張夏夏 白銀雪 吳丹丹 孫龍飛 任珊 安冬青

摘要? 目的：基于葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）/NOD樣受體蛋白3（NLRP3）信號(hào)通路探討天香丹通過(guò)調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制。方法：將雄性載脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠隨機(jī)分為模型組、阿托伐他汀組、天香丹組，每組11只，給予高脂飼料誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化模型；另取10只雄性C57BL/6J小鼠作為正常組。于造模10周后給予相應(yīng)藥物治療，連續(xù)干預(yù)12周。采用蘇木精-伊紅（HE）染色觀法察胸主動(dòng)脈病理特點(diǎn)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素18（IL-18）、活性氧（ROS）含量；免疫組織化學(xué)法（IHC-P）檢測(cè)胸主動(dòng)脈中GRP78和NLRP3蛋白陽(yáng)性表達(dá)水平。結(jié)果：各實(shí)驗(yàn)組存活6只。與模型組比較，阿托伐他汀組和天香丹組IL-1β、IL-18、ROS表達(dá)含量均降低（P＜0.05或P＜0.01）；GRP78、NLRP3蛋白陽(yáng)性表達(dá)均明顯減少（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：天香丹能有效改善動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病小鼠炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)制可能與調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激GRP78/NLRP3信號(hào)通路抑制炎癥小體活化、減輕動(dòng)脈粥樣硬化炎癥損傷有關(guān)。

關(guān)鍵詞? 動(dòng)脈粥樣硬化；天香丹；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78；NOD樣受體蛋白3；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.11.006

The Anti-atherosclerosis Mechanism of Tianxiangdan by Regulating Endoplasmic Reticulum Stress Through GRP78/NLRP3 Signaling Pathway

ZHANG Xiaxia， BAI Yinxue， WU Dandan， SUN Longfei， REN Shan， AN Dongqing

Xinjiang Medical University Institute of TCM， Urumqi 830011， Xinjiang， China

Corresponding Author? AN Dongqing， E-mail： 995079431@qq.com

Abstract? Objective：Based on the glucose-regulatory protein 78（GRP78）/NOD-like receptor protein 3（NLRP3） signaling pathway to explore the anti-atherosclerosis mechanism of Tianxiangdan through regulation of endoplasmic reticulum stress.Methods：A total of 35 male apolipoprotein E gene knockout（ApoE-/-） mice were randomly divided into model group，atorvastatin group and Tianxiangdan group，with 6 mice in each group.Atherosclerosis model was induced by high fat diet.Another 10 male C57BL/6J mice were selected as the normal group.After 10 weeks of modeling，the corresponding drug treatment was given.The intervention lasted for 12 weeks.Hematoxylin-eosin（HE） staining was used to observe the pathological features of thoracic aorta.Serum interleukin-1β（IL-1β），interleukin-18（IL-18） and reactive oxygen species（ROS） were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.The positive expression levels of GRP78 and NLRP3 proteins in thoracic aorta were detected by immunohistochemistry（IHC-P）.Results：Compared with model group，the expression levels of IL-1β，IL-18 and ROS in atorvastatin group and Tianxiangdan group decreased（P＜0.05 or P＜0.01），the positive expressions of GRP78 and NLRP3 decreased（P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusion：Tiangdan can effectively improve the inflammatory response of mice with atherosclerotic cardiovascular disease，and its mechanism may be related to the regulation of endoplasmic reticulum stress GRP78/NLRP3 signaling pathway to inhibit the activation of inflammasome and reduce the inflammatory damage of arteriosclerotic disease.

