曹燕妮，游金坤，鄧雅元，代秋瓊，孫達鋒，**

（1.云南省食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展研究院，云南 昆明 650221；2.中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650221；3.云南云菌科技（集團）有限公司，云南 昆明 650221）

食用菌種類繁多，富含蛋白質(zhì)、膳食纖維、維生素、礦物質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)[1]，具有很高的營養(yǎng)價值。其高蛋白、低脂肪、低熱量的特性，使其成為理想的功能性食品[2]。此外，食用菌含有多糖、多酚、萜類、黃酮類、生物堿、多肽、活性蛋白、腺苷等多種具有生理功能的活性成分[3-7]，具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、降血脂、抗炎、降血糖等藥理活性[8]。

研究發(fā)現(xiàn)，食用菌多糖通過激活免疫細胞，對免疫系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化和突出的降血糖活性，可用于降血壓、降血脂和糖尿病的預防[9-10]。食用菌中的萜類物質(zhì)多為二萜和三萜，少數(shù)為倍半萜[8]，萜類物質(zhì)可通過減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生來發(fā)揮抗炎作用，具有抗氧化、抗腫瘤、抑菌、降血糖、降血脂、神經(jīng)保護等功效[11]。多數(shù)食用菌中都含有腺苷，可改善血液微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫功能、提高血液供氧能力、抑制血小板凝集、降低膽固醇等[7]。鑒于多糖、三萜和腺苷3 種活性物質(zhì)對人體具有顯著的藥用功效，試驗選取11 種市售野生食用菌，測定其3 種活性物質(zhì)的含量，探討不同種類食用菌之間3 種活性物質(zhì)的差異，對于深入研究食用菌功效成分和產(chǎn)品開發(fā)具有重要意義。

1 材料與試劑

1.1 試驗材料

11 種野生食用菌子實體：香肉齒菌（Sarcodon aspratus）、松口蘑（Tricholoma matsutake）、變綠紅菇（Russula virescens）、玫黃黃肉牛肝菌（Butyriboletus roseoflavus）、多汁乳菇（Lactifluus volemus）、白牛肝菌（Boletus bainiugan）、皺蓋牛肝菌（Rugiboletus extremiorientalis）、真根蟻巢傘（Termitomyces eurhizus）、蘭茂牛肝菌（Lanmaoa asiatica）、干巴糙孢革菌（Thelephora ganbajun）、 梭柄松苞菇（Catathelasma ventricosum），均購于昆明市場。子實體經(jīng)干燥、粉碎、過篩后備用。

主要試劑：葡萄糖標準溶液（100 μg·mL-1），北京北方偉業(yè)計量技術(shù)研究院；齊墩果酸（純度98.1%），上海麥克林生化科技股份有限公司；腺苷（純度99.7%），中國食品藥品檢定研究院；甲醇（色譜純），上海安譜實驗科技股份有限公司；硫酸、無水乙醇、甲醇、高氯酸、冰醋酸、5%苯酚、5%香草醛-冰醋酸等試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

紫外可見分光光度計，德國耶拿分析儀器股份有限公司；U3000 高效液相色譜儀，賽默飛世爾科技（中國） 有限公司；T-214 型電子天平，美國丹佛儀器公司；電熱恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司；超聲波清洗機，寧波新芝生物科技股份有限公司。

2 試驗方法

2.1 粗多糖含量的測定

2.1.1 標準曲線制備

準確吸取葡萄糖標準溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于10 mL 具塞試管中，用蒸餾水補液至1.0 mL，葡萄糖質(zhì)量依次為即0、20、40、60、80、100 μg?？焖傧蛟嚇又屑尤?%苯酚溶液1.0 mL和硫酸5.0 mL，靜置10 min 后渦旋混勻。試管放在30 ℃水浴中反應(yīng)20 min 后，在490 nm 處測定吸光度。以葡萄糖質(zhì)量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。

