葛亞如，王承龍

中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院/國家中醫(yī)心血管病臨床醫(yī)學(xué)研究中心，北京 100091

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(簡稱冠心病)又稱缺血性心臟病，是指冠狀動脈粥樣硬化形成粥樣斑塊，導(dǎo)致血管管腔狹窄甚至阻塞，引起心肌缺血缺氧或壞死而形成的心臟病，是臨床常見的慢性心血管疾病。其發(fā)病因素與高血壓、高膽固醇血癥、糖尿病、肥胖及遺傳因素等有關(guān)，常用的治療手段包括血運(yùn)重建、二級預(yù)防藥物治療[1]。人參為五加科植物人參的干燥根，《神農(nóng)本草經(jīng)》載“人參，味甘，微寒。主補(bǔ)五臟，安精神，定驚悸……[2]”張錫純謂其：“人參補(bǔ)氣之力，實(shí)倍于補(bǔ)血……[3]”故將人參的功效總結(jié)為補(bǔ)益氣血?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，人參的活性成分主要有皂苷類、多糖類、有機(jī)酸和蛋白質(zhì)等[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rb3能明顯降低大鼠心肌梗死不同階段血清腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)-α、白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-1β及轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor，TGF)-β1的水平，對心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用[6]。人參皂苷Rb1可激活人體主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(phosphoinositide-3-kinase-alkaline protein kinases，PI3K-Akt)、絲裂原活化蛋白質(zhì)激酶的激酶/細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(mitogen-activated protein kinase kinase /extracellular signal-regulated protein kinase，MEK/ERK)信號通路，引起內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial-type nitric oxide synthase，eNOS)磷酸化，增加一氧化氮(nitrogen monoxide，NO)釋放[7]。人參多糖能顯著降低冠心病大鼠的死亡因子(factor associated suicide，F(xiàn)as)、B細(xì)胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma 2，Bcl-2)及Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2-associated X protein，Bax)表達(dá)水平，具有抗氧化、保護(hù)心肌線粒體的作用[8]。但上述研究都是通過基礎(chǔ)研究或查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)可能的靶點(diǎn)和通路，難以體現(xiàn)中藥治療疾病多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn)，故需要通過大數(shù)據(jù)挖掘人參與冠心病之間的靶點(diǎn)通路。

本文通過生物信息學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)方法，篩選人參治療冠心病潛在的靶點(diǎn)和通路，為后續(xù)中藥的研發(fā)和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料庫及研究流程正文所涉及的資料庫見表1，研究流程見圖1。

表1 人參治療冠心病作用靶點(diǎn)篩選所用數(shù)據(jù)庫基本信息

圖1 人參治療冠心病的分子機(jī)制研究流程圖

1.2 人參化學(xué)成分及靶點(diǎn)篩選使用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP)[9]搜索人參的主要化學(xué)成分，建立人參化合物數(shù)據(jù)庫。根據(jù)TCMSP 數(shù)據(jù)庫中藥物動力學(xué)(absorption and distribution and metabolismand excretion，ADME) 參數(shù)，構(gòu)建包括口服生物利用度(oral bioavailability，OB)、藥物類藥性(drug-likeness，DL)在內(nèi)的綜合模型以此來篩選潛在活性化合物，以O(shè)B≥30%和DL≥0.18作為閾值篩選化合物。

然后將在TCMSP數(shù)據(jù)庫中獲取的化合物的潛在靶點(diǎn)上傳至UniProt數(shù)據(jù)庫進(jìn)行靶點(diǎn)注釋[10]，限定物種為人，獲得蛋白靶點(diǎn)對應(yīng)的基因信息并導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2構(gòu)建“中藥-化合物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。

1.3 冠心病疾病靶點(diǎn)篩選以“coronary heart disease” 為關(guān)鍵詞，通過篩選OMIM、Drugbank、GeneCards、TTD、DisGeNET疾病數(shù)據(jù)庫[11-14]，合并去重后獲得冠心病相關(guān)靶點(diǎn)，并利用Uniprot 數(shù)據(jù)庫獲得冠心病靶點(diǎn)的Uniprot ID，以備后續(xù)統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 人參-冠心病共同靶點(diǎn)獲取將化合物靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)取交集，利用R程序繪制韋恩圖，獲取人參治療冠心病的共同靶點(diǎn)，并導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2構(gòu)建“人參-共同靶點(diǎn)-冠心病”網(wǎng)絡(luò)以備后續(xù)分析。

