凝膠電泳
- 駱駝乳及其制品中非熱變性乳鐵蛋白含量的快速電泳遷移檢測
。聚丙烯酰胺凝膠電泳作為一種常見的蛋白分離檢測方法，可用于CLF 的分析，成本低但操作復(fù)雜、耗時[10,13-14]。高效液相色譜與質(zhì)譜法聯(lián)用其特異性、靈敏度、重復(fù)性等均能夠滿足CLF 的定量要求，但前處理復(fù)雜，對操作人員技術(shù)要求較高，測定結(jié)果包含了熱變性CLF[12]。采用薄層色譜法可直接在駱駝乳中分離定量出乳鐵蛋白，樣品前處理簡單，僅能用于CLF 半定量檢測[11]。因此，依然需要發(fā)展操作簡便、快速、準(zhǔn)確的非熱變性CLF 檢測方法，用于駱駝乳及乳制品營
中國乳品工業(yè) 2023年10期2023-11-15
- 細(xì)述基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程
——由一道江蘇高考題引發(fā)的思考
技術(shù)與瓊脂糖凝膠電泳是教學(xué)難點,在習(xí)題中也常出現(xiàn)錯誤,本文將通過瓊脂糖凝膠電泳在雙酶切產(chǎn)物分離中的作用對其進(jìn)行分析。1.背景知識,追根溯源在使用單酶切的載體或者平端載體時,載體本身的兩個DNA末端可以匹配,產(chǎn)生自身連接的產(chǎn)物。如果載體濃度和插入DNA片段濃度均較低,則載體DNA兩個末端之間碰撞的機(jī)會大于和目的DNA末端碰撞的機(jī)會,就會導(dǎo)致載體DNA分子的自身連接,形成環(huán)化的載體分子。在將目的基因片段插入到載體中的時候,由于酶切位點序列的回文特征,若使用單個
教學(xué)考試(高考生物) 2023年1期2023-04-14
- 不同來源乳中乳鐵蛋白含量的高通量毛細(xì)管凝膠電泳檢測
用聚丙烯酰胺凝膠電泳法電泳分離，也可以半定量不同來源乳中LF含量[20]，但該方法每次檢測的樣品數(shù)量有限，操作繁瑣且耗時長。因此，目前仍缺少快速、簡便、高通量、無需復(fù)雜樣品前處理的，具有普適性的不同來源乳中的LF含量檢測方法。本研究在前期建立的全自動高通量毛細(xì)管凝膠電泳檢測牛源乳鐵蛋白（bovine lactoferrin，BLF）的基礎(chǔ)上[21-22]，通過篩選分別能夠與人源乳鐵蛋白（human lactoferrin，HLF）、羊源乳鐵蛋白（goat
中國乳品工業(yè) 2023年2期2023-03-04
- 高效安全的核酸染料在瓊脂糖凝膠電泳中的應(yīng)用
引言瓊脂糖凝膠電泳是DNA片段分離、檢測最常用的技術(shù)之一［1］，也是高校生物類專業(yè)實踐教學(xué)的重要環(huán)節(jié)。核酸染料與瓊脂糖凝膠中DNA片段結(jié)合后，在特定光譜照射下發(fā)出熒光條帶，從而指示DNA片段大小和質(zhì)量。溴化乙錠（EB）是瓊脂糖凝膠電泳最早使用也是最常用的核酸染料，其含有一個插入DNA堆積堿基之間的三環(huán)平面基團(tuán)，經(jīng)艾姆斯實驗證實具有高度致癌性和致突變能力，對長期使用EB的實驗人員和環(huán)境存在危害性［2］。隨著對核酸染料研究的深入以及化學(xué)合成技術(shù)的發(fā)展，近幾年
實驗室研究與探索 2022年7期2022-10-26
- 不同檢測方法對甜菜SCoT和DAMD擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性的影響
或聚丙烯酰胺凝膠電泳分離。早有研究表明不同的凝膠電泳對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性存在一定的影響。李新海等[21]首先利用3% 瓊脂糖凝膠和12%的聚丙烯凝膠酰胺電泳對SSR 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分離，結(jié)果表明瓊脂糖凝膠電泳更適于遺傳作圖和基因定位的研究，聚丙烯酰胺凝膠電泳則可用于遺傳多樣性和構(gòu)建指紋圖譜的研究；而孫燕紅等[22]利用26條DAMD 引物和12個甜菜品種，對比2%的瓊脂糖凝膠和6%聚丙烯酰胺凝膠電泳對擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性的影響時，則發(fā)現(xiàn)瓊脂糖凝膠電泳與聚丙烯酰
中國甜菜糖業(yè) 2022年3期2022-10-20
- Omicron 株新型冠狀病毒滅活疫苗（Vero 細(xì)胞）原液特異性鑒別試驗RT-PCR 法的建立及驗證
。1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定，凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行條帶分析。1.6 引物篩選 根據(jù)Omicron 株S 基因序列中相比于其他突變株所特有的插入及缺失基因序列設(shè)計4對引物：OSTF1 ／ OS1R、OSTF3 ／ S2R、S1F ／ OSTR1和OSTF1 ／ S2R，分別利用這4 對引物對原型株及Omicron 株原液進(jìn)行RT-PCR 檢測，觀察條帶特異性，篩選合適引物。1.7 方法驗證1.7.1 專屬性 取202201Y001 批Omicron 株原液、S202
中國生物制品學(xué)雜志 2022年6期2022-06-23
- 創(chuàng)客教育在生物工程技術(shù)中的應(yīng)用
——以自制低成本DNA凝膠電泳裝置為例＊
備，如DNA凝膠電泳系統(tǒng)、PCR（DNA體外擴(kuò)增）設(shè)備、限制性內(nèi)切酶系統(tǒng)等。目前，生物的學(xué)科教育已經(jīng)進(jìn)入到中學(xué)的校本課當(dāng)中。但是，并非所有的中學(xué)或職校的生物實驗室能夠負(fù)擔(dān)高端且昂貴的分子生物實驗設(shè)備和材料。絕大多數(shù)的生物課程還是以理論講授為主，偶爾以虛擬軟件為輔。在缺少動手實踐的情況下，學(xué)生缺乏對微觀層面知識的深入理解。由于生物工程技術(shù)也是近年來廣受關(guān)注的創(chuàng)客教育（或STEM教育）的一個熱點方向，不少中學(xué)引入外界資源幫助學(xué)校建立生物技術(shù)類的創(chuàng)客課程體系，旨
科技與創(chuàng)新 2022年2期2022-02-11
- 乳及乳制品中乳鐵蛋白的全自動高通量毛細(xì)管凝膠電泳檢測方法研究
全自動毛細(xì)管凝膠電泳分析后游離適配體的峰面積的減少以及減少程度實現(xiàn)乳鐵蛋白的定性定量檢測。避免了前期研究通過聚丙烯酰胺[26]和瓊脂糖凝膠電泳[27-28]檢測乳鐵蛋白的制膠、點樣、灰度讀取等耗時、繁復(fù)的流程，相比Zhu chao[29]等建立的乳鐵蛋白的毛細(xì)管區(qū)帶電泳-適配體傳感器檢測方法，具有分析時間更短、自動化程度高的優(yōu)點，為乳制品企業(yè)檢測LF提供新思路。1 材料與方法1.1 主要試劑和儀器DNA序列（5’-(FAM)-AGG CAG GAC ACC
