季寶成,楊瀾瑞,程迎新,侯鑄琛,呂 佳,許 旭,白艷紅

(1.鄭州輕工業(yè)大學(xué)食品與生物工程學(xué)院,河南 鄭州 450001;2.河南省冷鏈?zhǔn)称钒踩|(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河南 鄭州 450001;3.冷鏈?zhǔn)称芳庸づc安全控制教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(鄭州輕工業(yè)大學(xué)),河南 鄭州 450001 )

烏雞肉中富含蛋白質(zhì)、B族維生素等多種營養(yǎng)成分,且膽固醇和脂肪含量低,常被用于滋補(bǔ)養(yǎng)身,備受消費(fèi)者青睞。在現(xiàn)代畜牧業(yè)中,獸藥已被廣泛用于預(yù)防和治療疾病[1]。但隨著市場需求的不斷提升,獸藥濫用現(xiàn)象逐漸增多,長期服用獸藥殘留超標(biāo)的食品會(huì)對人體造成毒性作用、過敏反應(yīng)等潛在的健康風(fēng)險(xiǎn)[2]。為保證食品安全以及人體健康,我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部、國家衛(wèi)生健康委員會(huì)及國家市場監(jiān)督管理總局于 2019 年9月聯(lián)合發(fā)布《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留量》[3]。烏雞肉中基質(zhì)復(fù)雜且潛在的獸藥種類繁多,因此,建立高效、簡便的獸藥多殘留檢測方法可以為食品安全提供技術(shù)保障及支持。

目前,常用的獸藥多殘留檢測方法有熒光傳感器法[4-7]、酶聯(lián)免疫法[8]、質(zhì)譜法[9-11]等。其中,質(zhì)譜法具有高通量和高靈敏的優(yōu)勢,廣泛用于動(dòng)物源性食品獸藥殘留檢測。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)兼具液相色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高通量、高靈敏特征,逐漸發(fā)展成為動(dòng)物源性食品獸藥多殘留的主要確證方法。根據(jù)檢測需求,應(yīng)用于獸藥分析的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)主要包括液相色譜-高分辨質(zhì)譜法[12-13]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)法[14-17]。其中,LC-MS/MS法可用于靶向藥物定性和定量分析,具有靈敏度高和選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)。盡管如此,利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析獸藥多殘留仍需對樣品進(jìn)行適當(dāng)凈化,以進(jìn)一步降低樣品基質(zhì)對低殘留濃度獸藥的檢測干擾。

烏雞肉基質(zhì)復(fù)雜,樣品前處理可在一定程度上削弱基質(zhì)效應(yīng),提升檢測準(zhǔn)確度和靈敏度。常用的樣品前處理方法包括液-液萃取[18]、分散液-液微萃取[19]、固相萃取[20-21]和QuEChERS(quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe)方法等。其中,QuEChERS具有快速、簡單和高效的特點(diǎn),廣泛用于食品、生物醫(yī)藥以及環(huán)境等領(lǐng)域[22-24]。發(fā)展QuEChERS技術(shù)的關(guān)鍵在于新型高效基質(zhì)凈化材料的開發(fā)與應(yīng)用,常規(guī)QuEChERS法多采用C18、PSA、GCB等微納米材料作為基質(zhì)吸附劑,其基質(zhì)分離過程多依賴于高速離心,耗時(shí)相對較長,是主要的限速步驟。近年來,磁性納米基質(zhì)凈化材料被開發(fā)并成功用于各種動(dòng)物源性食品基質(zhì)的凈化過程[25-27],通過磁場輔助可在一定程度上提升基質(zhì)分離過程的便捷性。然而,尺寸均一性、顆粒分散性等均是磁性納米凈化材料開發(fā)過程中的關(guān)鍵前提和注意事項(xiàng)[28-29]。

三聚氰胺海綿(MeS)具有高度交聯(lián)的彈性三維多孔網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),性質(zhì)穩(wěn)定、吸附性好,通過簡單的物理擠壓即可去除溶液中的干擾基質(zhì),實(shí)現(xiàn)快速的基質(zhì)分離過程。前期研究中,本課題組通過硅烷化反應(yīng)制備了改性三聚氰胺海綿基質(zhì)凈化材料,與超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)技術(shù)結(jié)合,成功用于雞蛋中獸藥多殘留的快速分析,基質(zhì)凈化效果良好、操作簡單[30]。