1.5 關(guān)鍵共同靶點(diǎn)篩選及分析將藥物-疾病共同靶點(diǎn)輸入STRING數(shù)據(jù)庫[15]，選取minimumrequired interaction score>0.9，構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用(proteinproteininteraction，PPI)網(wǎng)絡(luò)圖，將結(jié)果保存成tsv文件，使用Cytoscape軟件構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，借助Cytoscape的工具分析包計(jì)算網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋵W(xué)屬性，根據(jù)度值(Degree)、間距中心度(betweeness centrality，BC)及緊密中心度(closeness centrality，CC)等參數(shù)篩選出關(guān)鍵共有靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)及核心靶點(diǎn)，其中設(shè)置Degree值大于2倍中位數(shù)的為關(guān)鍵靶點(diǎn)，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)。

1.6 富集分析基因本體(gene ontology，GO)功能富集分析、京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)信號通路富集分析，將藥物與疾病的關(guān)鍵共同靶點(diǎn)上傳至DAVID平臺，參數(shù)設(shè)置為Hspecies，即可獲取GO功能富集分析中的分子功能(molecular function，MF)、生物過程(biological process，BP)、細(xì)胞組分(cellular component，CC)和KEGG信號通路富集分析結(jié)果，以P<0.05為富集分析結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，利用R軟件將結(jié)果以氣泡圖形式輸出。

1.7 構(gòu)建人參-共同靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖對1.5中獲得的藥物-疾病共同靶點(diǎn)以及1.6中獲得的通路名稱，制作network.xlsx和type.xlsx文件，導(dǎo)入Cytoscape軟件，利用Network Analyzer工具包計(jì)算網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋵傩裕缓蟾鶕?jù)Degree值設(shè)置藥物、靶點(diǎn)以及通路大小，菱形表示人參，橢圓形表示靶點(diǎn)，矩形表示通路，構(gòu)建人參-共同靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖。

1.8 關(guān)鍵化合物與核心靶點(diǎn)的分子對接為觀察人參進(jìn)入機(jī)體后，能否和機(jī)體的靶蛋白結(jié)合從而發(fā)揮藥效，將人參的關(guān)鍵化合物與篩選出的7個關(guān)鍵核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對接。首先從PubChem數(shù)據(jù)庫[16]下載人參化合物的2D結(jié)構(gòu)，保存成SDF格式，然后利用軟件ChemBio3D對化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化，保存成Mol2格式。在PDB數(shù)據(jù)庫檢索靶基因蛋白構(gòu)象[17]，并根據(jù)以下條件進(jìn)行篩選：①通過X晶體衍射法獲取的蛋白結(jié)構(gòu)；②蛋白的晶體解析度<2.5 A；③分型明確的蛋白。利用IGEMDOCK軟件進(jìn)行關(guān)鍵化合物與核心靶點(diǎn)的分子對接，得到分子對接數(shù)據(jù)[18]。使用PyMOL軟件對化合物與蛋白的相互作用進(jìn)行繪制[19]。

1.9 觀察指標(biāo)主要包括篩選的基因靶點(diǎn)及相關(guān)通路。

2 結(jié)果

2.1 人參化學(xué)成分篩選及靶點(diǎn)獲取根據(jù)設(shè)置的篩選條件，以“Homosapiens”為檢索物種，共檢索到17種中藥有效成分(見表2)，去除重復(fù)靶點(diǎn)并通過Uniprot數(shù)據(jù)庫中已經(jīng)篩選出的靶蛋白進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化注釋，最終獲得111個藥物作用靶點(diǎn)。通過TCMSP篩選中藥化學(xué)成分并獲取靶點(diǎn)后，導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2 軟件構(gòu)建人參成分-靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖(見圖2)，其中綠色圓形節(jié)點(diǎn)代表人參活性化合物(RSn)，藍(lán)色菱形節(jié)點(diǎn)代表人參作用靶點(diǎn)，連線代表化合物與靶點(diǎn)的相互作用關(guān)系。

注：綠色節(jié)點(diǎn)代表人參活性化合物；藍(lán)色節(jié)點(diǎn)代表預(yù)測靶點(diǎn)圖2 人參成分-靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖

表2 人參化合物信息

2.2 人參-冠心病靶點(diǎn)韋恩圖分析將獲取的中藥靶點(diǎn)與目標(biāo)疾病相關(guān)聯(lián)的靶點(diǎn)進(jìn)行韋恩圖疊加分析，可以快速得到藥物與疾病相互作用的目標(biāo)靶點(diǎn)。通過篩選上述疾病數(shù)據(jù)庫合并去重后共獲得冠心病相關(guān)靶點(diǎn)1 886個，人參預(yù)測獲得的靶點(diǎn)111個，利用R程序包繪制人參預(yù)測靶點(diǎn)與冠心病靶點(diǎn)韋恩圖，得到58個共同靶點(diǎn)，見圖3。