Keywords? arteriosclerotic cardiovascular disease; Tianxiangdan; endoplasmic reticulum stress; glucose-regulatory protein 78; NOD-like receptor protein 3; experimental study

基金項(xiàng)目? 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.8206150791）；新疆維吾爾自治區(qū)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題（No.2023D04052）；新疆維吾爾自治區(qū)研究生創(chuàng)新項(xiàng)目（No.XJ2023G198）；新疆維吾爾自治區(qū)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（No.2020D04006）；新疆維吾爾自治區(qū)重大科技專項(xiàng)（No.2022A03019）

通訊作者? 安冬青，E-mail：995079431@qq.com

引用信息? 張夏夏，白銀雪，吳丹丹，等.天香丹通過(guò)GRP78/NLRP3信號(hào)通路調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（11）：1955-1960.

動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病（arteriosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）是全球死亡的主要原因之一［1］，其中血脂異常是關(guān)鍵的致病因素。據(jù)《中國(guó)心血管健康與疾病報(bào)告2022概要》［2］報(bào)道，在我國(guó)因ASCVD導(dǎo)致的死亡人數(shù)高達(dá)1 139萬(wàn)例，其不適癥狀的延綿性、長(zhǎng)期性和醫(yī)療昂貴等方面，已成為全球亟待解決的社會(huì)和醫(yī)學(xué)問(wèn)題。

動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制已被廣泛研究，其中炎癥反應(yīng)被認(rèn)為貫穿于其整個(gè)發(fā)病過(guò)程，由此，抑制炎癥反應(yīng)也被稱為“曙光初現(xiàn)”［3］。目前，常規(guī)治療動(dòng)脈粥樣硬化的方法包括調(diào)節(jié)血脂、抗炎、擴(kuò)血管、抗凝等藥物，病變管腔發(fā)生明顯狹窄或堵塞時(shí)，以介入或手術(shù)治療為主。然而長(zhǎng)期聯(lián)合服用以上藥物多伴有肌溶解和肝損傷等副作，目前醫(yī)學(xué)影像技術(shù)也具有一定局限性，并且介入手術(shù)易影響血管阻力指數(shù)導(dǎo)致肌細(xì)胞死亡［4-6］。然而，在我國(guó)，中醫(yī)藥治療動(dòng)脈粥樣硬化療效顯著且副作用較?。?-14］。復(fù)方天香丹已取得臨床成果轉(zhuǎn)化與專利申請(qǐng)，本方由紅景天、丹參、新塔花、降香組成，全方共奏行氣活血、化瘀止痛之功，經(jīng)長(zhǎng)期臨床研究發(fā)現(xiàn)，天香丹具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的療效［15］。

研究者發(fā)現(xiàn)，隨著對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制的深入研究，炎癥反應(yīng)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）之間的串?dāng)_機(jī)制可能是揭示動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制的新途徑。ERS標(biāo)志物葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose-regulated protein 78，GRP78）已在多種心血管疾病中表達(dá)，其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡與動(dòng)脈粥樣硬化的形成和斑塊的脫落密切相關(guān)［16-21］。ERS發(fā)生時(shí)，解離后的GRP78能夠介導(dǎo)多種下游信號(hào)通路激活炎癥小體（nod-likereceptorprotein 3，NLRP3）加重動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展［22-23］。前期研究中發(fā)現(xiàn)，NLRP3可能是天香丹治療動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵靶標(biāo)［24-25］。但ERS是如何通過(guò)調(diào)控激活NLRP3介導(dǎo)天香丹發(fā)揮其心肌保護(hù)作用的機(jī)制未明確。由此，本研究擬在成功干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，探討天香丹通過(guò)GRP78/NLRP3信號(hào)通路調(diào)控ERS抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制，為天香丹防治動(dòng)脈粥樣硬化提供參考依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 藥物與試劑

