韓慶莉肖小陽(yáng)謝永輝王 鐸李志剛 劉申艷李星慧陳雅瓊

（1.西南林業(yè)大學(xué)生物多樣性保護(hù)學(xué)院，云南昆明 650233；2.云南省煙草公司昆明市公司，云南昆明 650051）

農(nóng)藥的混配是減緩農(nóng)藥抗藥性、防治新型病害、延長(zhǎng)農(nóng)藥壽命和提高藥效的一項(xiàng)重要措施，近幾十年來(lái)，農(nóng)藥混劑開(kāi)發(fā)一直占據(jù)著我國(guó)農(nóng)藥生產(chǎn)的重要地位[1]。農(nóng)藥的混配不是簡(jiǎn)單的將不同活性成分的單劑隨意混合在一起，混劑的作用效果也不是簡(jiǎn)單的將兩單劑效果相加。不同單劑混配后的效果可分為增效、加成和拮抗3種，配劑增效具有實(shí)際應(yīng)用意義，因此需要科學(xué)的混配方法和評(píng)價(jià)體系[2]。目前已建立的農(nóng)藥混配評(píng)價(jià)方法有等效線法[3]、Colby 法[4]、Gowing法[5]、回歸分析法[6]、共毒系數(shù)法[7]、Abbott 法[8]及Wadley法[9]等，每種混配方法都有相應(yīng)評(píng)價(jià)指標(biāo)，這些方法曾被不同學(xué)者用于農(nóng)藥的混用效果評(píng)價(jià)[10-13]，其中Wadley方法是評(píng)價(jià)殺菌劑混劑相互作用通常采用的方法[9,14]。

吡唑醚菌酯是一種高活性的新型殺菌劑，可防治柑橘（Citrusreticulata）、香蕉（Musanana）、蘋(píng)果（Malus pumila）、煙草（Nicotianatabacum)及多植物灰霉病、霜霉病、白粉病、疫病、瘡痂病、黑星病等真菌病害[15]。氰烯菌酯是一類2-氰基丙烯酸酯類殺菌劑，可用于防治鐮刀菌引起的枯萎病、惡苗病、赤霉病等真菌病害[16]。實(shí)踐中已有不少將吡唑醚菌酯、氰烯菌酯與其他藥劑混用實(shí)例[17-19]，但未見(jiàn)將這2種殺菌劑混配的報(bào)道。植物病原真菌厚垣鐮刀菌（Fusariumchlamydosporum）、煙草疫霉菌和立枯枯絲核（Rhizoctonia solani） 是植物土傳病害的重要病原菌，除引起多種農(nóng)作業(yè)病害外[20]，還可引起不同經(jīng)濟(jì)林木、綠肥、園林樹(shù)木病害，如厚垣鐮刀菌引起國(guó)槐潰瘍病[21]、藍(lán)花楹（Jacarandamimosifolia）莖腐病等樹(shù)木病害[22]、阿爾及利亞地中海油松（Pinushalepensis）幼苗腐爛病[23]及番石榴的枯萎病等[24]；煙草疫霉菌（P.nicotianae)引起的煙草黑脛病是烤煙世界性土傳病害，每年給煙草生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[25]；立枯絲核也可引起具有重要價(jià)值的植物如大豆（Glycinemax）、紫花苜蓿（Medicago sativa）、甜菜（Betavulgaris）、小麥（Triticumaestivum）、水稻（Oryza sativa）、棉花（Gossypiumspp.）和煙草等引起根腐病，立枯絲核菌引起的根腐病于芒果（Mangiferaindica）和葡萄（Vitisvinifera）等果腐病[26-27]。本研究用Wadley法評(píng)價(jià)吡唑醚菌酯和氰烯菌酯混用對(duì)以上3種病原菌的抑菌效果，為實(shí)踐應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 培養(yǎng)基和供試藥劑

250 g/L吡唑醚菌酯乳油（EC）由巴斯夫植物保護(hù)江蘇有限公司生產(chǎn)。25%氰烯菌酯懸浮劑（SC）由江蘇省農(nóng)藥研究所股份有限公司生產(chǎn)。馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 供試菌株

厚垣鐮刀菌、立枯絲核菌、煙草疫霉菌均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所惠贈(zèng)。

1.3 單劑抑菌率

采用生長(zhǎng)測(cè)速法測(cè)藥劑對(duì)病原菌的抑制效果[28]。每種藥劑設(shè)5個(gè)梯度濃度，每個(gè)濃度設(shè)3次重復(fù)，不加藥劑PDA培養(yǎng)基為對(duì)照，接種菌株培養(yǎng)72 h后十字交叉法測(cè)菌落直徑。

1.4 Wadley法評(píng)價(jià)混劑效果

首先分別構(gòu)建不同單劑以及混劑的劑量-反應(yīng)曲線，通過(guò)邏輯斯蒂值-對(duì)數(shù)或最恰當(dāng)?shù)母怕?對(duì)數(shù)將劑量—反應(yīng)曲線轉(zhuǎn)化為直線，計(jì)算出各配比下的理論EC(th)值[9]。

公式（2）中a、b為單劑在混劑中的組分，EC(A)50、EC(B)50為單劑實(shí)測(cè)的EC50值；EC50(th)為混劑的理論值，EC50(ob)為混劑的實(shí)測(cè)值；公式（3）的SR表示相互作用程度，當(dāng)SR在0.5～1.5之間時(shí)，為加成作用，當(dāng)SR≥1.5時(shí)，為增效作用；當(dāng)SR≤0.5時(shí)為拮抗作用[9]。

