于藝冰, 肖 霞, 熊 霞, 張 琳, 王 晶, 陳 晨, 張晨陽, 湯秀英, 李峰敏

秦皇島市第一醫(yī)院 1.血液內(nèi)科;2.心內(nèi)科,河北 秦皇島 066000;3.天津一中心醫(yī)院 血液內(nèi)科,天津 300190;4.解放軍陸軍醫(yī)療中心 血液內(nèi)科,重慶 400020

急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是一種造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病,主要表現(xiàn)為骨髓中異常的原始細(xì)胞與幼稚細(xì)胞大量增殖,抑制正常的造血,容易發(fā)生出血、貧血、感染等征象,也能浸潤脾、肝、淋巴結(jié)等器官[1-2]。異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSC)是ALL的重要治療手段,可使患者得到長期的無病生存,但術(shù)后仍有部分患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)、進(jìn)展,導(dǎo)致預(yù)后不良[3-7]。因此,研究ALL的發(fā)病機(jī)制,發(fā)現(xiàn)潛在的生物標(biāo)志物是當(dāng)前研究的焦點(diǎn)[8-12]。乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)是一個(gè)重要的腫瘤易感基因及抑癌基因,其最初發(fā)現(xiàn)與遺傳性乳腺癌有關(guān)而得名,后來發(fā)現(xiàn)其在DNA的損傷修復(fù)、細(xì)胞生長及凋亡的調(diào)控、蛋白泛素化等多個(gè)方面均發(fā)揮重要作用,BRCA1的表達(dá)與多種惡性腫瘤的預(yù)后有關(guān),參與了其疾病的發(fā)生發(fā)展,屬于新型的腫瘤預(yù)后標(biāo)志物之一[13-17],但在ALL患者移植預(yù)后的相關(guān)性報(bào)道較少。本研究以秦皇島市第一醫(yī)院和天津一中心醫(yī)院收治的擬行allo-HSC術(shù)的92例成人ALL患者為研究對(duì)象,旨在分析骨髓BRCA1表達(dá)水平與移植預(yù)后的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2017年1月至2020年12月于秦皇島市第一醫(yī)院和天津一中心醫(yī)院行allo-HSC術(shù)的92例ALL患者為研究對(duì)象,并設(shè)為A組,其中,男性50例,女性42例;平均年齡(33.86±6.36)歲;HLA配型結(jié)果:全合43例,非全合49例;供體來源:親緣相關(guān)移植50例,非親緣相關(guān)移植42例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)根據(jù)血常規(guī)、基因檢查、骨髓形態(tài)學(xué)、染色體、細(xì)胞免疫分型等確診為ALL;(2)年齡≥18周歲。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)移植后植入失敗或未達(dá)到植活標(biāo)準(zhǔn);(2)術(shù)后初次骨髓檢查未達(dá)到完全緩解。另隨機(jī)選取92例同期行骨穿檢查的非血液系統(tǒng)腫瘤疾病患者為B組,其中,男性49例,女性43例;平均年齡(35.26±8.08)歲。兩組患者的性別、年齡等一般資料比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 骨髓BRCA1表達(dá)水平的檢測(cè) 采用Primer Premier軟件設(shè)計(jì)BRCA1的PCR引物,然后交由上海生工生物公司合成。通過采用淋巴細(xì)胞分離液分離全部患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞,條件為2 000 r/min、20 min,生理鹽水洗滌3次后通過TRIzol法提取細(xì)胞中的總RNA,采用DU800紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA的濃度與純度。采用Thermo Scientific公司的試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈,以GAPDH為內(nèi)參進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR),根據(jù)2-△△Ct法計(jì)算并比較兩組骨髓單個(gè)核細(xì)胞中BRCA1的相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.2 資料收集與隨訪 收集全部患者的性別、年齡、ALL類型、危險(xiǎn)度分層、有無髓系表達(dá)、巨細(xì)胞病毒感染、從診斷到移植的時(shí)間、HLA配型結(jié)果、移植前疾病狀態(tài)、是否親緣相關(guān)移植、移植方式,以及移植后有無出現(xiàn)急性移植物抗宿主病(acute graft-versushost disease,aGVHD)、慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versushost disease,cGVHD)、死亡等并發(fā)癥。全部患者在allo-HSC術(shù)后均進(jìn)行定期隨訪,截止時(shí)間為2023年3月31日,以患者死亡為主要隨訪終點(diǎn),復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移為次要隨訪終點(diǎn),計(jì)算全部患者的總生存時(shí)間(overall survival,OS)和無進(jìn)展生存期(progress free survival,PFS)。