天香丹顆粒購(gòu)自新奇康藥業(yè)股份有限公司（規(guī)格：每包9 g，批號(hào)：210540，藥物專利號(hào)：200910210063.9）；阿托伐他汀鈣片購(gòu)自輝瑞制藥有限公司（批號(hào)：EE0898）。白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素18（IL-18）、活性氧（ROS）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自上海優(yōu)選生物科技有限公司（批號(hào)：YX-E28912、YX-E21218、YX-E28857）；蘇木精-伊紅（HE）染色液購(gòu)自北京蘭杰柯科技有限公司（批號(hào)：BL700B）；兔超敏二步法免疫組化檢測(cè)試劑、封閉用羊血清購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司（批號(hào)：PV-6001、ZLI-9022）；3，3′-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒、抗體GRP78、NLRP3購(gòu)自艾博抗貿(mào)易有限公司（批號(hào)：ab64238、ab21685、ab214185）；通用型抗體稀釋液購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司（批號(hào)：A1800）。

1.2? 儀器

低溫高速離心機(jī)、全自動(dòng)組織脫水機(jī)、EG1150型包埋機(jī)、RM2235型切片機(jī)、恒溫水浴鍋均購(gòu)自德國(guó)Leica；自動(dòng)恒溫烤片儀（湖北泰雅醫(yī)療科技），恒溫干燥箱（上海博訊），酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Fisher），正置光學(xué)顯微鏡（日本Nikon）。

1.3? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

43只無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)雄性8周齡小鼠，其中載脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠33只，C57BL/6J小鼠10只，體質(zhì)量（18±2）g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司和新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號(hào)：SCXK（京）2021-0006。飼養(yǎng)環(huán)境于人工晝夜循環(huán)空氣清潔房?jī)?nèi)，溫度為22～28 ℃，明暗時(shí)間為12 h/12 h，自由飲水、進(jìn)食。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批（批號(hào)：IACUC-20200331-47）。

1.4? 造模、分組及給藥方法

檢疫適應(yīng)1周后，將33只8周齡雄性ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為模型組（高脂飼料＋純化水）、阿托伐他汀組（高脂飼料＋阿托伐他汀鈣片沖泡液）、天香丹組（高脂飼料＋天香丹顆粒沖泡液），每組11只，予高脂飼料（含21%脂肪、0.15%膽固醇）喂養(yǎng)；10只C57BL/6J小鼠作為正常組，予以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)（基礎(chǔ)飼料＋蒸餾水）。飼養(yǎng)第11周，隨機(jī)處理3只ApoE-/-小鼠檢驗(yàn)斑塊形成后，給予藥物灌胃干預(yù)。藥物以成人臨床用藥劑量同效換算小鼠實(shí)驗(yàn)用藥量灌胃，將干預(yù)藥品溶于500 μL純化水中，阿托伐他汀組與天香丹組分別按照3.0 mg/（kg·d）、2.7 g/（kg·d）的劑量進(jìn)行治療，模型組和正常組以同比例體積的純化水進(jìn)行灌胃，每日1次，每周根據(jù)小鼠體重變化調(diào)整藥物灌胃量，繼續(xù)喂養(yǎng)12周。造模及給藥期間各組均有死亡，最終統(tǒng)計(jì)樣本量各為6只。

1.5? 標(biāo)本留取

末次灌胃后，術(shù)前12 h禁食不禁水，腹腔注射1%戊巴比妥鈉溶液麻醉，觸及心尖搏動(dòng)最強(qiáng)處后進(jìn)行胸腹部區(qū)域消毒，沿膈肌下緣剖開(kāi)腹腔，取1 mL注射器與心尖搏動(dòng)處呈30°角刺入5～10 mm處采集血液后取上清，置于－80 ℃低溫保存用于檢測(cè)血清指標(biāo)。后剝離頸、胸、腹主動(dòng)脈組織分裝于4%多聚甲醛固定液中，用于HE、免疫組織化學(xué)法（IHC-P）病理觀察。

1.6? IL-18、IL-1β、ROS水平檢測(cè)