本試驗(yàn)中，分別稱取吡唑醚菌酯（py）和氰烯菌酯（ph）配制為1.00 mg/L藥液，2種藥劑相按3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3的體積比混配，每個(gè)配比依次稀釋得到2.50、1.25、0.63、0.31、0.15 mg/L的5個(gè)濃度，1個(gè)配比1個(gè)濃度為1個(gè)處理，共20個(gè)處理，1個(gè)對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次，用公式（1）計(jì)算實(shí)際抑制率，并計(jì)算出混配后的實(shí)際EC50(ob)。

2 結(jié)果與分析

2.1 吡唑醚菌酯對(duì)3種病原菌的抑制作用

試驗(yàn)濃度內(nèi)吡唑醚菌酯和氰烯菌酯對(duì)3種病原菌抑制率分別見(jiàn)表1和表2。吡唑醚菌酯對(duì)厚垣鐮刀菌的抑制活性顯著高于煙草疫霉菌和立枯絲核菌，抑制率為25%～70%，對(duì)煙草疫霉菌和立枯絲核菌的活性無(wú)顯著差異，最高試驗(yàn)濃度1.00 mg/L時(shí)抑制率約50%，當(dāng)濃度為0.06 mg/L時(shí)已無(wú)抑制活性。

表1 吡唑醚菌酯對(duì)3種病原菌的抑制率Table 1 Inhibition rate of pyrazolyl methyl ester to 3 kinds of pathogenic bacteria %

表2 不同濃度氰烯菌酯對(duì)3種菌的抑制率Table 2 Inhibition rate of cymenate at different concentrations to 3 kinds of bacteria %

2.2 Wadley法評(píng)價(jià)下混劑的作用效果

2.2.1 對(duì)厚垣鐮刀菌的抑制

吡唑醚菌酯和氰烯菌酯混配對(duì)厚垣鐮刀菌的作用見(jiàn)表3所示。在5個(gè)試驗(yàn)配比中，除了吡唑醚菌酯與氰烯菌酯為3∶1的處理為加成作用外，其余4個(gè)配比均為增效作用，增效程度隨著氰烯菌酯比值增大而增大。

表3 混劑對(duì)厚垣鐮刀菌的EC50及混配效果Table 3 EC50 and mixing effect of themixture on F.candidum

2.2.2 對(duì)煙草疫霉菌的抑制

吡唑醚菌酯和氰烯菌酯不同配比對(duì)煙草疫霉菌的抑制效果見(jiàn)表4。所有配比的抑制效果均強(qiáng)于單劑，當(dāng)混配比為3∶1時(shí)，增效系數(shù)1.47，表現(xiàn)為加成作用，其余各配比均表現(xiàn)為增效作用，增效效果與氰烯菌酯比例成正相關(guān)，配比為1∶3時(shí)增效結(jié)果最為顯著。

表4 混劑對(duì)煙草疫霉菌的EC50及混配效果Table4 EC50 of the mixture against P.nicotianae and itsmixing effect

2.2.3 立枯絲核菌的抑制

吡唑醚菌酯和氰烯菌酯不同配比對(duì)立枯絲核菌的生長(zhǎng)均有抑制，且抑菌效果均強(qiáng)于單劑（表5）。當(dāng)混配比為1∶3時(shí)，增效系數(shù)為0.90，表現(xiàn)為加成作用，其余各配比均表現(xiàn)為增效作用，且當(dāng)配比為2∶1時(shí)EC50值最低，增效作用最顯著，該配比下對(duì)立枯絲核的抑制作用最佳。

表5 混劑對(duì)立枯絲核菌的EC50及混配效果Table 5 EC50 of the mixture against R. solani and itsmixing effect

3 結(jié)論與討論

厚垣鐮刀菌、煙草疫霉菌和立枯絲核菌引起的植物病害多為土傳病害，原菌主要分布在土壤中且在苗期或成株期都可以從傷口侵入根部，化學(xué)防治仍是目前主要防治手段，且對(duì)于化學(xué)試劑的使用方法具有較高的要求，藥劑量大容易造成環(huán)境的污染，量小則達(dá)不到防治的效果[29]。目前未有將吡唑醚菌酯與氰烯菌酯混配用于煙草、牧草、經(jīng)濟(jì)林、林木病害防治的報(bào)道。從試驗(yàn)結(jié)果可知，吡唑醚菌酯與氰烯菌酯混配對(duì)鐮刀菌、煙草疫霉菌和絲核立枯病菌的作用效果都沒(méi)有拮抗作用，3種病菌中，只有1個(gè)配比表現(xiàn)為加成作用，其余都為增效作用。吡唑醚菌酯：氰烯菌酯3∶1對(duì)鐮刀菌和煙草疫霉菌均為加成作用，而對(duì)絲核菌表現(xiàn)增效作用。當(dāng)吡唑醚菌酯：氰烯菌酯2∶1、1∶1和1∶2時(shí)，對(duì)鐮刀菌、煙草疫霉菌、立枯絲核菌均為增效作用。因此，吡唑醚菌酯與氰烯菌酯在該范圍復(fù)配，均能取得良好的增效效果。研究結(jié)果可為煙草及林木病害防控提供理論依據(jù)。在實(shí)際應(yīng)用中，可根據(jù)2種藥劑的成本及防治對(duì)象，靈活地確定配比范圍為2∶1至1∶2。如針對(duì)鐮刀菌引起的病害發(fā)生嚴(yán)重，建議采用吡唑醚菌酯：氰烯菌酯=1∶2的配比，當(dāng)絲核菌引起的病害發(fā)生嚴(yán)重時(shí)，建議采用吡唑醚菌酯∶氰烯菌酯=2∶1的配比。