中國乳品工業(yè) 2021年9期2021-10-28
- SSR 分子標(biāo)記兩種電泳方法快速區(qū)分玉米種子雜交種
性聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠為支持物，在一定電壓作用下，將不同大小的核苷酸片段分離開，經(jīng)過染色、顯影、定影后，分析指紋圖譜； 熒光毛細(xì)管電泳是通過毛細(xì)管將長短不一的核苷酸片段在高壓電場中分離，通過軟件分析數(shù)據(jù)，比較峰值圖差異，可以實現(xiàn)多樣品、多位點同時檢測，工作效率大大提高[3]。 2020 年，筆者用SSR 分子標(biāo)記方法區(qū)分10 個玉米雜交種， 從40 對SSR 引物中篩選出3 對多態(tài)性高的引物進(jìn)行擴(kuò)增， 用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和熒光毛細(xì)管電
農(nóng)業(yè)科技通訊 2021年5期2021-06-22
- 分次灌膠制備二維凝膠電泳大膠①
要內(nèi)容,二維凝膠電泳(2-DE)技術(shù)在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中得到了廣泛的應(yīng)用,它能夠根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點和分子量,將蛋白質(zhì)混合物中的不同蛋白分子分開,形成各自單獨的蛋白質(zhì)分子點,從而能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)表達(dá)模式進(jìn)行大規(guī)模分析,解讀他們在不同生物下的變化,二維凝膠電泳是分離蛋白的一種強(qiáng)大工具,常應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究。盡管過去了幾十年,出現(xiàn)了更復(fù)雜和高性能的質(zhì)譜分析方法,但只有結(jié)合二維凝膠電泳才使得它在蛋白研究領(lǐng)域發(fā)揮更大作用[1]。最近出現(xiàn)的熱細(xì)胞轉(zhuǎn)移技術(shù)(cellular
華夏醫(yī)學(xué) 2021年2期2021-06-05
- 利用分子標(biāo)記快速鑒定甜菜育性的研究
用1%瓊脂糖凝膠電泳，但是聚丙烯酰胺凝膠電泳是否同樣適合作為甜菜育性鑒定的電泳方式卻不知。試驗采用裂解液法作為一種新型DNA提取方式與CTAB法進(jìn)行對比，以便找出更加適合甜菜DNA提取的方法；另外，通過采用雙重PCR的方法對細(xì)胞質(zhì)類型和細(xì)胞核育性進(jìn)行鑒定，以探究雙重PCR是否能擴(kuò)增成功；最后，對比1%瓊脂糖凝膠電泳和6%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，以找出最佳電泳方式。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 試驗材料 試驗材料為隨機(jī)抽取的10份糖甜菜嫩葉和5份多
中國農(nóng)學(xué)通報 2021年3期2021-03-24
- 番茄葉片及果實總RNA 提取方法的比較
用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA 的完整性：取5 μL RNA 樣品，點樣于1%瓊脂糖凝膠（每100 mL凝膠含有 10 μL GelRed）點樣孔中，140 V 恒壓電泳15 min，在凝膠成像儀下觀察并照相記錄。瓊脂糖凝膠電泳主要用來檢測RNA 的完整性，總RNA 樣品的主要成分是28S rRNA、18S rRNA、5S rRNA；從電泳結(jié)果的28S rRNA 和18S rRNA 的完整性來判斷RNA 樣品有無降解以及降解程度［7］。完整性好的RNA 經(jīng)
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年3期2021-03-09
- 豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測方法的研究
cel毛細(xì)管凝膠電泳系統(tǒng)是一種包括多個激光二極管和微光采集器，片段在凝膠中移動的過程中毛細(xì)管旁路激發(fā)并檢測信號，信號通過光電倍增管傳至可進(jìn)行數(shù)據(jù)分析的專用軟件,進(jìn)行結(jié)果分析的方法。目前，檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒等動物疫病中，RT-PCR檢測是其中一個重要的方法，在多個檢測標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范中均有應(yīng)用。本研究利用40份經(jīng) RT-PCR檢測為病毒核酸陽性或疑似陽性的豬繁殖與呼吸綜合征核酸樣品，進(jìn)行 RT-PCR 擴(kuò)增，產(chǎn)物分別用兩種方法進(jìn)行電泳，分析兩種電泳方法的優(yōu)
浙江畜牧獸醫(yī) 2020年6期2020-12-29
- PCR 快速檢測食品中牛源性成分
用1%瓊脂糖凝膠電泳法鑒定； 樣品的純度用超微量核酸蛋白測定儀在OD260/OD280 處的吸光度值來確定，數(shù)值在1.7～1.9 的可用于PCR 反應(yīng)。2.2.2 引物的設(shè)計從國家生物技術(shù)信息中心 （national center for biotechnology information，NCBI) 網(wǎng)站下載牛和其他動物物種的線粒體DNA 序列。 物種線粒體基因組Genbank 號如下：Bos taurus (GU947021，AY126697，F(xiàn)J99
今日畜牧獸醫(yī) 2020年10期2020-12-08
- 瓊脂糖凝膠電泳法測定小麥中長穗偃麥草的基因
擴(kuò)增、瓊脂糖凝膠電泳法等方法，對長穗偃麥草雜交的幾個組合小麥進(jìn)行了檢測，檢測其抗白粉病基因，并驗證了方法的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性，以期后續(xù)相關(guān)研究提供參考依據(jù)。1 材料與方法1.1 試驗材料本試驗所采用的實驗材料均由中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所提供，具體組合為新春37∕XC（長穗偃麥草雜交后代）10、新春37∕XC31、新春37∕XC351.2 試驗步驟1.2.1 播種 組合新春37∕XC10取63粒種子、新春37∕XC31取15粒、新春37∕XC35取22粒