按照ELISA試劑盒說(shuō)明書，采用雙抗夾心法檢測(cè)各組血清IL-18、IL-1β、ROS水平。

1.7? IHC-P法檢測(cè)胸主動(dòng)脈組織中GRP78、NLRP3蛋白表達(dá)量

切片放入60 ℃烘箱中1 h后置于室溫10 min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ溶液中浸泡20 min，各梯度乙醇中浸泡5 min，高溫抗原修復(fù)20 min，放置室溫1 h，滴加H2O2酶遮光放置15 min，滴加山羊血清并放入37 ℃烘箱孵育30 min，滴加一抗于4 ℃冰箱過(guò)夜，復(fù)溫30 min，滴加二抗并放入37 ℃烘箱孵育30 min，DAB、蘇木精染液染色后進(jìn)行分化與脫水處理，二甲苯溶液透明并封片，鏡下采集圖像并分析蛋白表達(dá)量。

1.8? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS 27.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。定量資料滿足正態(tài)分布用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用LSD法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)? 果

2.1? 各組小鼠胸主動(dòng)脈組織HE染色結(jié)果

HE染色結(jié)果顯示，模型組可見(jiàn)明顯斑塊，阿托伐他汀組與天香丹組斑塊較模型組減小，正常組無(wú)斑塊出現(xiàn)。詳見(jiàn)圖1。

2.2? 各組血清IL-1β、IL-18、ROS水平比較

與正常組比較，模型組小鼠血清IL-1β、IL-18、ROS水平明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，阿托伐他汀組與天香丹組血清IL-1β、IL-18、ROS水平明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）。詳見(jiàn)圖2。

（A為各組IL-1β水平比較；B為各組IL-18水平比較；C為各組ROS表達(dá)比較）

2.3? 各組胸主動(dòng)脈中GRP78、NLRP3蛋白陽(yáng)性表達(dá)比較

與正常組比較，模型組GRP78、NLRP3蛋白陽(yáng)性表達(dá)明顯增加（P＜0.01）；與模型組比較，阿托伐他汀組與天香丹組GRP78、NLRP3蛋白陽(yáng)性表達(dá)明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）。詳見(jiàn)圖3、圖4、表1。

3? 討? 論

動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展可引起心肌梗死、心肌纖維化等急性臨床事件［26］，是導(dǎo)致病人死亡的重要危險(xiǎn)因素。動(dòng)脈粥樣硬化本質(zhì)是一類慢性炎癥性疾病，血管內(nèi)膜中沉積的不溶性膽固醇晶體常積累在溶酶體中并破壞其膜結(jié)構(gòu)，溶酶體裂解后釋放的組織蛋白酶可促進(jìn)NLRP3炎癥小體活化、激活NLRP3蛋白，啟動(dòng)下游炎性因子IL-1β、IL-18持續(xù)加重炎癥反應(yīng)，促使壞死核心形成和纖維帽變薄，最終導(dǎo)致斑塊破裂和血栓形成，引起急性血管性病變［27］。因此，靶向抑制NLRP3炎癥小體是治療動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵一環(huán)。

自炎癥小體首次發(fā)現(xiàn)以來(lái)，有關(guān)NLRP3炎癥小體參與動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的研究較多，目前動(dòng)脈粥樣硬化中NLRP3炎癥小體活化的學(xué)說(shuō)包含氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙、ERS、溶酶體破裂等，其中包含多類別、多形式的分子信號(hào)傳遞，如K＋、Ca2＋的流離，三磷酸腺苷（ATP）、ROS及蛋白分子的釋放［28-30］。ERS介導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的多種病理過(guò)程中涉及多條信號(hào)通路，ERS水平持續(xù)升高會(huì)激活NLRP3炎癥小體，本研究在上述作用機(jī)制的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探索ERS與NLRP3炎癥小體及信號(hào)蛋白在動(dòng)脈粥樣硬化中的交互作用。ERS是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在受刺激后引起自身對(duì)蛋白產(chǎn)生錯(cuò)誤折疊與未折疊蛋白積累的一種反應(yīng)［31］，在不同物種的動(dòng)脈粥樣硬化病變處已經(jīng)發(fā)現(xiàn)ERS標(biāo)志物［32］。相關(guān)研究證實(shí)除ERS抑制劑外，相關(guān)拮抗藥物也能在動(dòng)脈粥樣硬化模型或環(huán)境下下調(diào)GRP78、NLRP3、IL-18、IL-1β、ROS的表達(dá)，其中中藥丹參提取物丹參酸B在GRP78-NLRP3信號(hào)傳遞過(guò)程中體現(xiàn)出良好的調(diào)控效果［33-37］，以上研究結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)ERS參與動(dòng)脈粥樣硬化的查究進(jìn)展持續(xù)加快，但少有研究探索動(dòng)脈粥樣硬化性疾病中ERS與NLRP3的交互影響及作用。中醫(yī)藥對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的防治頗有研究且安全效優(yōu)，本研究為中醫(yī)藥調(diào)節(jié)ERS抑制NLRP3炎癥小體活化治療動(dòng)脈粥樣硬化提供理論依據(jù)。