本研究擬采用還原氧化石墨烯改性(r-GO)三聚氰胺海綿(r-GO@MeS)作為基質(zhì)凈化材料,建立一種改良QuEChERS方法,結(jié)合UPLC-MS/MS技術(shù)快速檢測烏雞肉中獸藥殘留,以期為動(dòng)物源性食品獸藥多殘留檢測提供技術(shù)支撐。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與裝置

Agilent 1290 Infinity Ⅱ超高效液相色譜儀:美國Agilent公司產(chǎn)品,配有二元泵、在線真空脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器和柱溫箱;Qtrap 5500質(zhì)譜儀:美國Sciex公司產(chǎn)品,配有電噴霧離子源(ESI)和 MultiQuantTM3.0數(shù)據(jù)處理系統(tǒng);Vortex-Genie2多功能旋渦混合器:美國Scientific Industries公司產(chǎn)品;3K15高速冷凍離心機(jī):德國Sigma公司產(chǎn)品;0.22 μm有機(jī)微孔過濾膜針式過濾器:天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品;ME204分析天平:瑞士MettlerToledo公司產(chǎn)品。

1.2 材料與試劑

磺胺類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類標(biāo)準(zhǔn)品,乙酸銨(AA)、甲酸(FA)、乙酸(HAc)、N-丙基乙二胺(PSA)、十八烷基鍵合硅膠(C18)、石墨化炭黑(GCB):上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司產(chǎn)品;乙腈(ACN)和甲醇(MeOH):色譜級,美國Thermo Fisher Scientific公司產(chǎn)品;乙二胺四乙酸二鈉(Na2EDTA)、L(+)-抗壞血酸(LAA):分析純,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;單層氧化石墨烯(GO):蘇州碳峰石墨科技有限公司產(chǎn)品;氯化鈉(NaCl)、無水硫酸鈉(Na2SO4)、無水硫酸鎂(MgSO4):分析純,天津市永大化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;無水乙醇(EtOH):分析純,天津市富宇精細(xì)化工有限公司產(chǎn)品;超純水:由美國Millipore公司生產(chǎn)的超純水機(jī)制備。

1.3 r-GO@MeS的合成

根據(jù)水熱還原法制備還原氧化石墨烯改性三聚氰胺海綿[31]。稱量0.05 g GO,加入100 mL蒸餾水,超聲15 min,制備0.5 g/L GO分散液;然后稱量50 mg LAA,倒入GO分散液,再次超聲15 min;將裁剪好的圓柱形三聚氰胺海綿(直徑8 mm,厚度3 mm,約0.15 cm3)浸入上述溶液中,充分?jǐn)D壓使分散液進(jìn)入海綿,繼續(xù)超聲處理15 min后轉(zhuǎn)移至密封玻璃瓶,放入烘箱,95 ℃水熱反應(yīng)3 h;反應(yīng)完成后,將獲得的海綿單體分別用蒸餾水和乙醇洗滌;最后將洗滌過的單體放入烘箱中,40 ℃干燥24 h,得到r-GO@MeS。

1.4 樣品制備

將烏雞切割、去骨、絞碎,保鮮袋密封,-20 ℃儲存?zhèn)溆?。精確稱取2.5 g烏雞肉樣品于50 mL離心管,分別加入2.5 mL 0.1 mmol/L Na2EDTA水溶液、10 mL 0.5%HAc-ACN,渦旋5 min;向離心管中分別加入2.0 g Na2SO4、0.5 g NaCl,再次渦旋5 min,在4 ℃以8 000 r/min離心5 min;取1 mL上清液于2.0 mL離心管中,備用。將上清液吸取到裝有5個(gè)r-GO@MeS的 2.5 mL注射筒中,動(dòng)態(tài)吸打10次,然后經(jīng)0.22 μm一次性針式過濾器過濾,上機(jī)待測。

1.5 實(shí)驗(yàn)條件

1.5.1色譜條件 Agilent Eclipse Plus C18RRHD色譜柱(100 mm×2.1 mm×1.8 μm);流動(dòng)相:A相為含有0.1%甲酸和5 mmol/L乙酸銨的甲醇-水溶液(2∶98,V/V),B相為甲醇;梯度洗脫程序:0～2 min(0%B),2～10 min(0%～45%B),10～15 min(45%～98%B),15～17 min(98%B),17～17.1 min(98%～0%B),17.1～20.1 min(0%B);流速0.3 mL/min;進(jìn)樣體積2 μL;柱溫35 ℃。