安徽農(nóng)學(xué)通報 2020年21期2020-11-19
- 3D打印便攜式凝膠電泳裝置用于蛋白質(zhì)的快速檢測
使用。目前,凝膠電泳(GE)技術(shù)是蛋白質(zhì)研究中實現(xiàn)其有效分離的重要技術(shù)手段[14-16]。凝膠電泳技術(shù)以其分辨率高、重復(fù)性好和易操作等優(yōu)點,被廣泛地應(yīng)用于分子生物學(xué)、生物化學(xué)、病理學(xué)和微生物學(xué)等學(xué)科的研究中[17-19]。例如之前研究[20]中設(shè)計的連續(xù)流動凝膠電泳與電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用(GE-ICP-MS)的金屬蛋白質(zhì)在線分析系統(tǒng),其在金屬蛋白質(zhì)的在線分離和檢測方面表現(xiàn)出良好的性能。同時,凝膠電泳技術(shù)對于臨床檢測中蛋白質(zhì)的分離檢測具有重要意義。在資源
色譜 2020年11期2020-09-23
- SDS-PAGE法分析蜂蜜中蛋白質(zhì)組分的條件優(yōu)化
蜜;蛋白質(zhì);凝膠電泳中圖分類號：O658.9;S896.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1003-5168（2020）14-0129-03Study on the Condition Optimization of SDS-PAGE Analysis of Protein Components in HoneyWANG Qin（College of Pharmaceutical Engineering， Chongqing Chemical Industry
河南科技 2020年14期2020-07-07
- “DNA的粗提取與鑒定”實驗的改進(jìn)*
常用的瓊脂糖凝膠電泳鑒定DNA，但考慮到電泳儀及配套顯影裝置價格昂貴，筆者在國內(nèi)、外相關(guān)文獻(xiàn)［3-5］的啟發(fā)下，用生活中常見的材料自制了一套凝膠電泳裝置和凝膠顯影裝置。1.3.1 利用生活中常見的材料，自制凝膠電泳裝置 筆者自制的凝膠電泳裝置（圖1）由大小不同的塑料盒、鋁箔、梳子、鱷魚夾導(dǎo)線及串聯(lián)電池組成：大塑料飯盒相當(dāng)于電泳槽，兩端貼上鋁箔制成電極；小塑料盒相當(dāng)于制膠板，硬紙板裁剪后制成梳子；7 個9 伏鋰電池串聯(lián)后制成電源。圖1 自制凝膠電泳儀1.3.
生物學(xué)通報 2020年4期2020-03-06
- 現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在食品和藥品微生物檢測中的應(yīng)用
效方法。先用凝膠電泳的方法將微生物中的蛋白質(zhì)分離、純化到凝膠膜上，然后再將凝膠膜上的條帶原位轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，最后將膜表面的蛋白質(zhì)再用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行特異性檢驗。最后是流式細(xì)胞術(shù)，該方法能快速精確地測量通過檢測區(qū)液流中細(xì)胞、大分子、乳膠滴等其他粒子，可定量分析細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)抗原，以及對細(xì)胞分子水平的核酸含量的測定，預(yù)示細(xì)胞的生理狀態(tài)。將流式細(xì)胞術(shù)用于檢測食品和藥品微生物檢測中，可以在短期內(nèi)進(jìn)行大體積液體的檢測，時間短、成本低、準(zhǔn)確度高。三、凝膠電泳技
中國食品 2019年4期2019-09-10
- 利用SSR技術(shù)對小麥田間混雜株的初步鑒別
.5%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行初步篩選，選擇擴(kuò)增帶型穩(wěn)定、多態(tài)性豐富、重復(fù)性好的引物作為SSR 引物用于變性聚丙烯酰胺凝膠電泳試驗。1.2.4 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 利用上述SSR篩選引物對濟(jì)麥22、混雜株S1、S2進(jìn)行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳試驗，試驗所涉及的藥品試劑及具體方法參見參考文獻(xiàn)[8]。2 結(jié)果與分析2.1 小麥基因組DNA的提取和檢測本試驗采用CTAB法提取小麥基因組DNA，結(jié)果表明DNA條帶清晰，完整性較好（圖1）。雖然沒有使用RNase對基因組
天津農(nóng)林科技 2019年4期2019-08-26
- 規(guī)模豬場哺乳仔豬混合感染PEDV和PDCoV暴發(fā)腹瀉的綜合防控
FV核酸檢測凝膠電泳圖圖3 PRRSV核酸檢測凝膠電泳圖圖4 PRRSV NADC30株核酸檢測凝膠電泳圖5 PRV核酸檢測凝膠電泳圖圖6 PCV2核酸檢測凝膠電泳圖圖7 PCV3核酸檢測凝膠電泳圖圖8 PEDV核酸檢測凝膠電泳圖圖9 PDCoV核酸檢測凝膠電泳圖采取綜合防措施如下：⑴全群母豬普免中牧股份豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（HB08株＋ZJ08株） （商品名“腹康”）2頭份，15 d后未生產(chǎn)母豬加強(qiáng)免疫2頭份，產(chǎn)房初生仔豬緊急免疫，肌注
中國豬業(yè) 2019年5期2019-07-17
- 牛羊乳粉中摻入大豆蛋白的特征性蛋白組分分析
E聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測牛奶中摻入的豆奶蛋白[5]，而研究從牛、羊乳蛋白和大豆蛋白化學(xué)特性的異同上，通過SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳來區(qū)分乳蛋白和大豆蛋白的特征性蛋白質(zhì)組分，進(jìn)而能定量鑒定大豆蛋白的摻假檢測。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 原料牛、羊乳粉和大豆蛋白粉，購于西安銀橋乳業(yè)集團(tuán)公司。1.1.2 試劑三羥甲基氨基甲烷（Tris）、十二烷基硫酸鈉（SDS）、過硫酸銨（APS）、N,N,N',N'-四甲基乙二胺（TEMED）、丙烯酰胺、甘氨
農(nóng)產(chǎn)品加工 2019年7期2019-05-07