注：Disease表示冠心病，Drug表示人參，兩圓重合部分表示58個共同靶點(diǎn)圖3 藥物-疾病共同靶點(diǎn)韋恩圖

2.3 關(guān)鍵共同靶點(diǎn)篩選通過Cytoscape中BisoGenet軟件繪制共同靶點(diǎn)間的相互作用網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行拓?fù)浞治?，選取Degree≥二倍中位數(shù)，BC及CC大于中位數(shù)逐次篩選出關(guān)鍵共同核心靶點(diǎn)，共涉及175個節(jié)點(diǎn)(node)和3 406條邊(edge)，見圖4。

圖4 人參-冠心病關(guān)鍵靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 人參治療冠心病共同靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)分析構(gòu)建藥物治療目標(biāo)疾病的潛在靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)有助于更系統(tǒng)地研究疾病分子機(jī)制，更直觀地了解藥物與疾病之間潛在靶點(diǎn)的關(guān)聯(lián)。將上述獲得的58個藥物-疾病共同靶點(diǎn)輸入STRING數(shù)據(jù)庫，構(gòu)建人參治療冠心病共同靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)(圖5)。網(wǎng)絡(luò)中共有58個節(jié)點(diǎn)和425條邊。通過Network Analyzer工具包分析，選取Degree≥二倍中位數(shù)，得到7個關(guān)鍵共有靶點(diǎn)和21條邊。關(guān)鍵靶點(diǎn)間的詳細(xì)信息見表3。

注：菱形紅色節(jié)點(diǎn)表示Degree≥28的靶點(diǎn)，其他圓形藍(lán)色節(jié)點(diǎn)表示Degree<28的靶點(diǎn)，節(jié)點(diǎn)越大代表該節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中越重要。AKT1為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，TNF為腫瘤壞死因子，PTGS2為前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2，IL-1β為白細(xì)胞介素1b，CASP3為半胱天冬酶，JUN為JUN原癌基因，NOS3為一氧化氮合酶3圖5 人參治療冠心病的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

表3 人參治療冠心病的關(guān)鍵靶點(diǎn)信息

2.5 GO功能、KEGG信號通路富集分析將58個共同靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID平臺進(jìn)行GO功能、KEGG功能富集分析，分別得到416個GO功能、富集分析條目及97個KEGG信號通路富集分析條目。MF富集結(jié)果共包含61個條目，主要涉及蛋白質(zhì)結(jié)合、酶結(jié)合、受體結(jié)合、RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子活性，配體激活序列特異性DNA結(jié)合、血紅素結(jié)合等方面。BP富集結(jié)果共有299個條目，主要涉及調(diào)控轉(zhuǎn)錄、凋亡過程、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、炎癥反應(yīng)、氧化還原、血管生成等方面。CC富集結(jié)果共有35個條目，主要涉及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、質(zhì)膜、細(xì)胞溶質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)等方面。根據(jù)P值大小(P<0.01)，用條形圖分別列舉了各類前10位的條目(圖6)。

圖6 GO功能富集分析

對KEGG信號通路富集分析結(jié)果中前20條通路進(jìn)行可視化處理，見圖7。圖中氣泡的大小表示該條目下基因的個數(shù)，氣泡越大則基因數(shù)越多；顏色表示調(diào)整后的P值，顏色越紅表示P值越小，富集結(jié)果越明顯。根據(jù)Count值排序，大于中位數(shù)(6)的通路主要有TNF(12)、環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate，cAMP)(10)、PI3K-Akt(9)、MAPK(8)、Toll樣受體(8)及核蛋白因子-κB(Nucleoprotein factor-κB，NF-κB)(8)信號通路，其中TNF及cAMP信號通路更為重要，選擇這些條路進(jìn)行繪制，見圖8、圖9。

圖7 KEGG信號通路富集分析

注：圖中矩形框代表基因(蛋白質(zhì))，白色節(jié)點(diǎn)代表通路蛋白，紅色代表人參的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)，實(shí)線箭頭代表激活，虛線箭頭代表間接關(guān)系，兩個箭頭中間帶圈的表示表達(dá)圖8 KEGG-TNF信號通路