2.1.2 供試樣品制備

稱取樣品0.5 g 置于50 mL 離心管內(nèi)，加入5 mL水浸濕樣品，然后緩慢加入20 mL 無水乙醇，渦旋1 min 后超聲提取30 min。提取結(jié)束后4 000 r·min-1離心10 min 棄上清液，不溶物用10 mL 80%乙醇洗滌，4 000 r·min-1離心10 min，棄上清。用蒸餾水將不溶物轉(zhuǎn)入250 mL 圓底燒瓶后，加入50 mL 蒸餾水，在100 ℃水浴中冷凝回流提取2 h。冷卻后過濾，將濾液轉(zhuǎn)至100 mL 容量瓶中并定容。同時做空白試驗。取提取樣品溶液0.2 mL 于10 mL 具塞試管中，按照標準曲線制備方法同法操作，測定吸光度。

2.1.3 粗多糖含量計算

樣品中粗多糖含量（X1，g·100-1·g-1） 的計算公式為：

式中：m1為標準曲線計算得到的樣品測定液中含糖量（μg）；V1為樣品的定容體積（mL）； m2為樣品質(zhì)量（g）；V2為比色時移取樣品測定液的體積（mL）；0.9 為葡萄糖換成葡聚糖的校正系數(shù)。

2.2 總?cè)坪康臏y定

2.2.1 標準曲線制備

準確稱取于105 ℃干燥至恒重的齊墩果酸標品10 mg（以實際稱樣量折算），用甲醇（分析純） 溶解并定容至100 mL，得到質(zhì)量濃度為100 μg·mL-1的齊墩果酸標準液。取上述溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于10 mL 具塞試管中，即齊墩果酸質(zhì)量依次為0、20、40、60、80、100 μg。在90 ℃烘箱中揮干。待試管冷卻至室溫后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL 和高氯酸0.8 mL，渦旋混勻后，在70 ℃水浴中保溫顯色15 min。取出后立即置于冰水浴中冷卻5 min，再加入5.0 mL 冰醋酸，渦旋混勻后在546 nm 處測定吸光度。以齊墩果酸質(zhì)量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。

2.2.2 供試樣品制備

稱取樣品0.1 g 置于50 mL 具塞離心管內(nèi)。加入10 mL 無水乙醇，渦旋混勻后超聲提取60 min，提取結(jié)束后7 000 r·min-1離心10 min。同時做空白試驗。移取樣品0.4 mL 上清液于10 mL 具塞試管中，按照標準曲線制備方法同法操作，測定吸光度。

2.2.3 樣品中總?cè)坪坑嬎?/p>

樣品中總?cè)坪浚╔2，%） 計算公式為：

式中：m1為標準曲線計算得到的樣品測定液中總?cè)频暮浚é蘥）；V1為提取時加入無水乙醇的體積（mL）；m2為樣品質(zhì)量（g）；V2為比色時移取樣品測定液的體積（mL）。

2.3 腺苷含量的測定

2.3.1 標準曲線制備

準確稱取準確稱取腺苷標品10 mg（以實際稱樣量折算），用流動相溶解并定容至100 mL，得到質(zhì)量濃度為100 μg·mL 的腺苷標準溶液。移取標準溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL 置于10 mL 容量瓶中，用水定容搖勻，得到標準系列濃度為1.00、2.00、5.00、10.0、20.0、50.0 μg·mL。以腺苷質(zhì)量濃度為橫坐標，相應(yīng)峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

2.3.2 供試樣品制備

準確稱取0.5 g 樣品于100 mL 容量瓶中，加水約80 mL，混勻后超聲提取3 h，冷卻至室溫后定容搖勻。取適量樣液離心后，上清液過0.45 μm 水相濾膜作為待測液。

2.3.3 色譜條件

選用AcclaimTM120 C18 色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為乙腈5%-水95%；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為35 ℃；檢測波長為260 nm；進樣量為10 μL。

2.3.4 樣品中腺苷含量計算

樣品中腺苷含量（X3，mg·kg-1） 計算公式為：

式中：m1為標準曲線計算得到的樣品測定液中腺苷的含量（μg·mL-1）；V1為樣品的定容體積（mL）；m2為樣品質(zhì)量（g）。

3 結(jié)果與分析

3.1 線性關(guān)系

3 種活性物質(zhì)的線性關(guān)系見表1。

表1 線性關(guān)系Tab.1 Linear relationship

如表1 所示，3 種活性物質(zhì)的相關(guān)系數(shù)均大于0.999，在相應(yīng)的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.2 三種活性物質(zhì)測定結(jié)果