中醫(yī)治療動(dòng)脈粥樣硬化主要采用化痰、祛瘀、活血、行氣等，并將動(dòng)脈粥樣硬化歸屬于“真心痛”“胸痹”等范疇。痰涎本由氣血化生，虛留于脈且久息成積則會(huì)導(dǎo)致氣虛不推血運(yùn)形成瘀血，血虛不流則脈道不通，痰飲久而不去則血易成濁，壅于血府，血瘀自成。本虛是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的前提，脈中無(wú)氣、血府積濁導(dǎo)致的“痰瘀”阻塞是脈痹發(fā)生與發(fā)展的關(guān)鍵，痰瘀互結(jié)、損傷脈道是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的病機(jī)［38］，其中不通則痛的表現(xiàn)最為常見(jiàn)，痰瘀同治與補(bǔ)益并施是動(dòng)脈粥樣硬化的治療原則。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)于穩(wěn)態(tài)下的作用與氣血的功能極其相似，氣血功能的失調(diào)與ERS相關(guān)，部分學(xué)者認(rèn)為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能結(jié)構(gòu)與三焦也有相似之處，氣血的疏通和氣機(jī)的調(diào)暢也與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有一定聯(lián)系［39-41］。研究發(fā)現(xiàn)，中藥單體、中藥提取物、中成藥、中藥復(fù)方能在動(dòng)脈粥樣硬化中對(duì)ERS起到調(diào)控作用［42］。復(fù)方天香丹以紅景天為君，具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、活血化瘀止血之功；丹參為臣，具有益氣養(yǎng)血、活血通絡(luò)、祛瘀止痛之功效；新塔花與降香俱為辛香走竄之品，有通陽(yáng)宣痹作用，全方遵循“本虛標(biāo)實(shí)”的病機(jī)，以通而不忘其正虛、補(bǔ)而不忘其邪實(shí)的療法達(dá)到治療目的。前期臨床及基礎(chǔ)研究證實(shí)，天香丹能夠通過(guò)降低血清中炎性因子及血脂水平、穩(wěn)定斑塊、改善血管內(nèi)皮功能等方面達(dá)到治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用，其中涉及血流動(dòng)力學(xué)、核因子-κB信號(hào)通路、基因組學(xué)、細(xì)胞凋亡、脂質(zhì)代謝等研究，然而對(duì)ERS學(xué)說(shuō)的探索較少［43-49］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組相比，天香丹能夠通過(guò)減輕ERS，在動(dòng)脈粥樣硬化模型小鼠胸主動(dòng)脈和血清中下調(diào)ERS起始蛋白GRP78及炎癥蛋白NLRP3、IL-18、IL-1β和促炎物質(zhì)ROS的表達(dá)量。

綜上所述，復(fù)方天香丹可能通過(guò)調(diào)控GRP78/NLRP3信號(hào)通路降低GRP78、NLRP3蛋白和ROS的表達(dá)，減少下游炎性因子IL-18、IL-1β的釋放，緩解ERS并抑制炎癥反應(yīng)進(jìn)程，達(dá)到減緩動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展和抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。中醫(yī)藥調(diào)控ERS抑制NLRP3炎癥小體在動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制，不僅能夠加深對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化起病機(jī)制的理解，也可為動(dòng)脈粥樣硬化的診斷提供新方向。

參考文獻(xiàn)：

［1］? TSIANTOULAS D，SAGE A P，GDERLE L，et al.B cell-activating factor neutralization aggravates atherosclerosis［J］.Circulation，2018，138（20）：2263-2273.

