張 臨 岑 陳 符式錦 李曉敏 吳小龍 黃玉潔

(海南省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心,?？?570206)

砷是一種強(qiáng)毒性化學(xué)物質(zhì),海洋環(huán)境是砷循環(huán)的重要場(chǎng)所,海洋生物含有更高濃度的砷(<10～100 μg/g干重)[1],是海洋環(huán)境中的“砷庫(kù)”[2],而海洋生物是人類食物中砷的重要來(lái)源,砷可通過(guò)海洋生物生長(zhǎng)過(guò)程中逐步被海洋生物體吸收、蓄積等。因此,生物樣品中砷的含量檢測(cè)成為研究的重要內(nèi)容之一[3-4]。消解前處理是海洋生物體檢測(cè)最重要的一步,消解效果的優(yōu)劣直接影響海洋生物體分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。常用的前處理方法主要有電熱板消解、全自動(dòng)消解和微波消解等[5-7]?，F(xiàn)行的分析標(biāo)準(zhǔn)為海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范中電熱板-原子熒光光譜法測(cè)定生物體中砷[8],在對(duì)海洋生物體消解前處理的過(guò)程中存在消解溫度低、前處理時(shí)間長(zhǎng)、消解不完全、重復(fù)性差、正確度差等諸多弊端,比較適用于海洋植物體的分析測(cè)定,海洋動(dòng)物體中的砷大部分呈有機(jī)態(tài)[9],而有機(jī)態(tài)砷多以砷糖的形式存在[10-11],需要更高的溫度才能完全消解釋放。此次對(duì)電熱板-原子熒光光譜法測(cè)定生物體中砷的方法進(jìn)行了優(yōu)化和改進(jìn),通過(guò)對(duì)消解儀器、消解溫度、消解時(shí)間、消解管材質(zhì)、消解液體系條件的優(yōu)化,得出了一個(gè)正確度高、重現(xiàn)性好、快速檢測(cè)各類型海洋生物體砷的石墨消解-原子熒光光譜法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

BAF-2000原子熒光光度計(jì)(北京寶德儀器有限公司),石墨高溫消解儀(萊伯泰科分析儀器公司),MS204TS/02電子天平(METTLER TOLEDO),石英消解管(50 mL)、聚四氟乙烯消解管(50 mL)、比色管(25 mL)、容量瓶(100 mL)、燒杯等器皿在使用前經(jīng)過(guò)20%的硝酸浸泡。

測(cè)砷儀器條件:負(fù)高壓240 V,主、輔電流均為40 mA,爐溫200 ℃,爐高8 mm,載氣流量400 mL/min,屏蔽器流量800 mL/min。

硝酸(晶瑞電子材料股份有限公司)、高氯酸(廣州化學(xué)試劑廠)、硫酸(廣州化學(xué)試劑廠)、鹽酸(廣州化學(xué)試劑廠)、硼氫化鈉(西隴科學(xué))、氫氧化鈉(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)、過(guò)氧化氫(廣州市金華大化學(xué)試劑有限公司)、硫脲(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、抗壞血酸(阿拉丁試劑公司)。

扇貝成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW10024(GSB-15)(中國(guó)地質(zhì)科學(xué)院地球物理地球化學(xué)勘察研究所)、黃魚粉中元素成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW10253(北京北方偉業(yè)計(jì)量技術(shù)研究院)、芹菜成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW10048(GSB-26,中國(guó)地質(zhì)科學(xué)院地球物理地球化學(xué)勘察研究所)。砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液103018(生態(tài)環(huán)境部環(huán)境發(fā)展中心環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)樣品研究所)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

準(zhǔn)確稱取0.1～0.2 g(精確至0.000 1 g)海洋生物體干樣、0.5～2.0 g(精確至0.000 1 g)海洋生物體濕樣于消解管中,依次加入9 mL硝酸和3 mL高氯酸,混勻,使樣品與消解液充分接觸。若有劇烈化學(xué)反應(yīng),待反應(yīng)結(jié)束后再將樣品置于石墨高溫消解儀中消解,升溫至120 ℃消解1 h,繼續(xù)升溫至170 ℃消解至溶液剩余1～2 mL,取下冷卻至室溫,加入2～5 mL硫酸,繼續(xù)升溫至280 ℃消解至溶液剩余1～2 mL,取下冷卻至室溫,將消解液轉(zhuǎn)移至25 mL比色管中,用純水沖洗消解管內(nèi)壁2～3次,將所有洗滌液并入比色管中,加入2 mL 10%的硫脲-抗壞血酸,用純水定容至刻度,搖勻后靜置30 min后測(cè)定?？瞻自嚇拥闹苽涑瞬患訕悠?其余步驟與樣品處理步驟相同。

