閆慧芳, 高鴻亮, 張 冉, 郭雅雯, 張小賢, 武璐瑤, 李新霞

(1新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科, 烏魯木齊 830011; 2新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化病二科, 烏魯木齊 830054)

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(Diffuse Large B Cell Lymphoma,DLBCL)在成人非霍奇金淋巴瘤中最常見(jiàn),該腫瘤具有中-高度侵襲性,生長(zhǎng)迅速,在臨床表現(xiàn)、組織形態(tài)、免疫表型、遺傳學(xué)特征、療效和預(yù)后等方面具有很大異質(zhì)性[1-2]。盡管利妥昔單抗+環(huán)磷酰胺+多柔比星+長(zhǎng)春新堿+潑尼松(Rituximab-Cyclophosphamide+Doxorubicin+Vincristine+Prednisolone,R-CHOP)方案可顯著改善大多數(shù)患者預(yù)后,但仍有高達(dá)40%患者在初始治療后短期內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)閺?fù)發(fā)/難治型,成為目前臨床實(shí)踐中亟待解決的難點(diǎn)之一[3-4]。

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7(IGFBP7)是胰島素樣生長(zhǎng)因子軸的一部分,在細(xì)胞增殖、分化、凋亡中起重要作用。IGFBP7與肝癌、結(jié)腸癌、胃癌、惡性膠質(zhì)瘤等癌細(xì)胞增殖、血管形成、癌細(xì)胞遷移關(guān)系密切[5-8]。Zhao等[9]報(bào)道,IGFBP7在胃癌中的表達(dá)水平與疾病的分期、分級(jí)、腫瘤狀態(tài)、免疫細(xì)胞浸潤(rùn)等臨床特征有關(guān)。

隨著研究的深入,IGFBP7正逐漸成為多種腫瘤預(yù)測(cè)的生物標(biāo)志物。本研究分析了IGFBP7在DLBCL中的表達(dá),及其與臨床病理特征之間的關(guān)系,旨在為DLBCL患者的治療提供新參考。

1 資料和方法

1.1 臨床資料收集2016年1月至2023年3月新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科診斷為DLBCL的165例患者的病歷資料,按照2022年第5版WHO淋巴造血組織腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)[10],由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的高年資病理醫(yī)師閱片復(fù)核診斷。通過(guò)電子病歷收集患者的臨床和病理資料,并進(jìn)行電話隨訪,包括患者性別、年齡、Ann Arbor分期、乳酸脫氫酶(LDH)水平(120～250 U/L為正常組,≥250 U/L為升高組)、國(guó)際預(yù)后指數(shù)(IPI)評(píng)分、體力狀態(tài)評(píng)分(ECOG)、累及部位、B癥狀、β2微球蛋白水平(正常范圍為0.8～2.2 g/L)、外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)(正常范圍為1.1～3.2×109/L,<1.1×109/L為降低)、外周血中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(正常范圍為1.8～6.3×109/L,>6.3×109/L為升高)、外周血單核細(xì)胞計(jì)數(shù) (正常范圍為0.1～0.6×109/L,>0.6×109/L為升高)、Ki67陽(yáng)性指數(shù),以上臨床特征的選擇參考文獻(xiàn)[11]。本研究通過(guò)新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)(G-2023007)。

1.2 免疫組織化學(xué)染色方法使用經(jīng)正規(guī)固定的石蠟包埋組織切片,采用En Vision二步法染色,一抗購(gòu)自美國(guó)Abcam公司:IGFBP7、克隆號(hào)EPR11912(B)。

1.3 判讀標(biāo)準(zhǔn)IGFBP7染色定位于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì),根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和著色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分:(1)按陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為0分,5%～25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,>75%為4分;(2)按細(xì)胞著色程度進(jìn)行評(píng)分:無(wú)著色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分,將以上兩項(xiàng)分值相乘得出最后評(píng)分:0分為(-),1～3分為(+),4～6分為(++),7～9分為(+++),10～12分為(++++),其中++～++++為IGFBP7高表達(dá)。對(duì)于結(jié)果的判讀方法參考文獻(xiàn)[12],將165例患者按IGFBP7陽(yáng)性程度分為高表達(dá)組、低表達(dá)組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;采用χ2分析IGFBP7表達(dá)與各臨床病理特征之間的關(guān)系;用Kaplan-Meier進(jìn)行患者生存曲線的繪制;Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行獨(dú)立預(yù)后危險(xiǎn)因素分析。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果IGFBP7高表達(dá)患者86例(52.1%),低表達(dá)者79例(47.9%)。IGFBP7在DLBCL中的表達(dá)及陽(yáng)性程度見(jiàn)圖1。

注:A,IGFBP7低表達(dá);B,IGFBP7高表達(dá);C,Ki67表達(dá)<70%;D,Ki67表達(dá)≥70%。

2.2 IGFBP7表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)性DLBCL患者中年齡≥60歲者IGFBP7高表達(dá)率為59.1%,遠(yuǎn)高于<60歲者(43.1%),單核細(xì)胞計(jì)數(shù)升高的患者高表達(dá)率(66.0%)高于計(jì)數(shù)正常者(41.6%),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。此外,IGFBP表達(dá)水平與患者性別、Ann Arbor分期、LDH水平、IPI評(píng)分、ECOG評(píng)分、累及部位、免疫分型、B癥狀、β2微球蛋白、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞均無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 165例DLBCL患者中IGFBP7表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系/例(%)