［2］? 中國(guó)心血管健康與疾病報(bào)告2022概要［J］.中國(guó)循環(huán)雜志，2023，38（6）：583-612.

［3］? 程冠良，霍勇.心血管結(jié)局研究對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病治療方案的更新［J］.中國(guó)心血管雜志，2022，27（3）：219-221.

［4］? GUO J S，WANG H，LI Y，et al.Nanotechnology in coronary heart disease［J］.Acta Biomaterialia，2023，171：37-67.

［5］? HONDA S，KATAOKA Y，KANAYA T，et al.Characterization of coronary atherosclerosis by intravascular imaging modalities［J］.Cardiovascular Diagnosis and Therapy，2016，6（4）：368-381.

［6］? ?ARNETT D K，BLUMENTHAL R S，ALBERT M A，et al.2019 ACC/AHA guideline on the primary prevention of cardiovascular disease：a report of the American College of Cardiology/American Heart Association task force on clinical practice guidelines ［J］.J Am Coll Cardiol，2019，74（10）：e177-e232.

［7］? DENG Q，LI X X，F(xiàn)ANG Y T，et al.Therapeutic potential of quercetin as an antiatherosclerotic agent in atherosclerotic cardiovascular disease：a review［J］.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine，2020，2020：5926381.

［8］? GOU T T，HU M H，XU M，et al.Novel wine in an old bottle：preventive and therapeutic potentials of andrographolide in atherosclerotic cardiovascular diseases［J］.Journal of Pharmaceutical Analysis，2023，13（6）：563-589.

［9］? YU W，ILYAS I，HU X R，et al.Therapeutic potential of paeoniflorin in atherosclerosis：a cellular action and mechanism-based perspective［J］.Frontiers in Immunology，2022，13：1072007.

［10］? 劉一穎，張辰浩，林瓏，等.從急性心肌梗死逆向加速動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病談中醫(yī)痰瘀同治［J］.中國(guó)中醫(yī)急癥，2022，31（4）：645-647.

［11］? 王國(guó)倩，張晉康，喻正科，等.冠心通絡(luò)膠囊治療動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的研究進(jìn)展［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，40（10）：1298-1304.

［12］? 陸峰，胡元會(huì)，陳志剛，等.心腦寧膠囊治療動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病臨床應(yīng)用專家共識(shí)［J］.中草藥，2020，51（11）：2863-2870.

［13］? SUN H Q，QU W，CHEN G J，et al.Efficacy and safety of traditional Chinese patent medicine on carotid artery atherosclerosis in adults：a network meta-analysis protocol［J］.Medicine，2021，100（3）：e24406.

［14］? LI J，DU Y Y，CAI C，et al.Effectiveness and safety of treating carotid atherosclerotic plaques with the method of nourishing Qi，promoting blood circulation and expelling phlegm：a systematic review and meta-analysis［J］.Frontiers in Pharmacology，2022，13：1059737.

［15］? 張華，王思靜，安冬青.天香丹治療冠心病的研究進(jìn)展［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2019，17（17）：2601-2603.

［16］? SUI R C，LIU C C，WANG N，et al.TFIIB-related factor 2 regulates glucose-regulated protein 78 expression in acquired middle ear cholesteatoma［J］.Biochemical and Biophysical Research Communications，2021，540：95-100.

［17］? GIRONA J，RODRGUEZ-BORJABAD C，IBARRETXE D，et al.The circulating GRP78/BiP is a marker of metabolic diseases and atherosclerosis：bringing endoplasmic reticulum stress into the clinical scenario［J］.Journal of Clinical Medicine，2019，8（11）：1793.

