晚期非小細(xì)胞肺癌患者淋巴細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子與免疫治療療效的關(guān)系探討

劉 俊，王 旭，呂 坤

（1.深圳市沃英達(dá)生命科學(xué)有限公司，廣東 深圳 511816 ；2.深圳博興生物科技有限公司，廣東 深圳 511816；3.深圳市龍崗中心醫(yī)院心胸外科，廣東 深圳 511816）

肺癌是指肺部腺體、支氣管黏膜上發(fā)生的惡性腫瘤。在所有惡性腫瘤中，肺癌的發(fā)病率高居首位，其中又以非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）為主，占比高達(dá)80%[1]。早期NSCLC 患者多無明顯癥狀，晚期NSCLC 患者可表現(xiàn)為胸痛、喘鳴、咳嗽、咯血等。臨床針對(duì)NSCLC 常采用手術(shù)治療、放化療等。近年來隨著醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展進(jìn)步，免疫療法在惡性腫瘤治療中的應(yīng)用越來越廣泛，給晚期NSCLC 患者帶來了更多的希望[2]。在實(shí)際治療中，明確晚期NSCLC 的療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物與免疫治療療效之間的關(guān)系十分重要，有利于優(yōu)化免疫治療方案，提升療效。在免疫微環(huán)境中，細(xì)胞因子與淋巴細(xì)胞亞群屬于重要成員。為了明確NSCLC 患者淋巴細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子與免疫治療療效的關(guān)系，本研究特選取90例接受免疫治療的晚期NSCLC 患者，采取分組對(duì)照的形式進(jìn)行研究，現(xiàn)將研究方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 基線資料

研究開始于2021 年1 月，于2022 年12 月結(jié)束，研究對(duì)象為這一期間我院收治的90 例接受免疫治療的晚期NSCLC 患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理檢查確診為NSCLC[3]；（2）預(yù)計(jì)生存期超過3 個(gè)月；（3）腫瘤TNM 分期為Ⅳ期；（4）有可測(cè)量的病灶；（5）完成4 個(gè)周期以上的免疫治療；（6）病歷資料較為齊全；（7）對(duì)本次研究的各項(xiàng)基本內(nèi)容知情，且簽字同意參與。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有免疫治療禁忌證者；（2）近期有免疫增強(qiáng)類藥物或抑制類藥物使用史者；（3）合并其他惡性腫瘤者；（4）免疫缺陷嚴(yán)重者；（5）合并嚴(yán)重自身免疫性疾病者；（6）合并嚴(yán)重血液疾病者。每次完成2 個(gè)周期的治療后，采用增強(qiáng)CT 檢查患者的胸部、頸部、全腹部及盆腔[4]，并采用MRI 檢查其頭顱，評(píng)估治療效果，分為完全緩解、部分緩解、病情穩(wěn)定、疾病進(jìn)展，按照療效進(jìn)行組別，無效組為疾病進(jìn)展者，共20 例，控制組為完全緩解者、部分緩解者及病情穩(wěn)定者，共70 例。無效組：男性13 例，女性7 例；年齡在42 ～75 歲之間，平均年齡為（60.27±10.37）歲；其中14 例有吸煙史，6 例無吸煙史；病理類型：15 例為腺癌，5 例為鱗狀細(xì)胞癌（鱗癌）；免疫治療：6 例為一線治療，14 例為非一線治療；聯(lián)合化療：19例聯(lián)合化療，1 例未聯(lián)合化療?？刂平M：男性60 例，女性10 例；年齡在43 ～77 歲之間，平均年齡為（60.48±10.29）歲；其中45 例有吸煙史，25 例無吸煙史；病理類型：48 例為腺癌，22 例為鱗癌；免疫治療：43 例為一線治療，27 例為非一線治療；聯(lián)合化療：69 例聯(lián)合化療，1 例未聯(lián)合化療。兩組基線資料相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可比性良好。本次研究向倫理委員會(huì)報(bào)備相關(guān)資料，并經(jīng)過審核與批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 所有患者均接受免疫治療，選用卡瑞利珠單抗（生產(chǎn)廠家：蘇州盛迪亞生物醫(yī)藥有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字S20190027；規(guī)格：200 mg 注射劑）、信迪利單抗﹝生產(chǎn)廠家：信達(dá)生物制藥（蘇州）有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字S20180016；規(guī)格：10 mL:100 mg 注射劑﹞、帕博利珠單抗﹝生產(chǎn)廠家：愛爾蘭MSD Ireland (Carlow)；批準(zhǔn)文號(hào)：進(jìn)口藥品注冊(cè)證號(hào)S20180019；規(guī)格：4 mL:100 mg 注射劑﹞作為免疫治療藥物。將200 mg 卡瑞利珠單抗與100 mL濃度為0.9% 的氯化鈉注射液混勻，每21 d 靜脈注射1 次；將200 mg 信迪利單抗與100 mL 濃度為0.9%的氯化鈉注射液混勻，每21 d 靜脈注射1 次；將2 mg/kg帕博利珠單抗與100 mL 濃度為0.9% 的氯化鈉注射液