2 結(jié)果

2.1 A組與B組骨髓BRCA1的相對(duì)表達(dá)水平比較 A組移植術(shù)前的骨髓BRCA1的相對(duì)表達(dá)范圍是0.10～6.39,平均值為(0.59±0.16),顯著低于B組的(1.00±0.25),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=17.931,P<0.05)。

2.2 ALL患者術(shù)前骨髓BRCA1相對(duì)表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)性分析 ALL患者年齡≤40歲、T淋巴細(xì)胞ALL、危險(xiǎn)度分層為高危、有髓外浸潤史、移植前未完全緩解患者的骨髓BRCA1相對(duì)表達(dá)水平分別低于年齡>40歲、B淋巴細(xì)胞ALL、危險(xiǎn)度分層為低危、無髓外浸潤史、移植前完全緩解患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 ALL術(shù)前骨髓BRCA1相對(duì)表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)性分析

2.3 ALL患者allo-HSC術(shù)的近遠(yuǎn)期預(yù)后分析 全部92例患者均順利完成allo-HSC術(shù),術(shù)后共出現(xiàn)30例(32.6%)aGVHD,包括Ⅰ度11例、Ⅱ度8例、Ⅲ度7例、Ⅳ度4例;其中,6例(6.5%)患者出現(xiàn)多個(gè)器官的aGVHD,有3例(3.3%)患者在移植1個(gè)月內(nèi)因嚴(yán)重aGVHD死亡。隨訪過程中也發(fā)現(xiàn)有11例(12.0%)患者出現(xiàn)cGVHD,截至2023年3月31日,移植后3年內(nèi)有30例(32.6%)復(fù)發(fā),25例(27.2%)死亡。移植后3年內(nèi)復(fù)發(fā)、死亡患者的術(shù)前骨髓BRCA1相對(duì)表達(dá)水平分別低于未復(fù)發(fā)、未死亡者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而術(shù)前骨髓BRCA1相對(duì)表達(dá)水平與aGVHD及分度、多器官aGVHD、cGVHD等不良反應(yīng)無明顯相關(guān)性(P>0.05)。見表2。

表2 ALL患者術(shù)前骨髓BRCA1相對(duì)表達(dá)水平與allo-HSC術(shù)近遠(yuǎn)期預(yù)后的相關(guān)性分析

2.4 ALL患者allo-HSC術(shù)遠(yuǎn)期預(yù)后的影響因素分析 多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析結(jié)果表明,非親緣相關(guān)移植、移植前未完全緩解、術(shù)前骨髓BRCA1相對(duì)表達(dá)水平是患者allo-HSC術(shù)遠(yuǎn)期預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05)。見表3。

表3 全部患者allo-HSC術(shù)遠(yuǎn)期預(yù)后的多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析結(jié)果

3 討論

ALL是一類高度異質(zhì)性的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,起病較急,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,骨髓中白血病細(xì)胞大量增殖后抑制了正常的造血功能,同時(shí)浸潤正常的組織器官,嚴(yán)重危害人類的健康,既往該病的診斷和預(yù)后評(píng)估主要基于形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)。近年來,隨著分子學(xué)檢測(cè)技術(shù)的迅速發(fā)展,白血病的分子學(xué)檢測(cè)逐漸成為該疾病診斷、分型及危險(xiǎn)度評(píng)估的基礎(chǔ)方法,也出現(xiàn)越來越多有價(jià)值的生物學(xué)標(biāo)志物。allo-HSC術(shù)是當(dāng)前ALL的主要治療方案,明顯改善了患者的生存狀況,但也有可能出現(xiàn)GVHD排異反應(yīng),嚴(yán)重者可涉及多個(gè)器官,甚至導(dǎo)致死亡,同時(shí),移植效果與供體的質(zhì)量有關(guān),部分患者移植后出現(xiàn)ALL復(fù)發(fā),導(dǎo)致預(yù)后不良,因此,成人ALL患者的移植預(yù)后一直是臨床關(guān)注的焦點(diǎn)[18-20]。

