寡核苷酸
- 山核桃寡核苷酸探針開發(fā)及其應用*
的技術瓶頸。寡核苷酸熒光原位雜交技術（oligonucleotide fluorescence in situ hybridization, Oligo-FISH）是一項新的熒光原位雜交技術（fluorescence in situ hybridization,FISH），該技術以長約幾十堿基的單鏈寡核苷酸為探針，可實現對基因組、染色體和特定染色體區(qū)段進行精確鑒定和分析，具有簡單、經濟和高效的特點（Hanet al.，2015；Duet al.，2017；
林業(yè)科學 2023年5期2023-08-09
- 原核生物基于環(huán)寡核苷酸的抗噬菌體免疫系統(tǒng)研究進展*
原核中基于環(huán)寡核苷酸的抗噬菌體免疫系統(tǒng)就是一種新發(fā)現的第二信使介導細胞死亡的抗噬菌體系統(tǒng)。1 原核CBASS的發(fā)現在細菌與病毒（噬菌體）之間的競賽中，噬菌體不斷更新自己的侵染系統(tǒng)攻破細菌的防線，而細菌為防御噬菌體侵染同樣進化出了一系列的防御系統(tǒng)，如眾所周知的CRISPR-Cas，限制性修飾系統(tǒng)等，研究發(fā)現細菌的抗噬菌體系統(tǒng)都傾向于集中在原核生物基因組的“防御島”[3]，根據這種與已知防御系統(tǒng)共域化的特性[4]，目前在細菌中發(fā)現了多個新型的抗噬菌體系統(tǒng)，如B
福建輕紡 2022年2期2023-01-06
- 粗寡核苷酸的純化方法現狀及進展
26601）寡核苷酸是一種20～30個堿基左右的短鏈核苷酸，可以用于DNA 測序、PCR 擴增、基因檢測、反義核苷酸研究等領域。以寡核苷酸為基礎的反義技術是迄今為止實現抑制或消除遺傳信息的最常見和最成功的方法[1]。合成寡核苷酸序列的反義效應在20世紀70年代末首次被Zamecnik 和Stephenson 證明。扎米尼克和斯蒂芬森利用勞斯肉瘤病毒（RSV）35S RNA 的5'端和3'端核苷酸序列，確定了21個重復序列，這些重復序列對病毒整合至關重要。他
化工設計通訊 2022年6期2023-01-02
- 一種提高變體庫多樣性的寡核苷酸設計方法
方法就是從頭寡核苷酸合成策略[9]。從頭寡核苷酸合成策略包含多種具體實現方法。例如合成改組(synthetic shuffling)通過重疊延伸聚合酶鏈式反應組裝簡并寡核苷酸以構建包含不同序列的變體庫[10]?；蚪M裝誘變(gene assembly mutagenesis)使用簡并寡核苷酸來保證目標位置的飽和誘變并通過基因組裝獲得變體庫[9,11]。當模板序列難以隨機化時，基于設計的寡核苷酸組裝(assembly of the designed olig
北京生物醫(yī)學工程 2022年4期2022-08-18
- 植物染色體分子核型技術研究進展
ting)和寡核苷酸熒光原位雜交(oligonucleotide-FISH,Oligo-FISH)技術合成新型探針池的方法，總結其在比較基因組學研究中的應用案例，以期為植物染色體分子核型研究提供參考。1 染色體核型分析染色體核型(karyotype)分析是指一個物種的染色體組在有絲分裂中期的表型，包括染色體數目、長度、著絲點位置、臂比、隨體有無等特征總和，是細胞遺傳學領域最基礎的研究內容[2]。核型分析可以為細胞遺傳分類、物種間親緣關系以及染色體重組研究提
西北農林科技大學學報（自然科學版） 2022年2期2022-02-25
- DNA 合成技術與儀器研發(fā)進展概述
技術2.1 寡核苷酸合成技術概述寡核苷酸(Oligonucleotide)是一類多個相鄰核苷酸殘基以磷酸二酯鍵連接的短鏈核苷酸(包括脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)內的核苷酸)的總稱，其人工化學合成過程是一個多步連續(xù)的反應，目標產物的得率受合成過程中副反應發(fā)生(如脫嘌呤等)的影響。因此，化學合成過程中一般先將不參與反應的基團暫時保護起來，經過一輪縮合反應后再將上一輪被保護基團上的保護基脫除下來，以形成目標磷酸二酯鍵[7]。寡核苷酸化學合成起步于
集成技術 2021年5期2021-10-13
