◎ 毛小慶,方 猛,孫 涓
(馬鞍山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所,安徽 馬鞍山 243000)
甜蜜素又稱環(huán)己基氨基磺酸鈉,其甜度是蔗糖的30 ~40 倍[1],因價格低廉、穩(wěn)定性較好,常作為甜味劑用于食品生產(chǎn)中?!妒称钒踩珖覙藴?食品添加劑使用標準》(GB 2760—2014)[2]中規(guī)定了冷凍飲品等19 類食品中甜蜜素的最大使用量。目前,對甜蜜素檢驗的色譜方法有氣相色譜法[3-6]、液相色譜法[7-8]、液質(zhì)聯(lián)用法[9-10]。其中,氣相色譜法樣品衍生化時需冰浴30 min,且目標峰較難分開;液質(zhì)聯(lián)用法只適用于各種酒類的檢測,適用范圍較窄,檢測成本較高。因此,本文用次氯酸鈉衍生化甜蜜素,經(jīng)正庚烷萃取后,采用高效液相色譜法測定,方法干擾小、定量準確。
冷飲樣品:綠色心情,70 g/支,購于本地市場;甜蜜素標準品,純度為99%,Dr. Ehrenstorfer 公司。
1200 高效液相色譜儀,美國安捷倫公司;WH-3 渦旋振蕩器,上海滬西分析儀器廠有限公司;CQ-300B-S 超聲波清洗機,上海躍進醫(yī)用光學器械廠;AL204 電子天平,賽多利斯科學儀器(北京)有限公司;Direct-Pure 型超純水機,上海樂楓生物科技有限公司;HC-3018R 離心機,安徽中科中佳科學儀器有限公司。
硫酸溶液(1 ∶1,V∶V):量取50 mL 硫酸,邊倒邊攪拌,倒入50 mL 水中,冷卻備用。碳酸氫鈉溶液(50 g·L-1):稱取碳酸氫鈉50 g,加入少量水溶解,稀釋至1 000 mL。硫酸鋅溶液(300 g·L-1):稱取硫酸鋅30 g 溶于水中,稀釋至100 mL。亞鐵氰化鉀溶液(150 g·L-1):稱取亞鐵氰化鉀15 g,加入少量水溶解,稀釋至100 mL。
1.4.1 標準工作溶液的配制
準確稱取0.280 6 g 甜蜜素標準品溶于水中并定容至50 mL,得到濃度為5.00 mg·mL-1的甜蜜度標準儲備液。準確移取標準儲備液10.0 mL至50 mL容量瓶中,用水稀釋并定容,得到濃度為1.00 mg·mL-1的甜蜜素標準中間液。將標準中間液用水稀釋為10.0 μg·mL-1、20.0 μg·mL-1、50.0 μg·mL-1、100 μg·mL-1、200 μg·mL-1的標準工作濃度。
1.4.2 樣品提取
稱取冷飲5 g 至50 mL 離心管中,加入約30 mL水,混勻,分別加入2 mL 硫酸鋅溶液、亞鐵氰化鉀溶液作為沉淀劑,混勻并超聲30 min,離心3 min(3 000 r·min-1),將上清液轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶中,重復(fù)上述操作,合并上清液,定容。
1.4.3 衍生化
移取上述試樣溶液10.0 mL 至50 mL 離心管中,分別加入硫酸溶液2.0 mL、正庚烷5.0 mL、次氯酸鈉溶液1.0 mL,劇烈振蕩2 min,靜置分層。除去下面水層后,加入碳酸氫鈉溶液25 mL,振蕩約1 min,以調(diào)節(jié)溶液pH 值。靜置分層,取上層有機相過膜,待上機。標準工作溶液的衍生化同試樣溶液。
1.4.4 色譜條件
色譜柱:Agilent ZORBAX SB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:乙腈-水=70 ∶30;進樣量:10 μL;流速:1.0 mL·min-1;柱溫:30 ℃;檢測器是DAD;檢測波長:314 nm。
2.1.1 檢測波長的優(yōu)化
取衍生后的甜蜜素標準溶液,濃度為100 μg·mL-1,使用紫外分光光度計在200~350 nm處進行掃描測定。結(jié)果顯示,在314 nm 處吸收峰值較優(yōu)且無干擾峰,因此確定檢測波長為314 nm。
2.1.2 流動相比例的優(yōu)化
考察不同流動相比例(乙腈-水=90 ∶10、乙腈- 水=80 ∶20、乙 腈- 水=70 ∶30、乙 腈- 水=60 ∶40)對檢測結(jié)果的影響。結(jié)果顯示,流動相為乙腈-水=70 ∶30 時基線較穩(wěn)定且雜質(zhì)干擾小,標準品衍生物的保留時間為7.952 min,峰形良好,色譜圖見圖1。
圖1 甜蜜素標準品色譜圖(濃度:50 μg·mL-1)
對甜蜜素標準工作溶液進行測定,以濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,如圖2 所示。甜蜜素的線性回歸方程為y=2.289 9x-1.449 4,R2=0.999 9。
圖2 甜蜜素標準曲線圖
對衍生后的冷飲樣品進行測定,得出冷飲中甜蜜素的含量為0.109 g·kg-1。分別向冷飲樣品中添加0.05 g·kg-1、0.15 g·kg-1、0.20 g·kg-1的甜蜜素標準品,測定回收率和RSD,結(jié)果見表1。甜蜜度的加標回收率為96.33%~99.83%,RSD 為0.73%~0.96%,方法的回收率和RSD 均滿足實驗要求。
表1 回收率和精密度實驗結(jié)果表(n=6)
在本地市場上購買冷飲樣品,采用本方法進行測定,色譜圖見圖3。冷飲中甜蜜素的含量為0.108 g·kg-1,滿足GB 2760—2014 的限量要求。
圖3 冷飲中甜蜜素的色譜圖
本文建立了冷飲中甜蜜素的高效液相色譜檢測方法,對色譜條件進行了優(yōu)化。該方法在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,準確度和精密度均滿足檢測要求,具有前處理操作簡單、抗干擾能力強等優(yōu)點,可用于測定冷飲中的甜蜜素含量。