BRCA1是遺傳性乳腺癌相關(guān)的抑癌基因,能與癌基因和抑癌基因蛋白、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子、細(xì)胞周期調(diào)控蛋白、DNA損傷修復(fù)基因等多個(gè)蛋白相互作用,從而調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞生長及凋亡等,通常是在細(xì)胞分裂活躍時(shí)表達(dá)升高,如正常骨髓的原始細(xì)胞的BRCA1表達(dá)水平會(huì)高于外周血的淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等成熟細(xì)胞,有助于維持造血早期細(xì)胞維持基因組的穩(wěn)定性。除了乳腺癌以外,目前已有多個(gè)惡性腫瘤的BRCA1表達(dá)與預(yù)后有關(guān)[16,21-22],陽性表達(dá)或高表達(dá)通常預(yù)示著預(yù)后欠佳。蔣麗琳等[16]研究報(bào)道,晚期胃癌患者的BACR1表達(dá)與化療療效及預(yù)后有關(guān),BRCA1蛋白陰性表達(dá)患者的化療緩解率、1年累積存活率均明顯高于陽性表達(dá)者。而在白血病方面,國內(nèi)毛春霞等[23]較系統(tǒng)地進(jìn)行了白血病患者BRCA1基因的表達(dá),結(jié)果表明,無論是急性髓系白血病還是ALL,初治患者的BRCA1 mRNA表達(dá)水平明顯低于健康志愿者,且復(fù)發(fā)患者的表達(dá)更低,而治療后得到完全緩解患者的表達(dá)水平升高至健康志愿者水平,提示BRCA1可能參與白血病的發(fā)生及病情變化。本研究結(jié)果顯示,A組移植術(shù)前的骨髓BRCA1的相對(duì)表達(dá)水平顯著低于B組(P<0.05)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),A組患者移植前的骨髓BRCA1相對(duì)表達(dá)水平與年齡、ALL類型、危險(xiǎn)度分層、髓外浸潤史、移植前有無完全緩解有關(guān),年齡越大、病情越輕、T淋巴細(xì)胞ALL、移植前完全緩解的表達(dá)水平越高,即BRCA1在成人ALL上也可能發(fā)揮一定的抑癌基因作用。本研究重點(diǎn)關(guān)注了BRCA1與移植預(yù)后的相關(guān)性,結(jié)果表明,移植后3年內(nèi)復(fù)發(fā)、死亡患者的術(shù)前骨髓BRCA1相對(duì)表達(dá)水平明顯低于未復(fù)發(fā)、未死亡者(P<0.05),而BRCA1表達(dá)與排異反應(yīng)的發(fā)生無明顯相關(guān)性。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析也證實(shí),術(shù)前骨髓BRCA1相對(duì)表達(dá)水平是患者allo-HSC術(shù)遠(yuǎn)期預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05),其表達(dá)越高提示預(yù)后可能越差,表明BRCA1表達(dá)不僅與ALL患者的臨床病理特征有關(guān),還能作為患者移植效果的預(yù)測(cè)指標(biāo),與移植后復(fù)發(fā)、死亡均具有相關(guān)性,是潛在的生物學(xué)標(biāo)志物,可能與其能與細(xì)胞周期調(diào)控、DNA修復(fù)等相關(guān)蛋白進(jìn)行相互作用有關(guān)。

綜上所述,成人ALL患者的allo-HSC術(shù)前骨髓BRCA1呈低表達(dá)狀態(tài),與其臨床病理特征有關(guān),也是移植遠(yuǎn)期預(yù)后的獨(dú)立影響因素。