- 豬偽狂犬病病毒PCR-LFD檢測方法的建立及應(yīng)用
物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像儀上觀察并記錄結(jié)果。1.2.2.3 引物濃度的優(yōu)化 經(jīng)上述篩選出最佳退火溫度后，固定反應(yīng)體系其他試劑的添加量，對引物濃度用量設(shè)定為0.5 μL、1 μL、1.5 μL、2 μL，并設(shè)立空白水對照。反應(yīng)結(jié)束，用瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果。1.2.2.4 探針雜交反應(yīng)條件優(yōu)化 PCR反應(yīng)結(jié)束后，開蓋加入1 μL Prv-T-bio(10 μmol/L)，增加一步雜交反應(yīng)，94℃ 30 s，54℃至60℃ 30 s，4℃ 5 min。
動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 2018年11期2018-12-05
- 團(tuán)數(shù)的DNA折紙術(shù)計算模型
成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，凝膠電泳檢測發(fā)夾結(jié)構(gòu)的變化來建立初始數(shù)據(jù)池、刪除非解、讀解.該模型簡單、讀解方便、可行性高.文中提出的計算模型一方面證明了DNA折紙術(shù)可以用來求解組合優(yōu)化問題，另一方面也證明了訂書釘鏈與腳手架鏈的雜交，結(jié)合鏈置換，凝膠電泳從算法的角度是完備的.它不僅拓寬了DNA折紙術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，也為解決組合優(yōu)化問題提供了一種新的思路和方法.1 團(tuán)數(shù)問題圖1 簡單無向圖及其補(bǔ)圖2 團(tuán)數(shù)問題的DNA折紙術(shù)計算模型2.1 腳手架鏈和訂書釘鏈的設(shè)計2.2 團(tuán)的表示圖2
安徽工程大學(xué)學(xué)報 2018年4期2018-12-03
- 農(nóng)作物種子檢測中常用電泳方法的比較分析
方法：瓊脂糖凝膠電泳、小板聚丙烯酰胺凝膠電泳、大板聚丙烯酰胺凝膠電泳和毛細(xì)管電泳。不同的電泳方法適合不同的檢測項目，各方法對實驗儀器、檢測技術(shù)水平、實驗室條件和操作人員的要求也不同。1 四種不同的電泳方法1.1 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是分子檢測中常用的檢測方法，不同濃度的瓊脂糖凝膠（0.3%～1.5%）可以將200bp～50kb的DNA片段分離。當(dāng)用溴化乙啶（EB，熒光嵌入染料）染色，通過凝膠成像系統(tǒng)，能觀察到發(fā)出熒光的DNA條帶，確定DNA片段在凝
中國種業(yè) 2018年11期2018-11-16
- 豬繁殖和呼吸障礙綜合征病毒GP5蛋白的原核表達(dá)
行1%瓊脂糖凝膠電泳。1.3 重組BL21的構(gòu)建及鑒定取2 μL 重組質(zhì)粒pCold-GP5加入到100 μL的BL21，冰浴20 min，42℃熱激90 s;冰浴3 min，加入500 μL LB培養(yǎng)基，37℃孵育30 min后，取100 μL涂布到含有Amp的LB平板，37℃，過夜培養(yǎng)。隨機(jī)挑取6個單克隆，進(jìn)行PCR鑒定。反應(yīng)結(jié)束后，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳。1.4 重組GP5蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定誘導(dǎo)的菌液4 000 rpm離心10 min，
畜禽業(yè) 2018年10期2018-11-02
- 全錯位排列問題的DNA計算模型
DNA計算；凝膠電泳中圖分類號： TP301.6 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A 文章編號： 2095-2457（2018）19-0101-002DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.19.045DNA Computational Model for Error Permutation ProblemHU Juan（The Foundation department of Huainan Vocational Technical
科技視界 2018年19期2018-10-09
- 一種鎳金屬配合物的合成、結(jié)構(gòu)及DNA性質(zhì)研究
親和力.通過凝膠電泳法發(fā)現(xiàn)配合物可以切割超螺旋質(zhì)粒DNA pBR322,表明配合物具有有效的DNA切割能力.1 實驗部分1.1 實驗試劑實驗所需試劑2,2-聯(lián)吡啶-5,5-二羧酸、硝酸鎳等均為化學(xué)純,未經(jīng)進(jìn)一步處理直接使用.去離子水與DMF在實驗中作為溶劑.1.2 實驗儀器Bruker Smart 1000 CCD面探X-射線衍射儀,Perkin-Elmer LS55 熒光光譜儀,JS-Poewr 600 電泳儀,D-MS-1磁力攪拌器.1.3 配合物單晶
沈陽化工大學(xué)學(xué)報 2018年2期2018-07-25
- PCR熒光探針法在Y染色體微缺失檢測中的應(yīng)用
）結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳檢測法，比較2種檢測方法的檢測率和吻合度，探討PCR熒光探針法檢測Y染色體微缺失在臨床上的應(yīng)用價值。1 材料和方法1.1 臨床資料2016年6月至2017年6月到我院就診的208例不育男性患者，年齡23～46歲，平均年齡32.8歲。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（World Health Organiza?tion，WHO）2010年第5版精液分析操作指南將208例患者分為正常精子癥組、無精子癥組和少精子癥組。用multiplex PCR結(jié)合瓊脂糖凝
分子診斷與治療雜志 2018年4期2018-07-21
- 大腸桿菌質(zhì)粒DNA提取方法的研究