1.5.2質(zhì)譜條件 ESI源,正離子模式,多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式。ESI源參數(shù):霧化氣流速3.0 L/min,干燥氣流速10 L/min,加熱氣流速10 L/min,去溶劑氣溫度250 ℃,接口溫度300 ℃,加熱氣溫度400 ℃。使用MultiQuantTM3.0軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 改良QuEChERS法的優(yōu)化

2.1.1提取條件優(yōu)化 采用以下4種提取條件對比和考察脫水劑種類和Na2EDTA添加量對獸藥回收率的影響:1) 提取劑(2.5 mL H2O和10 mL 1% HAc-ACN)/脫水劑(2.0 g無水Na2SO4和0.5 g NaCl);2) 提取劑(2.5 mL H2O和10 mL 1% HAc-ACN)/脫水劑(2.0 g無水MgSO4和0.5 g NaCl);3) 提取劑(2.5 mL 0.1 mmol/L Na2EDTA水溶液和10 mL 1% HAc-ACN)/脫水劑(2.0 g無水Na2SO4和0.5 g NaCl);4) 提取劑(2.5 mL 0.1 mmol/L Na2EDTA水溶液和10 mL 1% HAc-ACN)/脫水劑(2.0 g無水MgSO4和0.5 g NaCl)。

對以上4種條件下的獸藥回收率進(jìn)行比較分析,結(jié)果示于圖1?？梢?使用無水MgSO4作為脫水劑的(2)和(4)組中,恩諾沙星(ENR)、氧氟沙星(OFL)、奧比沙星(ORB)等7種喹諾酮類藥物的回收率低于60%,這可能是由于喹諾酮類獸藥與鎂離子發(fā)生螯合,導(dǎo)致提取液中獸藥回收率偏低;而(1)組和(3)組提取條件下的回收率分別為78.6%～117.2%和89.1%～119.8%。其中,在提取條件(1)下,柱晶白霉素(KIT)的回收率低于80%(78.6%);在提取條件(3)下,其回收率升至89.1%,這可能與添加Na2EDTA的金屬離子螯合作用相關(guān)。因此,選擇2.5 mL 0.1 mmol/L Na2EDTA水溶液和10 mL 1%HAc-ACN作為提取劑,2.0 g無水Na2SO4和0.5 g NaCl作為脫水劑對待測樣品進(jìn)行提取。

圖1 Na2EDTA和脫水劑對烏雞肉中獸藥回收率的影響Fig.1 Effect of Na2EDTA addition and dehydrating agents on the recoveries of veterinary drugs in black chicken

此外,由于所考察的獸藥中存在兩性化合物,提取劑的酸堿性可能會(huì)對回收率產(chǎn)生影響?；诖?考察了不同含量HAc-ACN(乙酸占比分別為0%、0.5%、1%、3%、5%)對獸藥回收率的影響,結(jié)果示于圖2?？梢?乙腈作為提取劑時(shí),OFL、麻保沙星(MAR)、氟羅沙星(FLE)、西諾沙星(CIN)的回收率較低,分別為56.1%、47.3%、38.0%、53.4%。隨著HAc含量增加,OFL、MAR、 FLE和CIN的回收率均增加至85%以上。除此之外,培氟沙星(PEF)的回收率隨HAc含量增加呈上升趨勢,而其他藥物的回收率沒有明顯提高。通過計(jì)算得到,當(dāng)乙酸占比分別為0.5%、1%、3%、5%時(shí),所監(jiān)測藥物的總體平均回收率分別為96.7%、95.6%、95.2%、96.2%。當(dāng)提取劑中乙酸占比為0.5%時(shí),獸藥回收率相對較高;當(dāng)提取劑中乙酸含量較高(3%、5%)時(shí),烏雞肉樣品出現(xiàn)部分結(jié)塊現(xiàn)象。綜上,采用2.5 mL 0.1 mmol/L Na2EDTA水溶液和10 mL 0.5%HAc-ACN作為提取溶劑。

圖2 HAc添加對烏雞肉中獸藥回收率的影響Fig.2 Effect of HAc addition on the recoveries of veterinary drugs in black chicken

