂蛋白和脂質(zhì)顆粒在血液中循環(huán)，有助于病毒逃避免疫監(jiān)控，從而有效感染肝細胞[1-2]。據(jù)統(tǒng)計，全球范圍內(nèi)大約有7100萬人感染HCV，且每年約有200萬新感染病例[3]。HCV感染可導致急性丙型肝炎，急性感染后50%～80%患者可發(fā)展為慢性丙型肝炎。慢性HCV感染會反復刺激肝細胞發(fā)生炎癥反應，進而導致肝臟功能受損，這與肝硬化、肝細胞癌、肝衰竭的發(fā)展息息相關，也是HCV感染后死亡的主要原因[4-5]。

大多數(shù)HCV粒子在血液中運輸時嵌入由甘油三酯、載脂蛋白、膽固醇或磷脂形成的低密度脂蛋白(LDL)或極低密度脂蛋白(VLDL )中，這種外殼可以幫助病毒粒子逃避病毒中和抗體，從而感染肝細胞[6]。研究[7-8]發(fā)現(xiàn)LDL受體和閉合蛋白受體是病毒粒子進入肝細胞中發(fā)揮關鍵作用的受體，病毒粒子與這些受體結合后進入細胞核內(nèi)，促進HCV復制。

HCV感染肝細胞后，先天免疫反應和適應性免疫反應都參與了HCV清除過程。在先天免疫反應中，自然殺傷(NK)細胞和干擾素(IFN)應答反應發(fā)揮了主要作用。研究[9]表明，某些NK細胞基因如編碼NK細胞免疫球蛋白樣受體DL(KIRDL)和人類白細胞抗原基因C(HLA-C)與病毒清除有關。IFN介導的先天免疫反應是抵御病毒入侵的第一道防線，IFN通過信號傳導促進細胞因子的表達，同時誘導抗病毒因子通過減少病毒的進入、復制、轉(zhuǎn)錄、翻譯、組裝和釋放而發(fā)揮抗病毒作用[10]。

在適應性免疫應答中，體液免疫和T淋巴細胞應答都參與了抗病毒反應。其中，特異性的CD4+和CD8+T淋巴細胞應答與機體自發(fā)病毒清除機制密切相關，而持續(xù)性的HCV感染歸因于T淋巴細胞應答不足[11]。已有研究[12-13]表明，當急性HCV感染發(fā)展為慢性HCV感染時，循環(huán)中T淋巴細胞亞群的頻率和比例降低。

2 長鏈非編碼RNA在HCV感染中的相關作用

長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA，lncRNA)是一類含有200多個堿基的RNA分子，廣泛分布于哺乳動物體內(nèi)，不具備編碼蛋白質(zhì)的功能[14-15]。近年來，研究[16]表明lncRNA與許多疾病的診療息息相關，逐漸成為尋找新的治療靶點和生物標志物的重要來源。根據(jù)lncRNA相鄰的編碼蛋白質(zhì)基因組的相對位置，可將其分為五類，即同義lncRNA、反義lncRNA、雙向lncRNA、內(nèi)含子lncRNA及基因間lncRNA[17-19]。其主要具有以下四種生物學功能，即信號作用、誘餌作用、引導作用和支架作用[20-21]。①信號作用：lncRNA可在空間和時間上反映轉(zhuǎn)錄因子或信號通路對基因進行調(diào)節(jié)。②誘餌作用：誘導并結合一系列調(diào)控因子，阻礙其與相應功能位點結合而發(fā)揮調(diào)控作用。③引導作用：招募特定的蛋白質(zhì)并與之結合形成復合物而發(fā)揮調(diào)控作用。④支架作用：與兩種或兩種以上的蛋白質(zhì)相結合而發(fā)揮調(diào)控作用。