.2 瓊脂糖凝膠電泳檢測上述的溶液與EB混合染色進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，電泳后在紫外分析儀下觀察，并且進(jìn)行拍照檢測。2.2 堿裂解法提取大腸桿菌質(zhì)粒DNA2.2.1 DNA提取方法（1）在適當(dāng)?shù)暮股氐?5mL LB培養(yǎng)基中接種單一的大腸桿菌菌落，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長晚期以250r/min培養(yǎng)12-16 h；（2）取4.5mL大腸桿菌菌液以12000r/min離心 9min，棄去上清夜，盡量棄去干凈，可以用小的槍頭移去；（3）再加入100 μl冰預(yù)冷溶液Ⅰ
資源節(jié)約與環(huán)保 2018年6期2018-07-09
- Krüppel樣因子6對于TGF-β1誘導(dǎo)的晶狀體上皮細(xì)胞纖維化的調(diào)控作用研究
產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離，于紫外透射儀下觀察結(jié)果。表1 RT-PCR引物表2 RT-PCR反應(yīng)條件q-PCR：引物選擇見表3。將2μl模板cDNA，2 μl上下游引物的等比混合物，4μl SYBR熒光染料，最終體積8μl，依次加入384孔板（避光冰上操作），每組3個復(fù)孔，實驗重復(fù)3次，放入Real-time PCR儀內(nèi)反應(yīng)，調(diào)整擴(kuò)增參數(shù)為：50℃2 min孵育，95℃10 min變性，重復(fù)40次循環(huán)：95℃15 s變性、55℃30 s退火、72℃30 s延
中國中醫(yī)眼科雜志 2018年1期2018-06-13
- 甜菜SRAP擴(kuò)增產(chǎn)物不同檢測方法的比對研究
用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測[9，13]，一般使用的緩沖液是0．5倍的TBE；另外就是通過瓊脂糖凝膠電泳檢測[15-16]，使用的緩沖液是1倍的TAE。吳則東等人比較了變性聚丙烯酰胺凝膠和非變性聚丙烯酰胺凝膠的區(qū)別，發(fā)現(xiàn)兩者之間差異不大，但非變性聚丙烯酰胺凝膠無論是制膠還是檢測都要比變性聚丙烯酰胺凝膠更加簡單，故推薦非變性聚丙烯酰胺凝膠替代變性聚丙烯酰胺凝膠[22]；目前SRAP分子標(biāo)記在甜菜上一般都是使用非變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行檢測[6，18，20-2
中國糖料 2018年3期2018-01-17
- 大白菜基因組DNA快速提取方法的研究
測1%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的提取質(zhì)量(電泳緩沖液為1×TAE)，GelRed染色，在凝膠成像儀上成像、觀察。1.4 PCR反應(yīng)取不同方法獲得的DNA樣本2 μL進(jìn)行PCR擴(kuò)增。1.4.1 引物 分別為Bra019317、Bra019348、Bra019235-2和Bra019345-2。SSR標(biāo)記為本項目開發(fā)的與本抗源抗根腫病基因連鎖的分子標(biāo)記，引物由華大基因公司合成。1.4.2 PCR反應(yīng)體系 20 μL，包括模板DNA 2 μL，F(xiàn)orward p
華北農(nóng)學(xué)報 2017年6期2018-01-12
- 苯乳酸與單增李斯特菌和大腸桿菌胞內(nèi)外基因組的抑菌作用機(jī)制
752)采用凝膠電泳阻滯實驗法和紫外-可見光譜法研究苯乳酸與胞內(nèi)、胞外基因組DNA的作用機(jī)制。實驗結(jié)果表明苯乳酸與單增李斯特菌和大腸桿菌的胞內(nèi)DNA遷移率和條帶亮度均未發(fā)生變化,無相互作用;苯乳酸對單增李斯特菌和大腸桿菌的胞外DNA發(fā)生結(jié)合作用。單增李斯特菌體外DNA在苯乳酸16～32 mmol/L濃度下,與苯乳酸發(fā)生結(jié)合作用，結(jié)合常數(shù)為9.16×105M-1；大腸桿菌體外DNA在苯乳酸2～16 mmol/L的濃度下,與苯乳酸發(fā)生結(jié)合作用,結(jié)合常數(shù)為7.3
食品工業(yè)科技 2017年23期2017-12-18
- 2012至2016年廣西血紅蛋白組分室間質(zhì)量評價結(jié)果的回顧性分析*
力優(yōu)于瓊脂糖凝膠電泳法。結(jié)論 通過室間質(zhì)量評價考核實驗室檢測HbA2和HbF能力，量化HbA2和HbF指標(biāo)，為地中海貧血篩查和防治工作提供質(zhì)量保證與數(shù)據(jù)支持。地中海貧血；血紅蛋白A2；血紅蛋白F；室間質(zhì)量評價地中海貧血(以下簡稱“地貧”)表型分析指標(biāo)除紅細(xì)胞平均容積(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白量(MCH)外，另一組重要指標(biāo)是血紅蛋白A2(haemoglobin A2，HbA2)和血紅蛋白F(haemoglobin F，HbF)[1]。本研究通過對2012
臨床檢驗雜志 2017年2期2017-03-29
- 毛細(xì)管電泳基因掃描和凝膠電泳異源雙鏈分析在免疫球蛋白/T細(xì)胞受體基因重排檢測中的應(yīng)用研究*
泳基因掃描和凝膠電泳異源雙鏈分析在免疫球蛋白/T細(xì)胞受體基因重排檢測中的應(yīng)用研究*陳杰 鄭可 張文燕 孫林雍 唐源 嚴(yán)嘉琦 趙莎 劉衛(wèi)平(四川大學(xué)華西醫(yī)院病理科， 四川 成都 610041)目的 探討免疫球蛋白輕鏈IgK及T細(xì)胞抗原受體(TCRγ)基因重排更有效的檢測方法。 方法 收集四川大學(xué)華西醫(yī)院病理科2013～2014年淋巴組織增生性病變石蠟樣本共139例，采用BIOMED-2系統(tǒng)擴(kuò)增，分別使用毛細(xì)管電泳基因掃描和凝膠電泳異源雙鏈分析兩種方法進(jìn)行Ig
西部醫(yī)學(xué) 2016年11期2016-12-06
- 陽離子寡肽序列的合成及生物學(xué)研究
——推薦一個針對化學(xué)生物學(xué)專業(yè)學(xué)生的研究型實驗
步通過瓊脂糖凝膠電泳和細(xì)胞內(nèi)吞實驗考察寡肽序列在生物學(xué)研究方面的應(yīng)用。本實驗可以加深學(xué)生對有機(jī)化學(xué)、高分子化學(xué)及生物化學(xué)的理解與運(yùn)用，培養(yǎng)學(xué)生分析問題和解決問題的綜合能力。關(guān)鍵詞：氨基酸；寡肽；多肽；凝膠電泳www.dxhx.pku.edu.cn寡肽是由十種以下具有不同物理和化學(xué)性質(zhì)的天然氨基酸通過肽鍵組成，由十種以上一百種以下氨基酸組成的稱為多肽[1]。寡(多)肽由于其特有的生物活性、生物可降解性和良好的生物相容性而引起生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究的廣泛關(guān)注，尤其在