［18］? HOSODA K，IMAHORI T，TANAKA K，et al.Contribution of endoplasmic reticulum stress to the clinical instability of carotid plaques in human carotid stenosis［J］.Translational Stroke Research，2022，13（3）：420-431.

［19］? ZHANG Y，YANG S W，F(xiàn)U J，et al.Inhibition of endoplasmic reticulum stress prevents high-fat diet mediated atrial fibrosis and fibrillation［J］.Journal of Cellular and Molecular Medicine，2020，24（23）：13660-13668.

［20］? WANG F，HAN L L.Upregulation of serum and glucocorticoid-regulated kinase 1 （SGK1） ameliorates doxorubicin-induced cardiotoxic injury，apoptosis，inflammation and oxidative stress by suppressing glucose regulated protein 78 （GRP78）-mediated endoplasmic reticulum stress［J］.Bioengineered，2022，13（1）：844-855.

［21］? SU S J，WANG J R，WANG J，et al.Cardioprotective effects of gypenoside ⅩⅦ against ischemia/reperfusion injury：role of endoplasmic reticulum stress，autophagy，and mitochondrial fusion fission balance［J］.Phytotherapy Research，2022，36（7）：2982-2998.

［22］? CHEN X N，GUO X C，GE Q H，et al.ER stress activates the NLRP3 inflammasome：a novel mechanism of atherosclerosis［J］.Oxidative Medicine and Cellular Longevity，2019，2019：3462530.

［23］? LI W J，JIN K H，LUO J C，et al.NF-κB and its crosstalk with endoplasmic reticulum stress in atherosclerosis［J］.Frontiers in Cardiovascular Medicine，2022，9：988266.

［24］? 孫龍飛，安冬青，古麗加瑪力·尼亞孜，等.天香丹對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化穢濁痰阻證ApoE（-/-）小鼠血清中IL-1β和TNF-α表達(dá)的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2017，32（8）：3478-3482.

［25］? 柴鈺，金翠柳，凌望，等.血管內(nèi)皮細(xì)胞焦亡在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展中的作用及機(jī)制研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)研究雜志，2021，50（9）：147-150.

［26］? 安冬青，吳宗貴.動(dòng)脈粥樣硬化中西醫(yī)結(jié)合診療專家共識(shí)［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2017，20（5）：507-511.

［27］? THEOFILIS P，OIKONOMOU E，CHASIKIDIS C，et al.Inflammasomes in atherosclerosis-from pathophysiology to treatment［J］.Pharmaceuticals，2023，16（9）：1211.

［28］? STITHAM J，RODRIGUEZ-VELEZ A，ZHANG X Y，et al.Inflammasomes：a preclinical assessment of targeting in atherosclerosis［J］.Expert Opinion on Therapeutic Targets，2020，24（9）：825-844.

［29］? HOSEINI Z，SEPAHVAND F，RASHIDI B，et al.NLRP3 inflammasome：its regulation and involvement in atherosclerosis［J］.Journal of Cellular Physiology，2018，233（3）：2116-2132.

［30］? LIAQAT A，ASAD M，SHOUKAT F，et al.A spotlight on the underlying activation mechanisms of the NLRP3 inflammasome and its role in atherosclerosis：a review［J］.Inflammation，2020，43（6）：2011-2020.

［31］? CAMPEAU M A，LEASK R L.Empagliflozin reduces endoplasmic reticulum stress associated TXNIP/NLRP3 activation in tunicamycin-stimulated aortic endothelial cells［J］.Naunyn-Schmiedeberg′s Archives of Pharmacology，2024，397（1）：267-279.

［32］? COMINACINI L，GARBIN U，MOZZINI C，et al.The atherosclerotic plaque vulnerability：focus on the oxidative and endoplasmic reticulum stress in orchestrating the macrophage apoptosis in the formation of the necrotic core［J］.Current Medicinal Chemistry，2015，22（13）：1565-1572.

