李建平

摘 要：隨著社會經(jīng)濟快速發(fā)展，維生素B1（vitaminB1，VB1）又稱為硫胺素（thiamin），也可稱為抗神經(jīng)炎因子（aueurin）。近年來的研究表明，VB1對于細胞的生長和發(fā)育、參與碳水化合物和能量代謝方面具有重要作用，同時在維持神經(jīng)、肌肉特別是心肌的正常功能，以及維持正常食欲、胃腸蠕動和消化分泌中均扮演著不可或缺的角色。缺乏VB1在臨床上會導(dǎo)致心血管疾病和神經(jīng)性障礙。然而，所有哺乳動物都不具備內(nèi)源合成VB1的能力，同時人體內(nèi)的VB1也不能大量儲存，必須通過外源食物的補充來維持體內(nèi)的穩(wěn)態(tài)。

關(guān)鍵詞：食品；維生素B1；測定

引言

采用高效液相色譜法檢測輔食營養(yǎng)補充品中維生素B1的含量。樣品在稀鹽酸介質(zhì)中恒溫水解、中和后酶解，水解液用活性人造沸石凈化，凈化液用堿性鐵氰化鉀溶液衍生，正丁醇萃取后經(jīng)C18反相色譜柱分離，用高效液相色譜-熒光檢測器檢測，外標法定量。通過優(yōu)化前處理方式調(diào)整衍生液濃度以及樣品凈化的方式，本方法標準曲線相關(guān)系數(shù)≥0.999，加標回收率在95.2%～99.0%，保留時間穩(wěn)定且重復(fù)性好，RSD值為1.0%，衍生液濃度在40～60g·mL-1，結(jié)果顯示本方法適用于檢測維生素B1含量較高的輔食營養(yǎng)補充品，減少雜質(zhì)干擾結(jié)果準確度高。

1高效液相色譜原理

高效液相色譜其原理是單一或不同比例流動相經(jīng)混合以后經(jīng)高壓系統(tǒng)輸送，承載待測樣品迚入分離器，根據(jù)待測樣品在固定相和流動相之間的分配系數(shù)不同，相互作用力強弱，使待測樣品在兩相之間呈反復(fù)吸附-分離狀態(tài)，樣品中各成分運動速度不同，配以不同洗脫能力的流動相將待測樣品依次洗脫出來，經(jīng)過檢測器，產(chǎn)生電信號，通過記錄儀解讀出待測樣品圖譜。根據(jù)待測樣品物理化學(xué)特性可選擇適當(dāng)?shù)臋z測器，如紫外檢測器、示差檢測器、熒光檢測器及二極管陣列檢測器等。與傳統(tǒng)液相色譜相比，高效液相色譜可以更快速、高效、準確靈敏地對樣品迚行檢測，待測樣品僅5min即可完成檢驗。同時高效液相色譜檢測應(yīng)用范圍相對更廣，現(xiàn)存的有機物中70%～80%都可以利用其迚行分析檢測。一般沸點高、熱穩(wěn)定性差、分子量較大等有機物都可以用高效液相色譜迚行檢測。高效液相色譜對樣品的前處理及純化程度要求較高，易出現(xiàn)假陽性，采用高效液相質(zhì)譜與質(zhì)譜儀聯(lián)用，可有效解決假陽性問題幵能簡化樣品前處理工序，同時高效液相色譜法-串聯(lián)質(zhì)譜法抗基質(zhì)干擾能力強，定量定性靈敏度高，檢測效率快，可以更準確地對樣品迚行檢測和分析，在食品安全檢驗檢測領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用，為食品安全檢測提供良好的技術(shù)支持。

2方法

樣品前處理--試液提取。準確稱取樣品約0.5g于50mL錐形瓶中，加入30mL0.1mol·L-1鹽酸溶液與樣品混勻，塞上軟塞放入高壓滅菌鍋120℃保持30min，水解結(jié)束待冷卻拿出。此時樣品水解液pH為2.0～2.5，用10g·L-1的氫氧化鈉溶液調(diào)至pH為4.5，加入2mL混合酶溶液（木瓜蛋白酶1.76g/50mL＋淀粉酶1.27g/50mL），搖勻后置于37℃培養(yǎng)箱中放置約16h，將酶解液轉(zhuǎn)至50mL比色管中，用水定容至刻度線，搖勻，離心取上清液備用，同時做空白試驗[4-6]。