2.3 預(yù)后因素分析結(jié)果165例DLBCL患者中,107例生存,58例死亡。單因素結(jié)果顯示,年齡≥60歲、Ann Arbor分期Ⅲ～Ⅳ期、LDH水平升高、IPI評(píng)分>3分、ECOG評(píng)分≥2分、累及部位為淋巴結(jié)內(nèi)、有B癥狀、β2微球蛋白≥2.2 mg/L及IGFBP7高表達(dá)的DLBCL患者生存率較低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而患者性別、免疫分型、Ki67陽(yáng)性指數(shù)對(duì)DLBCL患者生存時(shí)間的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。將上述有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入Cox回歸分析,結(jié)果顯示患者年齡≥60歲、LDH水平升高、累及部位為淋巴結(jié)內(nèi)、外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)升高和IGFBP7高表達(dá)是影響DLBCL患者生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)(見(jiàn)表2)。年齡≥60歲患者生存期短于<60歲患者,LDH水平升高的患者生存期短于LDH水平正常的患者,累及部位為結(jié)內(nèi)的患者生存期短于結(jié)外患者,外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)降低的患者生存期短于計(jì)數(shù)正?；颊?IGFBP7高表達(dá)的患者生存期短于低表達(dá)患者。見(jiàn)圖2。

表2 多因素Cox回歸分析

圖2 DLBCL生存曲線圖

3 討論

DLBCL是一種異質(zhì)性很強(qiáng)的疾病,在臨床特征、基因表型、對(duì)治療方案的反應(yīng)性等方面具有很強(qiáng)的差異,影響DLBCL患者預(yù)后的因素很多[13]。本研究結(jié)果顯示,患者年齡、LDH水平、累及部位、外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和IGFBP7表達(dá)水平均是影響患者生存時(shí)間的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

Zhang等[14]報(bào)道,IGFBP7通過(guò)調(diào)節(jié)AKT活性和細(xì)胞周期進(jìn)展抑制甲狀腺癌。Chen等[15]報(bào)道IGFBP7是AKT3/mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的上游分子。IGFBP7可能是腫瘤生物學(xué)調(diào)控過(guò)程中的重要分子之一。De Visser等[16]研究發(fā)現(xiàn),IGFBP7通過(guò)與CD93結(jié)合參與破壞腫瘤血管生成并增強(qiáng)免疫浸潤(rùn),進(jìn)而增強(qiáng)CD93單克隆抗體的免疫治療效果。此外,IGFBP7的表達(dá)與巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)程度和功能有關(guān),Li等[17]研究證實(shí)了IGFBP7可通過(guò)FGF2/FGFR1/PI3K/AKT軸促進(jìn)M2/TAM巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn),提示IGFBP7可能是調(diào)控腫瘤免疫微環(huán)境的重要分子,有可能成為未來(lái)免疫治療的靶點(diǎn)。

Artico等[18]研究表明,IGFBP7與急性淋巴細(xì)胞白血病的生物學(xué)和臨床預(yù)后因素有關(guān),參與細(xì)胞粘附及維甲酸和皮質(zhì)醇的代謝,能調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng),并與白細(xì)胞計(jì)數(shù)有顯著相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn),IGFBP7表達(dá)水平與外周血單核細(xì)胞計(jì)數(shù)存在相關(guān)性,可能參與DLBCL腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程。有研究證明,IGFBP7在胰腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌等癌中低表達(dá),被稱為抑癌基因[19-21]。Sato等[22]報(bào)道IGFBP7高表達(dá)與胃癌臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征相關(guān),且與低存活率相關(guān),可為胃癌預(yù)后評(píng)估提供一定的依據(jù)。但本研究結(jié)果顯示,IGFBP7表達(dá)水平與患者年齡相關(guān),與Ann Arbor分期尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性,IGFBP7高表達(dá)的患者存活率較低,與DLBCL不良預(yù)后有關(guān)且為獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Carreras等[23]研究發(fā)現(xiàn),IGFBP7影響套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的功能,其高表達(dá)與MKi67表達(dá)水平相關(guān)。本研究結(jié)果顯示,IGFBP7表達(dá)水平與Ki67陽(yáng)性表達(dá)情況有相關(guān)性,這與上述研究結(jié)果一致。綜上所述,IGFBP7可能是DLBCL預(yù)后相關(guān)的標(biāo)志物,或可成為臨床新的治療靶點(diǎn)。

本研究存在以下不足之處:(1)此研究是對(duì)單中心的臨床樣本進(jìn)行驗(yàn)證,樣本量較小,研究結(jié)果可能有待進(jìn)一步驗(yàn)證。(2)未詳細(xì)分析IGFBP7參與DLBCL具體作用機(jī)制。以上也將是本課題組今后進(jìn)一步研究的重點(diǎn)內(nèi)容。