11 種食用菌中3 種活性物質(zhì)的測定結(jié)果見表2。

表2 三種活性物質(zhì)含量Tab.2 The content of three active substances

由表2 可知，11 種野生食用菌中粗多糖含量為1.44～5.27 g·100-1·g-1，平均含量為3.04 g·100-1·g-1，變異系數(shù)為34%?？?cè)坪繛?.75%～1.60%，平均含量1.09%，變異系數(shù)為26%。腺苷含量為657～334 9 mg·kg-1，平均含量為1 629 mg·kg-1，變異系數(shù)為46%。11 種食用菌粗多糖含量統(tǒng)計結(jié)果見圖1。

圖1 粗多糖含量Fig.1 The content of crude polysaccharide

如圖1 所示，白牛肝菌、松口蘑、真根蟻巢傘、皺蓋牛肝菌、梭柄松苞菇的粗多糖含量高于平均值。11 種野生食用菌中，白牛肝菌粗多糖含量最高，多汁乳菇含量最低，二者相差3.7 倍。總?cè)坪拷y(tǒng)計結(jié)果見圖2。

圖2 總?cè)坪縁ig.2 The content of total triterpenoids

如圖2 所示，香肉齒菌、皺蓋牛肝菌、梭柄松苞菇、松口蘑、干巴糙孢革菌的總?cè)坪扛哂谄骄怠?1 中野生食用菌中，香肉齒菌總?cè)坪孔罡?，真根蟻巢傘含量最低，二者相?.1 倍。腺苷含量統(tǒng)計結(jié)果見圖3。

圖3 腺苷含量Fig.3 The content of adenosine

如圖3 所示，白牛肝菌、皺蓋牛肝菌、蘭茂牛肝菌、真根蟻巢傘、玫黃黃肉牛肝菌的總?cè)坪扛哂谄骄怠?1 種野生食用菌中，白牛肝菌腺苷含量最高，干巴糙孢革菌含量最低，二者相差5.1 倍。

4 討論與結(jié)論

食用菌豐富的營養(yǎng)成分和活性物質(zhì)，使其具有很高的營養(yǎng)價值和藥用價值。近年來，食用菌多糖抗腫瘤[12]、降血糖[13]、抗炎[14]的機制研究和萜類物質(zhì)生物活性研究[15-17]等頗受關(guān)注，部分以食用菌為原材料的藥品和保健品已上市[18-19]。通過國家藥品監(jiān)督管理局官網(wǎng)查詢，目前獲得國家批準并已上市的多糖藥品中，以食用菌為原材料的主要有香菇（Lentinula edodes） 多糖、紫芝（Ganoderma sinense） 多糖、豬苓（Polyporus umbellatus） 多糖、茯苓（Wolfiporia cocos） 多糖、“靈孢多糖”[20]，常用劑型為膠囊、片劑、注射液、口服液等。以食用菌為原材料獲批的保健食品中，在功效成分和標志性成分方面，以多糖、三萜、腺苷居多[19]。

本試驗中對11 種市售野生食用菌子實體中粗多糖、總?cè)?、腺? 種活性物質(zhì)含量進行測定，發(fā)現(xiàn)白牛肝菌的粗多糖、腺苷含量均為最高，但總?cè)坪康陀谄骄?；香肉齒菌總?cè)坪孔罡撸侄嗵?、腺苷含量均低于平均值；皺蓋牛肝菌的粗多糖、總?cè)?、腺苷的含量均高于平均值，且總?cè)坪拖佘蘸績H次于含量最高的香肉齒菌和白牛肝菌；變綠紅菇和多汁乳菇的3 種活性物質(zhì)含量均低于平均值；3 種活性物質(zhì)的變異系數(shù)由高到低為腺苷、粗多糖、總?cè)疲f明食用菌種類對腺苷的影響最大，其次是粗多糖，對總?cè)坪康挠绊懽钚?。通過對11 種市售野生食用菌之間3 種活性物質(zhì)含量的差異比較，為食用菌活性物質(zhì)的進一步研究、產(chǎn)品開發(fā)和綜合利用提供參考。