注：圖中矩形框代表基因(蛋白質(zhì))，白色節(jié)點(diǎn)代表通路蛋白，紅色代表人參的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)，實(shí)線箭頭代表激活，虛線箭頭代表間接關(guān)系，兩個箭頭中間帶圈的表示表達(dá)圖9 KEGG-cAMP信號通路

2.6 構(gòu)建人參-共同靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖篩選KEGG信號通路條目中Count值>中位數(shù)(6)的條目共37條，然后構(gòu)建人參-共同靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖，見圖10。網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)越大表明該節(jié)點(diǎn)越重要，該網(wǎng)絡(luò)中共包含41個藥物-疾病共同靶點(diǎn)、37條KEGG信號通路、79個節(jié)點(diǎn)和368條邊。共同靶點(diǎn)根據(jù)Degree值進(jìn)行排序，前10位的靶點(diǎn)分別是AKT1、TNF、PI3KCG、NF-κBIα、JUN、IL-1β、CASP3、TGF-β1、BCL2、CASP8。

注：黃色菱形表示人參，綠色橢圓形表示共同靶點(diǎn)，紅色矩形表示通路。RS表示人參；AKT1為絲氨酸/蘇氨酸激酶1；TNF為腫瘤壞死因子；PI3KCG為磷脂酰肌醇3-激酶；NF-κBIα為NF-κB 抑制劑α；JUN為JUN原癌基因；IL-1β為白細(xì)胞介素1β；CASP3半胱天冬酶3；TGF-β1為轉(zhuǎn)化生長因子β1；BCL2為B細(xì)胞淋巴瘤2，是一種細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子；CASP8為半胱天冬酶8圖10 人參-共同靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖

2.7 關(guān)鍵化合物與核心靶點(diǎn)的分子對接選取Degree值>中位數(shù)(10)的化合物共9個，與7個核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對接。IGEMDOCK軟件分子對接結(jié)果以能量高低來判斷化合物與靶點(diǎn)的結(jié)合程度，能量值越低代表親和力越大，具體對接結(jié)果信息見表4。ginsenoside rh2與PTGS2結(jié)合親和力最強(qiáng)，對其進(jìn)行可視化分析，見圖11。

表4 關(guān)鍵化合物與核心靶點(diǎn)的分子對接 (kcl·mol-1)

圖11 PTGS2與ginsenoside rh2的分子對接模式圖

3 討論

《中國心血管健康與疾病報(bào)告2020概要》指出，中國心血管患病率處于持續(xù)上升階段，冠心病現(xiàn)患人數(shù)為1 139萬，并且其發(fā)病趨勢呈年輕化，給家庭及社會造成巨大的負(fù)擔(dān)[1]。目前，冠心病的治療藥物主要以二級預(yù)防藥物為主，如抗血小板藥物、β受體阻滯劑、降血脂血壓藥物等。冠心病屬中醫(yī)“胸痹心痛”范疇。人參大補(bǔ)元?dú)?，主治氣虛證、氣虛血瘀證，已經(jīng)被證實(shí)治療冠心病有效，但有關(guān)人參治療冠心病靶點(diǎn)和通路的研究有限，大部分通過前期試驗(yàn)或文獻(xiàn)查閱所得，所以本文旨在通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法探討人參治療冠心病的分子作用機(jī)制。

文章按照設(shè)置的篩選條件，共篩選出17個人參的有效成分，58個人參-疾病共同靶點(diǎn)，按Degree值篩選出7個關(guān)鍵共同靶點(diǎn)，主要與炎癥、免疫及細(xì)胞增殖凋亡等相關(guān)，包括AKT1、TNF、PTGS2、IL-1β、CASP3、JUN、NOS3。

