39%噻嗪酮·螺蟲(chóng)乙酯懸浮劑分析方法研究

侯影，吳迪，梁觀(guān)鳳，林培旺，諶偉

(1.上海悅聯(lián)生物科技有限公司，上海 201215；2.北京市植物保護(hù)站，北京 100120；3.上海悅聯(lián)化工有限公司，上海 201416)

噻嗪酮(buprofezin)屬雜環(huán)類(lèi)昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)合成抑制劑，對(duì)鞘翅目、部分同翅目以及蜱螨目具有持效性殺幼蟲(chóng)活性，目前主要登記用于水稻、果樹(shù)、茶樹(shù)、蔬菜等作物害蟲(chóng)的防治，可有效防治大葉蟬科、飛虱科、粉虱科、蚧科、盾蚧科和粉蚧科等害蟲(chóng)[1]。螺蟲(chóng)乙酯(spirotetramat)是具有雙向內(nèi)吸傳導(dǎo)性能的季酮酸類(lèi)殺蟲(chóng)劑，與拜耳公司的殺蟲(chóng)殺螨劑螺螨酯(spirodiclofen)和螺甲螨酯(spiromesifen)屬同類(lèi)化合物，可以在整個(gè)植物體內(nèi)上下移動(dòng)，抵達(dá)葉面和樹(shù)皮，從而防治如生菜和白菜內(nèi)葉上及果樹(shù)皮上的害蟲(chóng)，抑制害蟲(chóng)的卵和幼蟲(chóng)生長(zhǎng)，保護(hù)新生莖、葉和根部，且持效期長(zhǎng)，可提供長(zhǎng)達(dá)8 周的有效防治[1]。螺蟲(chóng)乙酯與噻嗪酮復(fù)配具有延緩抗藥性、殺蟲(chóng)殺卵效果好、持效期長(zhǎng)、低毒、使用劑量小、不污染環(huán)境、低殘留等優(yōu)點(diǎn)，可達(dá)到延緩害蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性和防治已產(chǎn)生抗藥性的害蟲(chóng)及殺滅害蟲(chóng)卵的目的。

目前，有關(guān)螺蟲(chóng)乙酯的分析方法[2-5]和噻嗪酮的分析方法[6-8]已有相關(guān)報(bào)道，但2 者混配懸浮劑的分析方法還未見(jiàn)報(bào)道?；诖?，本文研究開(kāi)發(fā)反相高效液相色譜法對(duì)39%噻嗪酮·螺蟲(chóng)乙酯懸浮劑(26%+13%)中有效成分噻嗪酮和螺蟲(chóng)乙酯進(jìn)行同柱分析和定量，操作快速、簡(jiǎn)便，精密度和準(zhǔn)確度均能滿(mǎn)足定量分析要求，能為該產(chǎn)品質(zhì)量控制提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑和試劑

螺蟲(chóng)乙酯標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%)、噻嗪酮標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.1%)，沈陽(yáng)化工研究院有限公司；甲醇(色譜純)，默克化學(xué)；水，二次重蒸蒸餾水。流動(dòng)相：甲醇∶水=75∶25(體積比)，經(jīng)0.45 μm 孔徑的濾膜，并在超聲波浴槽中脫氣10 min。

1.2 主要儀器

LC-20A 高效液相色譜儀配二極管陣列檢測(cè)器(日本島津公司)；色譜柱：Φ4.6 mm×150 mm 不銹鋼柱，內(nèi)裝5 μm Kromasil C18為填充料的不銹鋼柱(諾力昂公司)。ML204T 電子天平(梅特勒-托利多公司)；SK3200H 超聲振蕩器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

1.3 色譜操作條件

檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器；流動(dòng)相為甲醇∶水=75∶25(體積比)；流量為1.0 mL/min，柱溫為室溫(溫差變化不大于2 ℃)，檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm，進(jìn)樣體積為20 μL。在此色譜條件下，螺蟲(chóng)乙酯和噻嗪酮的保留時(shí)間分別為約2.7、5.5 min。典型的噻嗪酮(螺蟲(chóng)乙酯)高效液相色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 39%噻嗪酮·螺蟲(chóng)乙酯懸浮劑高效液相色譜圖

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別稱(chēng)取螺蟲(chóng)乙酯標(biāo)樣0.05 g(精確到0.000 1 g)和噻嗪酮標(biāo)樣0.10 g(精確到0.000 1 g)于50 mL 容量瓶中，加入適量甲醇超聲振蕩5 min 使樣品溶解，恢復(fù)至室溫后用甲醇定容，搖勻；再用移液管準(zhǔn)確吸取5 mL 至50 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋定容，搖勻，備用。

1.4.2 試樣溶液配制

稱(chēng)取0.38 g(精確到0.000 1 g)樣品，置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇超聲振蕩5 min 使樣品溶解，恢復(fù)至室溫后用甲醇定容，搖勻；再用移液管準(zhǔn)確吸取5 mL 至50 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋定容，搖勻，用0.45 μm 濾膜過(guò)濾，濾液備用。