樣品凈化。用少許脫脂棉鋪于層析柱底部，加水將棉中氣泡排出加入已活化好的活性人造沸石約8g（高度不低于45mm），液面不低于活性人造沸石。準確加入20mL上述樣品提取液，以流速1滴/s通過裝好的凈化柱，加入10mL近沸騰的熱水沖洗凈化柱，棄去淋洗液，如此重復(fù)2次。于層析柱下放置25mL比色管收集洗脫液，加入20mL溫度約為90℃的酸性氯化鉀洗脫溶液，流速保持1滴/s，待洗脫液冷卻至室溫后用250g·L-1酸性氯化鉀定容搖勻，即為凈化液。

試液衍生。準確移取上述凈化液2.0mL于10mL試管中，加入2.0mL堿性鐵氰化鉀溶液（分別加入20、30、40、60g·mL-1），渦旋混勻后，準確加入2.0mL正丁醇，再次渦旋混勻約2min后靜置10min，約樣品出現(xiàn)乳化現(xiàn)象應(yīng)轉(zhuǎn)至離心管離心處理，待分層后取上層正丁醇萃取層經(jīng)0.45μm有機微孔濾膜過濾至棕色進樣品中，待上機檢測。

3結(jié)果與分析

3.1不同檢測方法的對比與討論

GB5009.84—2016《食品安全國家標準食品中維生素B1的測定》規(guī)定了高效液相色譜法和熒光光度法2種不同的分析方法用于測定食品中VB1，其中高效液相色譜法規(guī)定樣品通過稀鹽酸介質(zhì)恒溫水解、中和、酶解，水解液用堿性鐵氰化鉀衍生，正丁醇萃取，液相分離熒光檢測器定量，定量限為0.1mg/100g。其更適用于天然食品及簡單配方的保健食品，而用于例如多種維生素礦物質(zhì)片樣品，則在樣品前處理階段無法避免各營養(yǎng)素之間的相互氧化還原反應(yīng)，VB1的實測值不足理論添加量的一半，難以用于定量分析。同時其前處理步驟復(fù)雜，檢測效率較低。2020版《中國藥典》[22]則通過滴定法或紫外分光光度法進行VB1的含量測定，不僅同樣無法避免各營養(yǎng)素之間的相互干擾，同時定量限較高，無法滿足保健食品-復(fù)合營養(yǎng)素補充劑樣品中VB1的含量測定。

3.2精密度考察

儀器進樣精密度考察。針對對照品溶液和樣品溶液，分別重復(fù)6次進樣，記錄VB1主峰峰面積，考察色譜方法中的儀器精密度情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對照品溶液的儀器精密度為0.42%；樣品溶液的儀器精密度為0.87%，說明此儀器方法精密度良好。

重復(fù)性考察。重復(fù)平行6次樣品前處理及儀器測定過程，分析同批次樣品中的VB1含量，以考察本方法的重復(fù)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)6次實驗的相對標準偏差（relativestandarddeviations，RSDs）為0.61%，說明本方法的重復(fù)性較好。

3.3耐用性考察

為了考察本儀器方法的耐用性，通過在小范圍內(nèi)改變液相分析方法的柱溫和流速參數(shù)，按同樣的前處理方法測定多種維生素礦物質(zhì)片樣品中的VB1含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在流速變動±0.05mL/min以及柱溫變動±3℃的條件下，樣品溶液色譜圖中的VB1主峰峰型仍保持良好，與周圍雜質(zhì)的分離度控制在1.35～2.78范圍內(nèi)，主峰理論塔板數(shù)均在7200以上。達到基線分離要求而不影響定量分析，同時參數(shù)改變后計算的定量結(jié)果恒定，由此證明本方法耐用性良好。

結(jié)語

高效液相色譜在食品安全檢測斱面應(yīng)用廣泛，収展迅速，在食品研収及檢測斱面應(yīng)用日益成熟，近幾年專家學(xué)者致力于簡化實驗程序，提高檢測效率，擴大應(yīng)用范圍，完善已有檢驗檢測斱法。維生素B1在檢測過程中易受水分、溫度、微量元素等各種因素的影響而降解，沸石具有較強的吸附性，樣品通過活化后的人工沸石凈化后，凈化提取液加入衍生檢測。

參考文獻：

[1] 張隆龍，王海燕，胡 越，等.高效液相色譜法測定嬰幼兒配方乳粉中的維生素B1、B2[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2019（1）：129-134.

[2] 李丹.在線衍生高效液相色譜熒光光譜法測定食品中維生素B1[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2018，9（20）：5445?5451.

[3] 高娜.高效液相色譜技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用[C].《決策與信息》雜志社、北京大學(xué)經(jīng)濟管理學(xué)院，2017.