2.1 影響病毒細胞生命周期 研究[22]發(fā)現(xiàn)，在HCV感染患者中l(wèi)ncRNA的表達水平升高，但lncRNA表達上調(diào)并不一定能減少病毒復制。在HCV感染中，lncRNA在病毒周期中可作為促進病毒釋放的前病毒因子，其中生長停滯特異性轉(zhuǎn)錄本5(GAS5)和HOX轉(zhuǎn)錄反義基因間RNA(HOTAIR)的過度表達可促進病毒的有效釋放[23]。GAS5在HCV感染中起誘導作用，HCV感染后GAS5表達上調(diào)并與病毒NS3蛋白結合，從而阻斷NS3功能[24]。NS3具有解旋酶活性，可以分離病毒RNA鏈，同時裂解病毒RNA二級結構和置換病毒RNA結合蛋白，從而抑制病毒RNA復制和病毒組裝[25-26]。此外，HCV感染后，HOTAIR通過結合多梳抑制復合物2(PRC2)沉默去乙?；?(SIRT1)的表達，從而改變脂質(zhì)代謝，促進病毒釋放[27-28]。因此，在HCV感染中可以靶向阻斷GAS5和HOTAIR的表達，從而影響病毒細胞生命周期，發(fā)揮抗病毒作用。

IFN介導的lncRNA通過調(diào)控干擾素刺激基因(ISG)的表達及轉(zhuǎn)錄而影響HCV的生命周期。ISG主要具有增強抗病毒反應、抑制病毒復制和幫助細胞恢復內(nèi)穩(wěn)態(tài)三種生物學功能，其通過調(diào)控病毒進入或脫殼、病毒RNA復制和翻譯以及病毒釋放等途徑來影響HCV的生命周期[29]。例如，IFN誘導性跨膜蛋白(IFITM)通過與CD81受體結合，在細胞核內(nèi)捕獲病毒粒子并進行降解，阻斷病毒進入[30-31]；TRIM5α蛋白與病毒外殼結合而加速病毒分解；TRIM22與病毒蛋白NS5A結合，可抑制病毒的轉(zhuǎn)錄和調(diào)控，從而阻斷HCV復制[32-33]。

2.2 調(diào)控IFN應答 IFN應答是天然免疫對抗病毒和其他病原微生物的關鍵組成部分。IFN應答是通過激活一系列細胞因子來誘導IFN的表達，這些細胞因子作為病原體的初始傳感器，其中維甲酸誘導基因I(RIG-I)、黑色素瘤分化相關基因5(MDA5)和膜結合型Toll樣受體(TLR)與抗RNA病毒反應密切相關，通過激活傳感器分子導致信號傳導級聯(lián)，最終誘導抗病毒基因的表達[34-36]。

IFN誘導的lncRNA可以影響IFN的合成途徑，從而增加或減少HCV復制。lncITPRIP-1和lncLRRC55-AS都是屬于抗病毒的lncRNA。lncITPRIP-1通過與MDA5羧基端結構域結合促進MDA5寡聚和激活，并增加IFN和ISG的表達，從而阻斷HCV的復制[37]。一方面，MDA5可以識別病毒RNA，并誘導激活IFN-β合成的級聯(lián)反應；另一方面，MDA5與病毒RNA結合，干擾病毒RNA復制[37]。另外，已有研究[38]發(fā)現(xiàn)感染多種病毒的小鼠經(jīng)過IFN治療后，lncLRRC55-AS表達上調(diào)。

通過IFN合成或信號通路誘導的部分lncRNA雖然具有抗病毒的功能，但也有部分lncRNA發(fā)揮負調(diào)控作用，其通過激活IFN介導的負調(diào)節(jié)因子終止IFN應答并讓細胞恢復穩(wěn)態(tài)，這種內(nèi)在的負調(diào)控機制經(jīng)常被HCV劫持，以促進HCV復制或增加HCV的有效感染[10]。研究[39]發(fā)現(xiàn)，lnc-Lsm3b是一種IFN誘導的負調(diào)控lncRNA，可以阻斷RIG-I的構象轉(zhuǎn)變，從而阻斷抗病毒的信號轉(zhuǎn)錄，進而限制IFN-β的產(chǎn)生，最終促進病毒復制。另外，lncATV/AL391832.2作為RIG-I信號的負調(diào)控因子，與RIG-I結合后會導致IFN-β和抗病毒因子的表達降低，從而促進HCV復制[40]。