2.1.2r-GO@MeS用量優(yōu)化 樣品經(jīng)提取后,其溶液中含有脂肪、蛋白質(zhì)、色素等干擾基質(zhì),凈化劑的選擇及其用量對基質(zhì)凈化效果有著重要影響。本實(shí)驗(yàn)分別使用3、4、5、6、7個(gè)海綿對1 mL烏雞肉提取液進(jìn)行基質(zhì)凈化(即海綿體積與提取液體積比分別為0.45、0.60、0.75、0.90、1.05 cm3/mL),并考察r-GO@MeS不同用量對獸藥回收率的影響(動(dòng)態(tài)吸打5次),結(jié)果示于圖3?？梢?r-GO@MeS不同用量水平下,藥物的回收率分別為73.9%～107.3%、74.7%～118.8%、80.6%～105.9%、76.1%～106.3%、72.9%～113.0%。通過對比回收率分布,當(dāng)選用0.75 cm3/mL r-GO@MeS凈化時(shí),獸藥回收率較集中,且35種藥物回收率均處于80%～110%之間;當(dāng)r-GO@MeS用量為0.45、0.60、0.90、1.05 cm3/mL時(shí),分別有1種(KIT:73.9%)、1種(KIT:74.7%)、2種(PEF:79.3%、KIT:76.1%)、1種(KIT:72.9%)獸藥的回收率低于80%。此外,當(dāng)改性海綿用量較少(0.45、0.60 cm3/mL)時(shí),部分化合物的回收率逐漸降至73.9%或者增至118.8%,表現(xiàn)為基質(zhì)干擾效應(yīng)加強(qiáng),這可能與基質(zhì)吸附不充分有關(guān);當(dāng)改性海綿用量較高(0.90、1.05 cm3/mL)時(shí),所檢測獸藥的回收率整體呈降低趨勢,這可能與過剩改性海綿與檢測藥物間的吸附作用有關(guān)?；诖?本研究通過陰性對照樣品基質(zhì)提取液加標(biāo)實(shí)驗(yàn),在0.75 cm3/mL料液比水平下考察改性海綿對藥物的吸附效應(yīng)。結(jié)果表明,磺胺類藥物的回收率為95.3%～101.7%,喹諾酮和大環(huán)內(nèi)酯類藥物的回收率均處于80.2%～92.7%,說明r-GO@MeS對磺胺類藥物基本無吸附,而對喹諾酮和大環(huán)內(nèi)酯類藥物具有一定程度的弱吸附作用。綜上,藥物的回收率不僅與樣品基質(zhì)的凈化效果有關(guān),還與凈化材料之間的吸附作用有關(guān)。因此,選用0.75 cm3/mL r-GO@MeS進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

圖3 r-GO@MeS用量對烏雞肉中獸藥回收率的影響Fig.3 Effect of r-GO@MeS dosage on the recoveries of veterinary drugs in black chicken

2.1.3凈化模式優(yōu)化 r-GO@MeS的凈化模式可分為動(dòng)態(tài)與靜態(tài)2種。動(dòng)態(tài)凈化是通過反復(fù)抽推注射器栓塞實(shí)現(xiàn)提取液在海綿中不斷吸附與分離,從而達(dá)到凈化效果;靜態(tài)凈化是用注射器吸取提取液到r-GO@MeS中,通過調(diào)整靜置時(shí)間達(dá)到凈化效果。本研究通過控制吸打次數(shù)與靜置時(shí)間設(shè)置以下6組凈化條件:1) 動(dòng)態(tài)吸打1次;2) 動(dòng)態(tài)吸打5次;3) 動(dòng)態(tài)吸打10次;4) 靜置1 min;5) 靜置5 min;6) 靜置10 min,結(jié)果示于圖4。對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,獸藥回收率分別為72.9%～119.0%、74.3%～114.8%、76.1%～109.4%、64.9%～112.8%、68.6%～114.9%、61.9%～113.2%。在動(dòng)態(tài)模式下,隨著吸打次數(shù)的增加,獸藥回收率更接近100%;且在動(dòng)態(tài)吸打10次凈化時(shí),35種獸藥的加標(biāo)回收率均處于70%～110%之間,而動(dòng)態(tài)吸打1次和5次時(shí),分別有4種和5種獸藥的回收率大于110%。靜態(tài)模式下,當(dāng)靜置時(shí)間從1 min增加到10 min時(shí),回收率處于90%以下的獸藥數(shù)量增加,分別有31、29、24種獸藥的回收率處于90%～110%之間,其中分別有1種(KIT:63.9%)、3種(PEF:68.7%、CIN:88.9%、KIT:77.8%)和5種(ENR:84.9%、OFL:84.2%、PEF:62.0%、CIN:87.1%、KIT:79.4%)獸藥的回收率小于90%,這可能是由于靜置時(shí)間較長,部分待測殘留藥物不同程度地被r-GO@MeS吸附。通過對比,以動(dòng)態(tài)吸打10次作為凈化條件時(shí),35種獸藥的回收率全部處于70%～110%之間,而靜置1 min時(shí),有31種獸藥的回收率在70%～110%之間,表明動(dòng)態(tài)吸打10次的基質(zhì)凈化效果更好,模式更優(yōu)。因此,最優(yōu)凈化條件為0.75 cm3/mL r-GO@MeS、動(dòng)態(tài)吸打10次。