大學(xué)化學(xué) 2016年3期2016-07-05
- 不同環(huán)境豐富度設(shè)置下豬血清蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析研究
-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析研究席赫岐1，史秀麗2（1.鄭州市第一中學(xué)，河南 鄭州 450052；2.鄭州市電子信息工程學(xué)校）為考察不同環(huán)境豐富度設(shè)置對豬血清蛋白質(zhì)圖譜的影響，以不同環(huán)境豐富度設(shè)置下的豬血清為材料，分別針對豬血清1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8、1∶9、1∶10的稀釋倍數(shù)和12%、10%、8%的分離膠濃度進(jìn)行豬血清蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳參數(shù)優(yōu)化，并對豬血清蛋白質(zhì)圖譜進(jìn)行分析。結(jié)果表明：豬血清的適宜稀釋倍數(shù)為1∶9；
河南畜牧獸醫(yī) 2016年23期2016-02-14
- 質(zhì)粒抽提策略對雙酶切鑒定的影響
切聯(lián)合瓊脂糖凝膠電泳是鑒定DNA重組成功與否的重要方法［1］，瓊脂糖凝膠電泳圖像質(zhì)量直接影響鑒定結(jié)果的判讀、論文發(fā)表。條帶彌散是圖像質(zhì)量不佳的主要表現(xiàn)之一，研究者多將其歸咎于不合理的酶切和不規(guī)范的電泳操作［2］，而很少報道質(zhì)粒抽提策略對彌散的影響。筆者在雙酶切鑒定葡萄糖6-磷酸脫氫酶(glucose 6-phosphate dehydrogenase，G6PD)重組質(zhì)粒pET-28a-G6PD時，發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒抽提策略對雙酶切后瓊脂糖凝膠電泳彌散有顯著影響，現(xiàn)報
山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2015年6期2015-12-16
- 基于DNA計算的最大權(quán)團(tuán)問題設(shè)計
；最大權(quán)團(tuán)；凝膠電泳中圖分類號：TP301.6文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1672-1098（2015）01-0075-03對于給定的無向圖G=（V，E）。如果UV，且對任意u，v∈U有（u，v）∈E，則稱U是G的完全子圖。G的完全子圖U是G的團(tuán)當(dāng)且僅當(dāng)U不包含在G的更大的完全子圖中。G的最大團(tuán)是指G中所含頂點數(shù)最多的團(tuán)。而最大權(quán)團(tuán)，就是指權(quán)值最大的最大團(tuán)。1994年，文獻(xiàn)[1]提出了用DNA分子解決7節(jié)點的Hamilton路徑問題，這是有關(guān)DNA計算的開山之
安徽理工大學(xué)學(xué)報·自然科學(xué)版 2015年1期2015-07-21
- DNA變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的實驗教學(xué)改進(jìn)
性聚丙烯酰胺凝膠電泳的實驗教學(xué)改進(jìn)鮑思元(湖北科技學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院, 湖北 咸寧 437100)DNA變性聚丙烯酰胺凝膠電泳在現(xiàn)代生物技術(shù)中的地位十分重要，但在實驗中，聚丙烯酰胺凝膠電泳的操作難度比較大，影響因素比較多，耗時比較長。為了使DNA變性聚丙烯酰胺凝膠電泳適合于實驗教學(xué)，對聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳技術(shù)相關(guān)操作流程進(jìn)行了研究和探索，對實驗進(jìn)行了改進(jìn)和優(yōu)化。改進(jìn)和優(yōu)化后的實驗操作簡易、詳細(xì)，試劑配方更合理，成功率得到提高，學(xué)生能在4學(xué)時內(nèi)完成，為進(jìn)行
實驗科學(xué)與技術(shù) 2015年2期2015-05-08
- DNA分子標(biāo)記檢測方法及在茶樹中的研究進(jìn)展
同分為瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、毛細(xì)管電泳、高分辨率熔解曲線分析、微流控芯片電泳等。茶樹[Camellia sinensis (L.) O.Kuntze]是一種山茶科山茶屬茶組（Sect. Thea (L.) Dyer in Hook.）的多年生經(jīng)濟(jì)作物。目前應(yīng)用于茶樹研究的分子標(biāo)記有RFLP、RAPD、AFLP、ISSR、SSR、SRAP、SNP等，主要是進(jìn)行茶樹種質(zhì)資源和遺傳育種中的遺傳多樣性、親緣關(guān)系分析、起源與演化、種質(zhì)鑒定、遺傳圖譜構(gòu)建
茶葉學(xué)報 2015年2期2015-02-21
- 改良溴化乙錠染色法快速檢測基因組DNA
長度。瓊脂糖凝膠電泳法；基因組DNA；溴化乙錠基因組DNA提取被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)的許多領(lǐng)域［1］。2003年人類基因組計劃的完成，為人類利用基因組DNA遺傳密碼破解疾病機(jī)制奠定了基礎(chǔ)［2］。成百上千例樣本的病例-對照研究越來越多的被用于篩選疾病相關(guān)候選基因及其變異位點和在基因水平闡明疾病的發(fā)病機(jī)制。這些研究中需要先期進(jìn)行大規(guī)模的樣本基因組DNA提取和檢測工作。長期以來，基因組DNA提取后的檢測是通過瓊脂糖凝膠電泳/溴化乙錠染色法進(jìn)行觀察［3～5］。
中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2015年11期2015-02-13
- Evaluation of the Development of Circular Agriculture in Sichuan Province Based on the Coefficient of Variation
維聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)發(fā)現(xiàn)了10種κ-酪蛋白的異構(gòu)體。Ciavardelli等[14] 利用電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測出牛乳中α-酪蛋白和β-酪蛋白磷酸化位點，使酪蛋白的磷酸化逐漸成為研究酪蛋白蛋白質(zhì)組學(xué)的研究重點[15]。Table 2 Calculation results of evaluation indicators for circular agriculture in Sichuan Province3 Analysis of result
Asian Agricultural Research 2015年3期2015-02-02
- 聚丙烯酰胺凝膠電泳和毛細(xì)管電泳用于淋球菌多位點串聯(lián)重復(fù)序列分型的評估
·聚丙烯酰胺凝膠電泳和毛細(xì)管電泳用于淋球菌多位點串聯(lián)重復(fù)序列分型的評估于瑞星 尹躍平 陳紹椿 戴秀芹 韓燕 張國毅 陳祥生淋球菌是引起淋病的致病菌,淋球菌感染不僅可引起新生兒失明等嚴(yán)重的并發(fā)癥,還能夠加速其他病原體及HIV感染[1]。近年來淋球菌分型方法報道較多,目前最常用的是淋球菌多抗原序列分型(NG-MAST)和多位點序列分型(MLST)分型,但這兩種分型方法費(fèi)用較高,不適合資源匱乏地區(qū)應(yīng)用。多位點串聯(lián)重復(fù)序列分型(multiple-locus var
中華皮膚科雜志 2014年12期2014-12-09
- 全自動毛細(xì)管電泳技術(shù)在篩查地中海貧血中的臨床診斷價值
究應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)和全自動毛細(xì)管電泳技術(shù)對我院收治的380例病例進(jìn)行地中海貧血篩查分析，旨在探討兩種不同技術(shù)在地中海貧血篩查中的診斷價值，現(xiàn)報告如下。1 資料與方法1.1 臨床資料選取2008年9月—2012年4月我院篩查的380例病例作為研究對象，采用PCR基因診斷技術(shù)對全部病例進(jìn)行確診。1.2 方法采集6 ml靜脈血作為標(biāo)本，分裝3個試管，其中1號試管注入已加EDTA-K2的血常規(guī)管中，使血細(xì)胞分析儀(希斯美康XE5000)檢測血常規(guī)。另外2個試
中國實驗診斷學(xué) 2014年4期2014-08-25
- 限制性內(nèi)切酶KpnⅠ和EcoRⅠ雙酶切條件的優(yōu)化
DNA瓊脂糖凝膠電泳儀(Biorad公司)；凝膠成像系統(tǒng)(德國alpha FluorChem HD2)。1.2 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化、提取和測序?qū)⒅亟M質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)DH5α中，在含卡那抗性的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜，次日挑取單個陽性克隆于5 mL卡那抗性的液體LB中，放于37 ℃ 180 r/min的搖床中過夜后，質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒，Nanodrop 2000分光光度計測其濃度和純度，并于上海生工測序。1.3 KpnⅠ和EcoRⅠ分別單酶切pEGFP-
吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報 2014年4期2014-08-17
- 聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測大豆SRAP標(biāo)記
。聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)技術(shù)是一種檢測靈敏度和分辨率都很高的電泳技術(shù)，從聚丙烯酰胺凝膠中得到的DNA 純度很高，特別適合于像SRAP這樣的小DNA 片段的分析(5～500bp)，是分子生物學(xué)、生物工程及基因工程研究方面不可缺少的實驗技術(shù)。因其具有設(shè)備相對簡單，操作比較方便，時間短，樣品量少等特點[6]，近年來被廣泛應(yīng)用于DNA的分析實驗中。本文以大豆為實驗材料，進(jìn)行了大豆的SRAP-PCR擴(kuò)增，并對產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染，建立了一種簡便快
中州大學(xué)學(xué)報 2014年6期2014-08-07
- 在高濃度尿素的存在下采用制備型電泳體系進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳分離腐植酸成分
行聚丙烯酰胺凝膠電泳分離腐植酸成分S.Karim1,2M.Aoyama1著劉毓芳3吳云彬4趙瑞華3張彩鳳4*譯（1 日本弘前大學(xué)農(nóng)業(yè)和生命科學(xué)學(xué)院 弘前 036-85612 日本巖手大學(xué)農(nóng)業(yè)科學(xué)聯(lián)合研究院 盛岡 020-85503 晉中學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院 晉中 03060024 太原師范學(xué)院化學(xué)系 太原 030006)采用制備型電泳體系在高濃度的尿素存在下進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳分離水溶性腐植酸中的不同成分。在聚丙烯酰胺凝膠電泳中，根據(jù)水溶性腐植酸中深色成分分
腐植酸 2014年6期2014-02-21
- 兩種電泳方法血紅蛋白分析一致性的比較
LC瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)(簡稱瓊脂糖凝膠電泳)替代醋酸纖維素薄膜電泳對地中海貧血進(jìn)行篩查。為比較2種電泳方法的一致性，我們進(jìn)行了相關(guān)實驗。材料和方法一、一般資料4126例臨床標(biāo)本來自2009年5月至2011年5月期間橫縣人民醫(yī)院門診和住院患者及其他體檢人員。男1862例，女2264例，年齡5個月～75歲。二、儀器與試劑1.瓊脂糖凝膠電泳 法國Sebia公司生產(chǎn)的Sebia Hydrasys LC全自動瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)及其配套的HYRYS掃描系統(tǒng)，Hb瓊脂
檢驗醫(yī)學(xué) 2013年3期2013-09-11
- 瓊脂糖電泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立