混勻，每21 d 靜脈注射1 次。持續(xù)用藥至患者無法耐受或疾病進(jìn)展。

1.2.2 檢測(cè)方法 檢測(cè)所有患者的細(xì)胞因子水平與淋巴細(xì)胞亞群水平，檢測(cè)時(shí)間為每個(gè)治療周期開始前的1 ～2 d 與完成1 個(gè)周期治療后的20 d，細(xì)胞因子包含白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）[5]；淋巴細(xì)胞亞群包括CD19+B細(xì)胞、CD3+T 細(xì)胞、CD3+CD4+T 細(xì)胞、CD3+CD8+T 細(xì)胞、CD3-CD16+/56+細(xì)胞、CD4+/CD8+T 細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、總T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD8+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)、B 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、自然殺傷細(xì)胞（NK）計(jì)數(shù)[6]。檢測(cè)方法為流式細(xì)胞術(shù)，采用安捷倫生物杭州有限公司生產(chǎn)的安捷倫試劑盒檢測(cè)細(xì)胞因子水平，采用艾森生物有限公司提供的流式細(xì)胞技術(shù)配件檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群水平。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比兩組治療前后的淋巴細(xì)胞亞群水平、細(xì)胞因子水平及與免疫治療療效（NSCLC 進(jìn)展）的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件為SPSS 22.0，計(jì)數(shù)資料以% 表示，用χ2 檢驗(yàn)。對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布者以±s表示，用t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布者以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示，用t檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比兩組治療前后的淋巴細(xì)胞亞群水平

控制組治療前的B 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)高于無效組（P＜0.05），兩組治療前的其他淋巴細(xì)胞亞群水平無明顯差異（P＞0.05）。控制組治療前后的B 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD19+B 細(xì)胞水平、CD3+T 細(xì)胞水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；控制組治療前后的其他淋巴細(xì)胞亞群水平無明顯差異（P＞0.05）。無效組治療前后的淋巴細(xì)胞亞群水平無明顯差異（P＞0.05）?？刂平M治療后的CD3+CD4+T 細(xì)胞水平、總T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于無效組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表1。

表1 對(duì)比兩組治療前后的淋巴細(xì)胞亞群水平

2.2 淋巴細(xì)胞亞群、細(xì)胞因子與免疫治療療效（NSCLC 進(jìn)展）的相關(guān)性

IL-4、IL-6 與NSCLC 進(jìn) 展 呈 正 相 關(guān) 性（P＜0.05），CD3+CD4+T 細(xì)胞水平、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、總T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)與NSCLC 進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)性（P＜0.05）。詳見表2。

表2 淋巴細(xì)胞亞群、細(xì)胞因子與免疫治療療效（NSCLC進(jìn)展）的相關(guān)性

3 討論

免疫療法也被稱為腫瘤的“綠色療法”，可動(dòng)員免疫系統(tǒng)攻擊腫瘤細(xì)胞。免疫檢查點(diǎn)抑制劑可有效消除或減輕免疫系統(tǒng)的抑制，促使免疫細(xì)胞識(shí)別、殺傷腫瘤細(xì)胞，以發(fā)揮治療腫瘤的作用[7]。近年來隨著免疫療法的不斷發(fā)展，其在惡性腫瘤的治療中越發(fā)受到重視，程序性細(xì)胞死亡蛋白-1（PD-1）及其配體（PD-L1）抑制劑已經(jīng)獲得批準(zhǔn)上市，使NSCLC的治療方法獲得了新的突破，免疫微環(huán)境也逐漸成為腫瘤治療的研究熱點(diǎn)。在NSCLC 的治療中發(fā)揮免疫作用的免疫細(xì)胞主要有CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞、CD19+B 細(xì)胞等。從本次研究結(jié)果可以看出，經(jīng)免疫治療，在免疫T 細(xì)胞增長(zhǎng)方面，控制組優(yōu)于無效組，這可能與免疫治療后免疫微環(huán)境有一定的關(guān)系[8-9]。CD4+T 細(xì)胞受細(xì)胞因子與抗原的影響不斷分化成Th1亞型與Th2 亞型，Th1 亞型會(huì)釋放IL-2、TNF-α、IFN-γ 等細(xì)胞因子，提升巨噬細(xì)胞、NK、細(xì)胞毒性T 細(xì)胞的殺傷腫瘤效應(yīng)，加速腫瘤細(xì)胞的凋亡；Th2亞型會(huì)釋放IL-4、IL-6、IL-10 等細(xì)胞因子，其作用與Th1 正相反。在抑制腫瘤免疫監(jiān)視與促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的過程中，細(xì)胞因子發(fā)揮了重要作用[10]。本研究結(jié)果顯示，相較于治療前，控制組治療后的CD19+B細(xì)胞水平降低、CD3+T 細(xì)胞水平升高（P＜0.05），無效組治療前后的淋巴細(xì)胞亞群水平無明顯差異（P＞0.05）；控制組治療后的CD3+CD4+T 細(xì)胞水平、總T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于無效組（P＜0.05）。提示T 細(xì)胞能正向調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，激活免疫細(xì)胞，提升抗腫瘤作用。本研究中，IL-4、IL-6 的表達(dá)水平與腫瘤進(jìn)展呈正相關(guān)，這多與其對(duì)腫瘤的負(fù)調(diào)控有關(guān)。IL-4、IL-6 的表達(dá)水平越低，則患者能夠獲得越長(zhǎng)的無進(jìn)展生存時(shí)間，兩者之間的負(fù)相關(guān)性是免疫治療療效的印證。

綜上所述，淋巴細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子的表達(dá)水平與NSCLC 患者免疫治療的療效之間存在密切的聯(lián)系，二者可作為臨床預(yù)測(cè)NSCLC 患者免疫治療療效的重要指標(biāo)，值得推廣應(yīng)用。