2 結(jié)果與討論

2.1 消解儀器優(yōu)化

對(duì)電熱板消解、微波消解、超級(jí)微波消解、全自動(dòng)消解、石墨高溫消解5種不同前處理消解方式進(jìn)行比對(duì)實(shí)驗(yàn),采用的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)包含了植物體和動(dòng)物體,分別是芹菜、扇貝和黃魚粉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知(圖1),5種前處理方式消解后的芹菜測(cè)定結(jié)果回收率為93.1%～98.9%,說(shuō)明這5種消解方式都適用于海洋植物體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的消解,而扇貝和黃魚粉兩個(gè)動(dòng)物體的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)只有經(jīng)過(guò)超級(jí)微波消解和石墨高溫消解后測(cè)定結(jié)果才是準(zhǔn)確的,回收率為89.2%～101%。其他3種消解前處理方式測(cè)定結(jié)果均偏低,回收率僅為13.5%～20.3%?？紤]到超級(jí)微波消解儀器價(jià)格較高,普及推廣度低,綜合考慮選擇儀器成本低,普及推廣度高的石墨高溫消解儀。

圖1 不同前處理消解方式下標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)砷含量回收率

2.2 消解溫度、時(shí)間和消解管材質(zhì)優(yōu)化

采用3種消解條件(表1)分別對(duì)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、海洋生物體實(shí)際樣品,海洋生物體實(shí)際樣品加標(biāo)進(jìn)行消解前處理,有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為芹菜、扇貝和黃魚粉,海洋生物體實(shí)際樣品為海草、魚類、貝類。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(圖2),3種消解條件對(duì)生物體實(shí)際樣品的消解效果是一樣的,測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差異。對(duì)于有證標(biāo)樣的測(cè)定結(jié)果來(lái)看是消解條件2、3的效果最好,消解條件1的黃魚粉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定值偏低,考慮是聚四氟乙烯材質(zhì)消解管導(dǎo)熱性的問(wèn)題,聚四氟乙烯消解管與消解液之間存在大約10 ℃的溫度差,導(dǎo)致消解液消解溫度不夠,樣品消解不完全,測(cè)定值偏低。在條件1的基礎(chǔ)上進(jìn)行了溫度優(yōu)化,將消解溫度提高10 ℃以確保消解液達(dá)到相應(yīng)的消解溫度,由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知(圖2),溫度優(yōu)化后的條件2各類型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果是準(zhǔn)確的,消解效果好,同時(shí)在實(shí)際分析過(guò)程中發(fā)現(xiàn)聚四氟乙烯消解管在290 ℃高溫下受熱會(huì)膨脹變形,影響實(shí)驗(yàn)操作。在條件2基礎(chǔ)上對(duì)消解管材質(zhì)進(jìn)行了優(yōu)化,選用導(dǎo)熱性好的石英材質(zhì)消解管,由于石英導(dǎo)熱性好,消解管與消解液之間溫度差小,故采用120、170、280 ℃的階梯消解溫度,據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知(圖2),石英材質(zhì)消解管在120 ℃消解1 h,170 ℃消解至消解液剩余1～2 mL,280 ℃消解至消解液剩余1～2 mL的消解條件前處理效果最佳,適用于各類海洋生物體樣品的測(cè)定。

表1 消解條件優(yōu)化

圖2 不同的消解條件下各類型樣品消解效果

2.3 消解液體系優(yōu)化

生物樣品中含有大量的無(wú)機(jī)物和有機(jī)質(zhì),需要一些強(qiáng)酸進(jìn)行消解[12],單純的硝酸不能使生物中有機(jī)砷完全消解,只能與其他酸組成混合消解液,以增強(qiáng)消解液的氧化性[13]。選用硝酸-過(guò)氧化氫-硫酸和硝酸-高氯酸-硫酸兩種消解液體系。兩種消解液體系對(duì)海洋生物體樣品中砷含量測(cè)定的結(jié)果表明(圖3),硝酸-過(guò)氧化氫-硫酸消解液體系對(duì)各類型海洋生物體樣品消解效果較差,測(cè)定結(jié)果偏低,回收率為59.0%～71.8%。 而使用硝酸-高氯酸-硫酸消解液體系消解效果好,各類型海洋生物體樣品測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確,回收率為97.4%～100%。由此可見,硝酸-高氯酸-硫酸消解液體系的消解效果優(yōu)于前者。通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn),改進(jìn)后的硝酸-高氯酸-硫酸消解液體系具有超強(qiáng)氧化能力,能夠充分氧化被蛋白質(zhì)和脂肪結(jié)合的有機(jī)砷,使得海洋生物體中砷完全消解,適用于各類型的海洋生物體的消解,同時(shí)還具備了無(wú)需放置過(guò)夜、無(wú)需補(bǔ)加硝酸、操作簡(jiǎn)便和可控、前處理時(shí)間短、結(jié)果準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。