的確定瓊脂糖凝膠電泳中使用核酸染料Goldview的最佳濃度和方法，盡可能減少實驗中Goldview用量，控制其對實驗室環(huán)境的污染。方法配置含不同濃度Goldview的上樣緩沖液，混合不同濃度 DNA溶液的瓊脂糖凝膠電泳，然后對比預(yù)染樣品法、前染法及后染法的染色效果。結(jié)果實驗結(jié)果顯示上樣緩沖液中含0.4% Goldview的預(yù)染樣品法電泳檢測核酸的效果最佳且能檢測的核酸樣品濃度在16.5ng或以上為最佳。結(jié)論核酸染料Goldview在核酸的瓊脂糖凝膠電泳中
遵義醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2012年4期2012-11-14
- 雙向凝膠電泳和二維色譜技術(shù)檢測大腸癌蛋白質(zhì)譜的意義
文擬采用雙向凝膠電泳和二維色譜技術(shù)分析Dukes B期大腸癌腫瘤與癌旁組織蛋白質(zhì)的差異性，為大腸癌的早期診斷、生物學(xué)治療尋找新的靶點。1 材料與方法1.1 組織標(biāo)本 收集吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院手術(shù)治療的大腸癌患者18例，年齡49～78歲，其中男13人，女5人。在手術(shù)中獲得的癌組織均是新鮮標(biāo)本。所獲得的癌旁正常組織均距離癌邊緣10 cm之外、切緣正常組織，并且所取的正常組織標(biāo)本均是在癌組織上端。標(biāo)本離體后立即取材，生理鹽水沖洗，放入液氮冷凍，－80℃保存。病人
中國老年學(xué)雜志 2012年3期2012-08-04
- 引入易錯PCR和DNA-shuffling技術(shù)構(gòu)建單鏈抗體庫
.5%瓊脂糖凝膠電泳判斷RNA完整性，測定濃度，用于反轉(zhuǎn)錄。1.2.2 人VH、VL和Cκ基因的擴(kuò)增:以總RNA為模板，Oligo（dT）15為引物，在反轉(zhuǎn)錄酶作用下反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第1條鏈。以cDNA第1鏈為模板，以不同亞型的重鏈及輕鏈的引物分別擴(kuò)增人重鏈和輕鏈可變區(qū)基因。以Cκ引物擴(kuò)增人恒定區(qū)基因。VH、Vκ擴(kuò)增條件為:預(yù)變性94℃ 5 min;變性94℃30 s，退火69℃ 30 s，延伸72℃ 30 s，共30個循環(huán);延伸72℃ 10 min。V
基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床 2012年1期2012-06-05
- 聚丙烯酰胺凝膠電泳法對導(dǎo)入后代重組個體的檢測
的聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，應(yīng)用于驗證和檢測試材的DNA導(dǎo)入情況，通過觀察導(dǎo)入后代與供體DNA的共同和差異譜帶，來篩選含供體特異DNA譜帶的導(dǎo)入后代。這項技術(shù)的研究是外源遺傳物質(zhì)導(dǎo)入育種技術(shù)不可缺少的一部分。1 試材錦269麥、95109麥、340玉米。2 方法實驗采用無水乙酸鈉—冰乙酸系統(tǒng)進(jìn)行電泳。2.1 制樣將試材種子浸泡2～4 h，按質(zhì)量體積比1：2加入樣品提取液研磨，然后4000 r/min離心15 min，取上清液，100℃水浴3 min，置冰箱中
種子科技 2012年4期2012-01-22
- 脈沖場凝膠電泳實驗中的問題及解決方案
22）脈沖場凝膠電泳實驗中的問題及解決方案陳秋芳1,焦湞1,押輝遠(yuǎn)2（1.鄭州大學(xué)離子束生物工程重點實驗室,河南鄭州 450052；2.洛陽師范學(xué)院,河南洛陽 471022）脈沖場凝膠電泳是分離大分子DNA片段的有效方法.就脈沖場凝膠實驗中遇到的問題及解決方法進(jìn)行了探討,在充分理解實驗原理的基礎(chǔ)上對脈沖場凝膠電泳的實驗條件進(jìn)行優(yōu)化,最終達(dá)到利用脈沖場凝膠電泳得到大分子DNA片段清晰整齊電泳條帶的實驗效果,為后續(xù)實驗奠定了基礎(chǔ).脈沖電泳；大分子DNA；條件優(yōu)
河南科技學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版) 2011年5期2011-01-15
- 轉(zhuǎn)化人參二醇類皂苷為C-K的特異人參皂苷糖苷酶的純化及性質(zhì)
行聚丙烯酰胺凝膠電泳、切割單帶的方法。向預(yù)處理過的DEAE-Cellulose離子交換柱中緩慢加入8 mL粗酶液，分別用0.02 mol/L pH 5.0 NaAc-HAc 緩沖液、0.06、0.12、0.18、0.24、0.30、0.40、0.50、0.60 mol/L KCl溶液各50 mL進(jìn)行梯度洗脫，測定紫外吸光值，分離提純酶蛋白。選取紫外吸光值(OD值)較高的試管，從中取出0.1 mL酶液，以0.1 mL 的0.5%人參皂苷PPD為底物，進(jìn)行酶反
大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報 2010年1期2010-09-26
- 一種新的微衛(wèi)星PAGE的DNA顯帶方法
.3 瓊脂糖凝膠電泳顯帶PCR產(chǎn)物在濃度為1.2%的瓊脂糖凝膠上分離；核酸熒光染料為GelRed，采用前染的方法，將GelRed核酸熒光染料加到溴酚藍(lán)上樣緩沖液中。將4μL PCR產(chǎn)物與2μL含有g(shù)elred的溴酚藍(lán)上樣緩沖液在PCR管中混合均勻，取3μL上樣，80 V電壓下電泳1.5 h。電泳結(jié)束后，將凝膠直接放入上海產(chǎn)FR-200A型全自動紫外與可見分析裝置中進(jìn)行拍照和分析。1.4 改良的微衛(wèi)星PAGE凝膠銀染法顯帶PCR產(chǎn)物在8%（29∶1）聚丙烯酰
湖南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2010年17期2010-06-07
- 牦牛血液銅鋅超氧化物歧化酶cDNA克隆測序
，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測其純度。1.2.2 PCR引物設(shè)計與合成 根據(jù)奶牛Cu/Zn-SOD cDNA序列（序列號：NM 174615），用Primer 5軟件設(shè)計一對PCR引物，上游引物序列為5′-GGCGTCGTTT TCTCTACTTGGT-3′、下游引物序列為 5′-GTGCCACA GAGAATGTTTAT-3′（Ysod1、Ysod2），由四川英駿生物公司合成。擴(kuò)增片段大小為483bp。1.2.3 cDNA第一條鏈合成和PCR擴(kuò)增 以提取的總R
四川畜牧獸醫(yī) 2010年6期2010-05-10