- 人工DNA合成技術：DNA數據存儲的基石
2-13］、寡核苷酸藥物［14］等開發(fā)過程，是這些藥物應用不可或缺的技術手段。在農業(yè)育種上，人工合成DNA可以用于轉基因農作物品種的改造，如將人工改造合成的來源于蘇云金芽孢桿菌殺蟲蛋白Cry的編碼基因轉化到農作物體內［15］，產生了抗蟲棉、抗蟲稻等系列抗蟲品種。在材料領域，基于人工合成DNA制備的DNA納米機器人被報道成功地將凝血酶帶到腫瘤細胞，殺死腫瘤細胞［16］。DNA人工合成技術對合成生物學領域的支撐作用，堪比測序技術對基因組學和精準醫(yī)學領域的貢獻，
合成生物學 2021年3期2021-07-21
- DNA信息存儲中關鍵生化方法的研究
信息的大規(guī)模寡核苷酸文庫造成的影響，重點介紹了現階段為解決DNA信息存儲中的這些問題所采取的DNA分子合成、保存以及擴增方法，論證了這些生化方法對操縱大規(guī)模寡核苷酸文庫的可行性和有效性，最后總結并討論了目前該領域所涉及的生化反應存在以及亟需解決的主要問題。1 合成和均一化方法的優(yōu)化以實現寡核苷酸文庫的均衡性目前DNA合成的方法主要有：芯片合成、柱式合成以及酶促合成［8，33-34］。芯片合成具有可合成任意序列、通量高、成本相對較低等優(yōu)勢［35］；柱式合成具
合成生物學 2021年3期2021-07-21
- 間隔區(qū)寡核苷酸DNA微陣列分型在結核分枝桿菌檢測中的應用
7]和間隔區(qū)寡核苷酸分型(spacer oligonucleotide typing,Spoligotyping)[8-9]被廣泛應用，其中Spoligotyping是公認的MTB一線分型方法。Spoligotyping是以聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)為基礎，檢測MTB基因組中直接重復區(qū)(direct repeat,DR)的基因分型方法，Spoligotyping通過識別間隔子的PCR產物來確定DR是否存在,在
新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報 2021年4期2021-05-18
- DNA合成、組裝與糾錯技術研究進展
率和副反應使寡核苷酸合成長度局限于200～300 nt，難以到達 kb 級的基因長度［6-8］。因此更長片段則需通過組裝技術拼接寡核苷酸片段，直至獲得基因、染色體或基因組長度的DNA［9］。然而，寡核苷酸片段合成和DNA 組裝過程會產生很多錯誤，降低長片段DNA 的正確率。糾錯技術的應用可去除DNA 合成和組裝過程引入的大量錯誤，進而降低正確DNA 片段的篩選與測序成本［10］。本文作者將重點綜述DNA 合成、組裝與糾錯技術相關的研究進展，以此期望促進我國
合成生物學 2020年6期2021-01-21
- 反義寡核苷酸藥物在精準治療中的應用進展及其作用機制
及合成的反義寡核苷酸的治療。本文主要集中討論部分反義寡核苷酸藥物在遺傳疾病中相關的臨床應用及其作用機制。1 反義寡核苷酸藥物對相關疾病治療的作用機制反義寡核苷酸為化學合成的單鏈核苷酸分子，通常為13～30個核酸序列的短片段(故稱為“寡核苷酸”)，這一核酸序列被設計成為與靶向基因序列互補(故稱為“反義”)，通過沃森-克里克(Watson-Crick)堿基配對的方式與特異的RNA序列結合。在生物信息學指導下通過精心設計，使該核苷酸片段對目標RNA具有高度的特異
精準醫(yī)學雜志 2020年4期2020-08-10
- 核轉錄因子Sp1在手術創(chuàng)傷后腹膜組織中的活性改變與腹膜粘連形成關系探討
對Sp1雙鏈寡核苷酸探針進行標記，T4多核苷酸激酶作用下用 ［γ-32P］ATP對其5'端進行標記，經MicroSpinTMG25分離柱純化后對探針放射活性進行測定。②腹膜組織核轉錄因子Sp1的DNA結合活性與特異性檢測：依據加拿大GENEKA公司生產的Sp1 NUSHIFT檢測試劑盒，將 4 μL DNA結合緩沖液 ＋10 μg核蛋白提取物加入0.5 mL Eppendorf管中，在4℃的溫度下進行20 min的孵育，將1 μL已標記寡核苷酸雙鏈探針加入