AKT1是3種密切相關(guān)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(AKT1、AKT2、AKT3)之一[20]，參與調(diào)節(jié)包括代謝、增殖、細(xì)胞存活、生長和血管生成等多種過程，是PI3K-Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的重要中間分子，與動脈粥樣硬化斑塊形成有關(guān)，是心血管疾病的關(guān)鍵參與者[21-22]。TNF作為NF-κB通路的上游信號分子，可促進(jìn)其他細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生，加劇冠心病的慢性炎癥反應(yīng)，對于啟動炎癥-免疫應(yīng)答、動員級聯(lián)反應(yīng)具有重要作用[23]。PTGS2亦稱環(huán)加氧酶，負(fù)責(zé)參與炎癥和有絲分裂的前列腺素的生物合成，其作用途徑與催產(chǎn)素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和免疫反應(yīng)有關(guān)途徑相關(guān)，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡過程[24]。IL-1β是一種強(qiáng)效的促炎細(xì)胞因子，通過與TNF和IL-6協(xié)同誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子產(chǎn)生，在血管生成中發(fā)揮作用。CASP3參與細(xì)胞凋亡、壞死和炎癥的信號通路。NOS3是產(chǎn)生NO的一種合酶，PI3K-Akt-NOS通路的抑制會影響NO的釋放，加劇血管收縮，加重冠狀動脈粥樣硬化斑塊形成、缺血。冠心病患者的血管長期處于炎癥狀態(tài)，TNF、IL-1β等促炎因子升高，而促炎因子的過度釋放會導(dǎo)致細(xì)胞毒性，損傷心血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能[25-26]。冠心病患者心肌細(xì)胞可能會出現(xiàn)壞死、凋亡等過程，導(dǎo)致功能性心肌細(xì)胞含量減少。文章中PPI網(wǎng)絡(luò)發(fā)現(xiàn)，人參通過作用于CAPS3、BCL2等凋亡基因，抑制Caspase3表達(dá)及Bcl2/Bax比例從而減少心肌細(xì)胞凋亡，維持冠心病患者心肌細(xì)胞正常形態(tài)和功能。研究表明，在人體主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中，人參可激活PI3K-Akt信號通路，引起eNOS磷酸化，增加NO釋放，并能減輕細(xì)胞脂質(zhì)過氧化損傷；在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中，人參可通過下調(diào)microRNA的表達(dá)，增加eNOS合成，促進(jìn)細(xì)胞遷移及血管生成[27-28]。

GO功能富集分析結(jié)果顯示，人參治療冠心病的生物學(xué)進(jìn)程主要集中在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖與凋亡。KEGG信號通路富集分析結(jié)果表明，疾病-藥物共同靶點(diǎn)主要富集在TNF、cAMP、PI3K-Akt及MAPK信號通路。根據(jù)人參-共同靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖，在Cytoscape數(shù)據(jù)庫中，利用“Ctrl+6”“Ctrl+N”快捷鍵，可以看出有12個靶點(diǎn)參與了TNF信號通路，其中有關(guān)鍵靶點(diǎn)AKT1、TNF；有10個靶點(diǎn)參與了cAMP信號通路，其中有關(guān)鍵靶點(diǎn)AKT1、JUN；有9個靶點(diǎn)參與了PI3K-Akt信號通路，其中關(guān)鍵靶點(diǎn)AKT1、NOS3參與了該過程；各有8個靶點(diǎn)參與了MAPK和Toll樣受體信號通路，其中有靶點(diǎn)AKT1、TNF。從而可知，人參的重要靶點(diǎn)AKT1主要通過TNF、cAMP、MAPK、PI3K-Akt及Toll樣受體信號通路發(fā)揮抗炎與抑制心肌細(xì)胞凋亡的作用。另外，TNF靶點(diǎn)有21條通路，在關(guān)鍵通路中與TNF、MAPK、Toll樣受體和NF-κB信號通路有關(guān)；PIK3CG靶點(diǎn)有21條通路，在關(guān)鍵通路中與TNF、PI3K-Akt、cAMP、Toll樣受體信號通路有關(guān)；NFKBIA靶點(diǎn)有18條通路，在關(guān)鍵通路中與TNF、NF-κB、cAMP和Toll樣受體信號通路有關(guān)。

采用分子對接技術(shù)，將人參中的主要成分山柰酚(kaempferol)、β-谷甾醇(beta-sitosterol)、富馬酸(fumarine)、豆甾醇(stigmasterol)、山槐素(inermin)、吉九里香堿(girinimbin)、4-羥基苯甲酸(dianthramine)、花生苷酸(arachidonate)和人參皂苷Rh2(ginsenoside rh2)，與核心靶點(diǎn)AKT1、TNF、PTGS2、IL-1β、CASP3、JUN和NOS3進(jìn)行結(jié)合能力測試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)人參皂苷rh2與PTGS2結(jié)合能力最強(qiáng)。

綜上所述，人參通過AKT1、TNF、PTGS2、IL-1β、CASP3、JUN、NOS3等關(guān)鍵靶點(diǎn)與TNF、cAMP、MAPK、PI3K-Akt、Toll樣受體及NF-κB等多條主要信號通路發(fā)揮抗炎、促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡的方式治療冠心病。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的應(yīng)用為中藥治療疾病的研究提供了新的方法和技術(shù)，有助于更高效地預(yù)測相關(guān)靶點(diǎn)和通路，但是后續(xù)仍需體內(nèi)或體外實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。