［33］? HANG L W，PENG Y，XIANG R，et al.Ox-LDL causes endothelial cell injury through ASK1/NLRP3-mediated inflammasome activation via endoplasmic reticulum stress［J］.Drug Design，Development and Therapy，2020，14：731-744.

［34］? YU W M，LI S Q，WU H X，et al.Endothelial Nox4 dysfunction aggravates atherosclerosis by inducing endoplasmic reticulum stress and soluble epoxide hydrolase［J］.Free Radical Biology & Medicine，2021，164：44-57.

［35］? ZHANG Z W，GUO Q，ZHAO Z Z，et al.DNMT3B activates FGFR3-mediated endoplasmic reticulum stress by regulating PTPN2 promoter methylation to promote the development of atherosclerosis［J］.The FASEB Journal，2023，37（8）：e23085.

［36］? TANG Y B，WA Q D，PENG L Y，et al.Salvianolic acid B suppresses ER stress-induced NLRP3 inflammasome and pyroptosis via the AMPK/FoxO4 and syndecan-4/Rac1 signaling pathways in human endothelial progenitor cells［J］.Oxidative Medicine and Cellular Longevity，2022，2022：8332825.

［37］? LIU J，YI X，TAO Y，et al.Insulin-receptor substrate 1 protects against injury in endothelial cell models of ox-LDL-induced atherosclerosis by inhibiting ER stress/oxidative stress-mediated apoptosis and activating the Akt/FoxO1 signaling pathway ［J］.Int J Mol Med，2020，46（5）：1671-1682.

［38］? 江勉君，史忠亮，古惠文，等.基于痰瘀理論探討動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2022，20（11）：2098-2100.

［39］? 李紅梅，王顯.氣血“濟(jì)衡守和” 學(xué)說(shuō)芻議［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2016，31（10）：3922-3926.

［40］? 張洋，張艷，孫藤芳，等.基于氣血功能失調(diào)-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)聯(lián)淺析心力衰竭機(jī)制［J］.西部中醫(yī)藥，2018，31（9）：140-142.

［41］? 吳正治，戎志斌.阿爾茨海默病“肝氣郁滯-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)聯(lián)” 病理新假說(shuō)［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2013，20（1）：49-50.

［42］? 梁清芝，陳正濤，周若然，等.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用及中醫(yī)藥調(diào)控研究進(jìn)展［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2024，30（5）：30.

［43］? SUN L F，AN D Q，NIYAZI G L，et al.Effects of Tianxiangdan Granule treatment on atherosclerosis via NF-κB and p38 MAPK signaling pathways［J］.Molecular Medicine Reports，2018，17（1）：1642-1650.

［44］? 孫龍飛，謝曉柳，古麗加瑪力·尼亞孜，等.天香丹對(duì)冠心病穩(wěn)定型心絞痛病人臨床療效及血清中炎性因子IL-1β和TNF-α的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2019，17（3）：334-337.

［45］? 孫龍飛，徐風(fēng)燕，安冬青.天香丹治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病穢濁痰阻證患者的臨床療效觀察［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2021，36（11）：6912-6916.

［46］? 陳淼，張華，王曉旭，等.天香丹治療穢濁痰阻型冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。跩］.河南中醫(yī)，2021，41（2）：300-304.

［47］? 辛錦鈺，張亞潔，古麗葛娜·薩吾爾，等.天香丹對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2022，50（1）：18-22.

［48］? 何歡，張亞潔，吳丹丹，等.天香丹抑制血小板聚集改善頸動(dòng)脈血栓形成的作用研究［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，45（3）：318-322.

［49］? 郭龍龍，安冬青，劉偉，等.天香丹干預(yù)冠心病穢濁痰阻證病人血漿miR-126表達(dá)水平變化研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15（22）：2850-2852.

（收稿日期：2024-01-21）

（本文編輯郭懷?。?/p>