在小鼠研究[41-42]中發(fā)現(xiàn)，小鼠肺組織和培養(yǎng)的小鼠胚胎成纖維細胞中有相當一部分差異性表達的基因?qū)儆趌ncRNA，在IFN刺激或感染呼吸道病毒后，lncRNA的表達或上調(diào)或下調(diào)。在小鼠模型中獲得的結果和人體細胞實驗獲得的結果非常相似。Kambara等對感染病毒的人體肝細胞進行研究，給予高劑量IFN-α2進行干預治療，72 h后觀察基因表達變化，發(fā)現(xiàn)差異性表達的lncRNA在上調(diào)和下調(diào)之間沒有統(tǒng)計學差異，這些差異性表達的lncRNA要么是鄰近的，要么是重疊的蛋白編碼基因，在免疫反應中發(fā)揮作用[43-45]。因此，IFN激活的lncRNA調(diào)控網(wǎng)絡可能在抗病毒的免疫反應中發(fā)揮重要作用。

2.3 調(diào)控ISG表達 如上所述，大量的lncRNA在IFN刺激下表現(xiàn)出差異性表達。BISPR是IFN誘導的一種lncRNA，在IFN介導下表達上調(diào)，并在細胞核內(nèi)積聚，通過反式作用來激活BST2/tetherin[46]。BST2/tetherin是一種常見的ISG，可將病毒粒子附著在細胞表面上，讓病毒粒子更容易被溶酶體降解，從而阻止病毒粒子復制[47-48]。

抗病毒反應負調(diào)控因子(NRAV)和嗜酸性粒細胞顆粒個體發(fā)育轉(zhuǎn)錄本(EGOT)都屬于IFN應答中具有負調(diào)控功能的lncRNA。研究[49]發(fā)現(xiàn)，在IFN應答中NRAV可部分阻斷ISG的表達，從而有助于病毒復制。因此，阻斷NRAV的表達可能是治療HCV的一個潛在方法。此外，一項細胞實驗研究[50]顯示，感染HCV和其他RNA病毒后，EGOT水平顯著升高，并且EGOT水平與免疫反應相關的基因水平呈負相關。而在HCV感染的細胞中，阻斷EGOT的表達可促進包括ISG15、ISG56、IFI6等在內(nèi)的ISG子集的表達，從而減少病毒復制[50]。

2.4 調(diào)控ISG轉(zhuǎn)錄 IFN介導的lncRNA可以直接影響ISG的轉(zhuǎn)錄。當機體感染HCV后，IFN-ɑ通過激活Janus激酶信號傳導及轉(zhuǎn)錄活化因子(JAK-STAT)啟動細胞內(nèi)信號級聯(lián)，STAT1和STAT2隨后聚合并與干擾素調(diào)節(jié)因子9(IRF9)結合形成干擾素刺激基因因子3(ISGF3)復合物，從而促進ISG的轉(zhuǎn)錄。另外，HCV感染后lnc-ITM2C-1上調(diào)，Ⅰ型IFN下調(diào)，并通過激活G蛋白偶聯(lián)受體55(GPR55)抑制ISG的轉(zhuǎn)錄，促進病毒復制。因此，抑制ISG的轉(zhuǎn)錄是HCV對抗IFN應答的機制之一。

3 結 語

lncRNA是近年來肝病領域研究的熱點，大多數(shù)lncRNA在HCV感染細胞中被解除調(diào)控，具有增強或阻斷抗病毒反應的功能，從而影響HCV復制。因此，這些lncRNA可以為探索新的治療靶點和生物標志物開辟新的途徑。特別是在HCV感染相關肝臟疾病中，這些生物標志物有助于HCV相關肝臟疾病的精準診斷和治療。

迄今為止，在感染HCV的細胞中進行的大多數(shù)研究都著重報道影響病毒釋放或抗病毒反應的lncRNA。未來研究應致力于探究lncRNA對HCV從急性感染到慢性感染的進展過程中的相關機制，從而為HCV相關肝臟疾病的早期診斷及早期干預治療提供新的靶點。