圖3 不同消解液體系消解各類型樣品消解效果

2.4 硼氫化鈉濃度和酸度優(yōu)化

原子熒光光譜法測(cè)定砷時(shí),硼氫化鈉溶液濃度過(guò)低無(wú)法形成穩(wěn)定的氫火焰進(jìn)行測(cè)定,硼氫化鈉溶液濃度過(guò)高時(shí)形成強(qiáng)烈的氫火焰和稀釋AsH3氣體而干擾測(cè)定[14-16]。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,測(cè)定砷最佳鹽酸酸度為5%,硼氫化鈉溶液最佳濃度為1%,在此條件下,樣品與還原劑反應(yīng)充分,熒光強(qiáng)度值高且穩(wěn)定(見圖4、5)。

圖4 鹽酸濃度與熒光強(qiáng)度的關(guān)系

圖5 硼氫化鈉濃度與熒光強(qiáng)度的關(guān)系

2.5 方法檢出限

根據(jù)文獻(xiàn)[17-18]中對(duì)測(cè)定檢出限的要求進(jìn)行檢出限的測(cè)定。配制7份濃度均為0.05 μg/L的待測(cè)樣品,采用與樣品相同的前處理步驟處理樣品并上機(jī)測(cè)定。經(jīng)儀器分析可知,方法的檢出限為0.005 mg/kg,測(cè)定下限為0.02 mg/kg。

2.6 方法的正確度

選取3種不同類型的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)芹菜GSB-26、扇貝GSB-15、黃魚粉GBW10253進(jìn)行6次平行測(cè)定,由實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表2)可知測(cè)定平均值均在正確值范圍內(nèi),相對(duì)誤差為-1.0%、1.1%和-1.0%。其次,分別對(duì)3種不同類型的海洋生物體實(shí)際樣品:海草、魚類、貝類,通過(guò)加入一定量的扇貝成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知(表3),實(shí)際樣品的加標(biāo)回收率在93.4%～95.8%,實(shí)驗(yàn)的正確度滿足相關(guān)質(zhì)控要求。

表2 不同類型標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定正確度

表3 不同類型海洋生物體實(shí)際樣品測(cè)定正確度

2.7 方法的精密度

選取3份不同種類的海洋生物體實(shí)際樣品進(jìn)行6次測(cè)定,由實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表4)可知,各類型海洋生物體實(shí)際樣品測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.3%～4.8%,實(shí)驗(yàn)的精密度滿足相關(guān)質(zhì)控要求。

表4 不同類型海洋生物體實(shí)際樣品測(cè)定精密度

2.8 方法比對(duì)實(shí)驗(yàn)

為了保證方法的適用性和準(zhǔn)確性,對(duì)石墨消解-原子熒光光譜法與微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法(GB 5009.11—2014)[19-20]進(jìn)行方法比對(duì),進(jìn)一步采用F檢驗(yàn)法和t檢驗(yàn)法檢驗(yàn)兩種儀器測(cè)定結(jié)果的顯著性差異,由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知(表5),各類型樣品F值為0.05～0.32。經(jīng)查單邊F值表,當(dāng)置信度為97.5%時(shí),F0.025(4,4)=9.60,F

表5 本法與GB 5009.11—2014方法檢測(cè)結(jié)果比對(duì)

3 結(jié)論

本法改進(jìn)了消解儀器、消解溫度、時(shí)間、消解管材質(zhì)、消解液體系、硼氫化鈉濃度和酸度,與電熱板消解相比,各類型海洋生物體樣品測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。石墨高溫消解儀為包裹性受熱,而且能高溫消解,解決了電熱板消解單面受熱不均、消解溫度低導(dǎo)致生物體消解不完全的問(wèn)題。經(jīng)過(guò)優(yōu)化的硝酸-高氯酸-硫酸消解液體系,在消解過(guò)程中不再補(bǔ)加硝酸,同時(shí)調(diào)整了消解酸的比例和酸的加入順序,解決了現(xiàn)行分析方法中電熱板消解時(shí)硝酸與高氯酸比例小的問(wèn)題。各類型海洋生物體樣品加入混合消解液后就能放置到石墨高溫消解儀中進(jìn)行消解,樣品不用靜置過(guò)夜,大大地縮短檢測(cè)時(shí)間。該法具有消解效率高、消解完全、消解過(guò)程可控、操作簡(jiǎn)單、快速、結(jié)果正確度高等優(yōu)點(diǎn),適用于各類海洋生物體砷的測(cè)定。