2.1.4與商品吸附材料對比 本實(shí)驗(yàn)分別使用C18、PSA、GCB和r-GO@MeS對待測樣品進(jìn)行凈化處理,其中,C18、PSA、GCB的用量均為25 g/L。通過對比獸藥回收率,比較r-GO@MeS與上述商品基質(zhì)吸附材料的凈化效果,結(jié)果示于圖5。對比發(fā)現(xiàn),經(jīng)GCB凈化后,ENR、萘啶酸(NA)、氟甲喹(FLU)、PEF、噁喹酸(OXA)、CIN的回收率分別為48.0%、41.4%、56.3%、35.5%、36.6%、30.7%,均低于60%,且均為喹諾酮類獸藥,由此推測,GCB對喹諾酮類藥物具有一定的吸附作用。使用PSA、C18、r-GO@MeS處理后,獸藥的回收率分別為69.0%～116.2%、75.5%～114.7%、73.8%～112.9%,除KIT外,其余獸藥的回收率均處于80%～120%之間。從整體上看,使用r-GO@MeS凈化后的獸藥回收率更集中于100%,且有31種獸藥的回收率處于90%～110%之間,而PSA、C18和GCB處理組分別有28、30和28種獸藥的回收率處于90%～110%之間。經(jīng)綜合分析,r-GO@MeS與其他3種商品化吸附材料具有同等甚至更優(yōu)的基質(zhì)凈化效果,在獸藥多殘留檢測領(lǐng)域有著較大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

圖5 不同吸附劑對烏雞肉中獸藥回收率的影響Fig.5 Effect of different purification adsorbents on the recoveries of veterinary drugs in black chicken

2.2 r-GO@MeS材料表征

三聚氰胺海綿基底呈白色,經(jīng)還原氧化石墨烯改性后,其顏色變成深黑色。使用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察發(fā)現(xiàn),改性前后其表面微觀形貌發(fā)生了顯著變化。MeS和r-GO@MeS均由纖維骨架相互連接而成,呈多孔網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。但MeS表面光滑,無附著,示于圖6a、6b;r-GO@MeS的微觀結(jié)構(gòu)中存在還原氧化石墨烯片層,示于圖6c、6d,并通過平鋪堆疊和延伸2種方式大量附著于骨架表面和邊緣。采用乙腈、甲醇等常用有機(jī)溶劑反復(fù)擠壓、浸泡,測試其溶液穩(wěn)定性,結(jié)果表明,r-GO@MeS材料彈性良好,且未發(fā)現(xiàn)有石墨烯片層脫落的現(xiàn)象。

圖6 MeS(a, b)和r-GO@MeS(c, d)的掃描電鏡圖Fig.6 SEM spectra of MeS (a, b) and r-GO@MeS (c, d)

2.3 質(zhì)譜條件優(yōu)化

采用MRM模式對烏雞肉中的獸藥殘留進(jìn)行定性、定量分析。首先,在Full scans模式下將各標(biāo)準(zhǔn)溶液依次注入質(zhì)譜中,獲得相應(yīng)的母離子;然后,母離子經(jīng)碰撞誘導(dǎo)解離(CID)獲得碎片離子,選擇其中強(qiáng)度最高的2個(gè)子離子分別作為定量和定性離子。優(yōu)化后,被測獸藥的MRM詳細(xì)參數(shù)列于表1。

表1 UPLC-MS/MS檢測烏雞肉中35種獸藥殘留的MRM參數(shù)Table 1 MRM parameters of 35 veterinary drug residues in black chicken by UPLC-MS/MS