1.4.3 試樣的測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值的重復(fù)性，待相鄰2 針的響應(yīng)值變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.5 試樣中有效含量的計(jì)算

將測(cè)得的2 針試樣溶液以及試樣前后2 針標(biāo)樣溶液中的峰面積分別進(jìn)行平均，試樣中噻嗪酮(螺蟲(chóng)乙酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)分別按式(1)計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中噻嗪酮(螺蟲(chóng)乙酯)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中噻嗪酮(螺蟲(chóng)乙酯)峰面積的平均值；m1為噻嗪酮(螺蟲(chóng)乙酯)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中噻嗪酮(螺蟲(chóng)乙酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)和流動(dòng)相選擇

通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器對(duì)螺蟲(chóng)乙酯標(biāo)樣和噻嗪酮標(biāo)樣在200～400 nm 范圍內(nèi)的吸收光譜進(jìn)行掃描，結(jié)果見(jiàn)圖2，確定檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm。調(diào)整甲醇、水的比例，將噻嗪酮和螺蟲(chóng)乙酯進(jìn)行有效分離，同時(shí)有效避免助劑和雜質(zhì)干擾，最后確定為甲醇∶水=75:25(體積比)作為流動(dòng)相。在此分析條件下對(duì)39%噻嗪酮·螺蟲(chóng)乙酯懸浮劑試樣中螺蟲(chóng)乙酯、噻嗪酮峰純度掃描，螺蟲(chóng)乙酯、噻嗪酮的峰純度均＞99%，由峰純度掃描結(jié)果顯示39%噻嗪酮·螺蟲(chóng)乙酯懸浮劑中螺蟲(chóng)乙酯、噻嗪酮有效成分出峰位置無(wú)明顯物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。

圖2 39%噻嗪酮·螺蟲(chóng)乙酯懸浮劑中螺蟲(chóng)乙酯和噻嗪酮HPLC-DAD 特異性?huà)呙鑸D

2.2 分析方法的線(xiàn)性相關(guān)性

準(zhǔn)確配制一系列不同質(zhì)量濃度的螺蟲(chóng)乙酯和噻嗪酮標(biāo)樣溶液，然后分別按1.4 節(jié)測(cè)定步驟進(jìn)行分析檢測(cè)，分別以螺蟲(chóng)乙酯和噻嗪酮的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行做圖和線(xiàn)性擬合，結(jié)果見(jiàn)圖3、4。螺蟲(chóng)乙酯線(xiàn)性回歸方程為y=50.333 9x+0.083 4，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 0；噻嗪酮線(xiàn)性回歸方程y=11.931 7x-0.008 6，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6。

圖3 螺蟲(chóng)乙酯質(zhì)量濃度與響應(yīng)值之間的線(xiàn)性曲線(xiàn)

圖4 噻嗪酮質(zhì)量濃度與響應(yīng)值之間的線(xiàn)性曲線(xiàn)

2.3 分析方法的精密度試驗(yàn)

任取一批39%噻嗪酮·螺蟲(chóng)乙酯懸浮劑，按本方法中1.4 節(jié)測(cè)定步驟連續(xù)測(cè)定螺蟲(chóng)乙酯、噻嗪酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)6 次，分別計(jì)算其平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)(表1)。螺蟲(chóng)乙酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.06、變異系數(shù)為0.46%；噻嗪酮的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.10、變異系數(shù)為0.38%，標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于Horwitz 公式修正值。

表1 分析方法的精密度測(cè)定

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

制備39%噻嗪酮·螺蟲(chóng)乙酯懸浮劑空白制劑樣品，準(zhǔn)確稱(chēng)取5 份，并分別加入定量的螺蟲(chóng)乙酯、噻嗪酮標(biāo)樣，按1.4 節(jié)測(cè)定步驟測(cè)定螺蟲(chóng)乙酯、噻嗪酮標(biāo)樣的加入量，同加入的理論值進(jìn)行比較，計(jì)算回收率(表2)。螺蟲(chóng)乙酯回收率為98.48%～101.22%，平均回收率為99.91%；噻嗪酮回收率為99.36%～101.35%，平均回收率為100.34%。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度測(cè)定

續(xù)表2

3 結(jié)論

本文采用高效液相色譜儀建立了復(fù)配懸浮劑中噻嗪酮和螺蟲(chóng)乙酯的定量分析方法，此方法能快速準(zhǔn)確測(cè)定39%噻嗪酮·螺蟲(chóng)乙酯懸浮劑噻嗪酮和螺蟲(chóng)乙酯的含量。方法簡(jiǎn)便快捷、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，符合農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析要求，可以適用于39%噻嗪酮·螺蟲(chóng)乙酯懸浮劑產(chǎn)品的質(zhì)量分析控制。