2.4 方法確認(rèn)

本研究考察了方法的選擇性、基質(zhì)效應(yīng)(matrix effect, ME)、準(zhǔn)確性、精密度、線性關(guān)系、檢出限(LOD)和定量限(LOQ),結(jié)果列于表2。使用優(yōu)化的提取與凈化方法處理陰性對照樣品,經(jīng)UPLC-MS/MS檢測后未發(fā)現(xiàn)存在基質(zhì)干擾峰;而經(jīng)基質(zhì)加標(biāo)后,所檢測的35種獸藥均出現(xiàn)相應(yīng)的色譜峰,表明該方法具有良好的選擇性。使用UPLC-MS/MS檢測樣品時(shí),待測溶液中共存的干擾基質(zhì)在電噴霧離子化過程中可能對目標(biāo)化合物產(chǎn)生離子增強(qiáng)或抑制作用,稱為基質(zhì)效應(yīng)?；|(zhì)效應(yīng)的計(jì)算公式為:

(1)

式中,ka表示基質(zhì)匹配曲線的斜率,kb表示溶劑校正曲線的斜率。當(dāng)ME在±20%以內(nèi)時(shí),基質(zhì)效應(yīng)不顯著;當(dāng)ME超過±20%時(shí),存在明顯的基質(zhì)增強(qiáng)或抑制作用。從表2可知,所有被檢測藥物的基質(zhì)效應(yīng)均處于-19.4%～19.8%之間,表明r-GO@MeS對烏雞肉樣品具有較好的基質(zhì)凈化效果。

為考察定量檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,分別在低、中、高(50、100、150 μg/kg)3個(gè)加標(biāo)水平下進(jìn)行定量分析,所監(jiān)測獸藥的回收率分別為73.0%～114.5%、78.7%～112.6%、66.6%～118.8%,均處于60%～120%之間。相比之下,在高濃度加標(biāo)水平下,磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二甲基異嘧啶、氟羅沙星、西諾沙星、交沙霉素、柱晶白霉素等獸藥的回收率降低,這可能與基質(zhì)凈化材料的弱吸附作用有關(guān)。

通過35種獸藥的日內(nèi)、日間重復(fù)性實(shí)驗(yàn)考察方法的精密度,其分別不超過13.8%和14.6%,表明該方法具有良好的精密度,在烏雞肉獸藥多殘留分析中有著良好的適用性。

在5～200 μg/kg濃度范圍內(nèi),以待測樣品中獸藥濃度為橫坐標(biāo)(x)、峰面積為縱坐標(biāo)(y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,相關(guān)系數(shù)(R2)均大于0.998,表明該方法具有良好的線性關(guān)系。分別用3倍和10倍信噪比(S/N)確定LOD和LOQ,除磺胺胍(SGD)的LOD(6 μg/kg)與LOQ(15 μg/kg)偏高外,其余34種獸藥的LOD范圍為0.1～1.8 μg/kg,LOQ范圍為0.3～5 μg/kg,表明該方法的靈敏度較高,能夠?qū)Φ陀谧畲髿埩粝蘖康墨F藥目標(biāo)物進(jìn)行準(zhǔn)確分析。

2.5 實(shí)際樣品檢測

利用本方法對24個(gè)市售烏雞肉樣本中的35種獸藥進(jìn)行檢測分析,僅在其中1份陽性樣品中檢測出磺胺二甲基嘧啶(SM2),殘留濃度低于定量限。

3 結(jié)論

本研究建立了一種基于r-GO@MeS的改良QuEChERS方法,結(jié)合UPLC-MS/MS測定烏雞肉中35種獸藥殘留,僅需簡單的“吸附-擠壓”動(dòng)態(tài)循環(huán)過程即可實(shí)現(xiàn)對復(fù)雜基質(zhì)的高效快速凈化。方法學(xué)考察結(jié)果表明,該方法的檢出限低、靈敏度高、線性關(guān)系好,具有良好的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。此外,r-GO@MeS凈化材料的制備過程簡單、成本低,具有與C18、PSA、GCB商品化吸附材料同等甚至更優(yōu)的基質(zhì)凈化效果。作為一種新型的基質(zhì)凈化材料,r-GO@MeS在復(fù)雜基質(zhì)凈化領(lǐng)域具有良好的發(fā)展前景和應(yīng)用潛力。