臨床醫(yī)學工程 2020年4期2020-05-13
- 人工RNA結合骨架的可溶性表達及其與寡核苷酸鏈的相互作用分析
-FAM標記寡核苷酸，通過檢測5′-FAM標記寡核苷酸熒光強度的變化來分析ERBS蛋白與寡核苷酸的相互作用。1 材料和方法1.1 材料Escherichia coliDH5α、BL21（DE3）、Rosetta（DE3）感受態(tài)細胞、pET-24a-CYFP載體均由浙江師范大學化學與生命科學學院細胞實驗室保存；含ERBS基因的載體pUC57-ERBS、寡核苷酸鏈由生工生物工程（上海）股份有限公司合成；限制性核酸內切酶Not I、Sal I、PCR相關試劑、T
山西農業(yè)科學 2020年2期2020-02-29
- 反義寡核苷酸AMO-miR-224在肝癌中的實驗研究
224的反義寡核苷酸(AMO-miR-224)，通過實驗確定AMO-miR-224在肝癌細胞中起到的作用。反義技術基于堿基互補原理，用特定互補的DNA或RNA或其化學修飾產物，阻斷蛋白的轉錄翻譯，使得該基因不能正常表達。本研究假設：miRNA-224可能在SMMC-7721的生長凋亡過程起到重要作用，隨即將反義寡核苷酸轉染進細胞，觀察轉染后腫瘤細胞生物學活性的改變。1 材料與方法1.1材料 細胞株購自中國遼寧師范大學生命科學院；胎牛血清(FBS)購自美國G
國際檢驗醫(yī)學雜志 2020年3期2020-02-14
- 骨肉瘤特異生物診斷探針制備
一想法。而小寡核苷酸DNA或者RNA具有更多的特點：可以自發(fā)卷曲成三維空間結構，可以進行體外化學修飾(連接生物素、氨基、羧基、熒光物質……)，而不改變與配體的結合能力，小寡核苷酸的制備、儲存、運輸及應用比抗體特別是單克隆抗體顯示更多的優(yōu)勢〔1～4〕。蛋白質-核酸可以互相作為配基的理論基礎已被引入細胞膜表面配基的研究。指數富集配體的系統(tǒng)進化(SELEX)技術〔5～7〕的出現為腫瘤標志物的篩選及特異診斷探針研制帶來了新的契機。SELEX技術的基本原理是利用分子
中國老年學雜志 2020年2期2020-02-07
- 南麥號系列小麥品種的染色體結構演變
作用。依賴于寡核苷酸探針的ND-FISH技術，具有方便、快捷和經濟的優(yōu)點[9-11]。利用寡核苷酸探針和ND-FISH 技術，可以反映不同小麥品種(系)的染色體結構差異[12-15]，同時還可以體現同一串聯重復序列的不同區(qū)段在不同染色體上的分布差異[12-13]。因此，利用基于寡核苷酸探針的ND-FISH技術，可以快速、方便地分析小麥親本及其衍生系的染色體結構差異，從而跟蹤親本材料染色體在衍生系中的變異情況，這有助于小麥育種理論的完善和加強。本研究擬利用南
麥類作物學報 2019年5期2019-06-14
- 反義寡核苷酸治療的分子影像技術進展
i治療或反義寡核苷酸治療。反義寡核苷酸治療在許多疾病的治療中具有巨大的潛力，目前研究主要集中在眼類疾病、病毒感染、炎性疾病、基因紊亂和腫瘤[2-5]。但反義寡核苷酸治療藥物在生物體內轉運至靶點發(fā)揮作用過程中也面臨許多障礙[6-7]，并且由于一些不可預期的不良反應，反義寡核苷酸治療還面臨著安全方面的考量[4,8-9]。目前包括光學成像、磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)、單光子發(fā)射計算機斷層顯像(singlephoto
醫(yī)學綜述 2019年3期2019-02-25
- 寡核苷酸藥物及寡核苷酸制備技術研究進展
，人工合成的寡核苷酸已經廣泛應用于靶向基因治療的研究，主要包括反義寡核苷酸(Antisense oligonucleotides, ASODN)、小干擾 RNA(Small interference RNA, siRNA)、轉錄因子誘餌(Decoy)、核酶 (Ribozyme)、脫氧核酶 (DNAzyme)、反基因 (Antigene)、CpG寡核苷酸和核酸適配體(Aptamer) 等。其中ASODN和siRNA是最常用的基因調控工具，獲得廣泛應用，并已被
生物工程學報 2018年5期2018-06-11
- 寡核苷酸探針套涂染結合基因組原位雜交和分子標記分析準確鑒定小麥-百薩偃麥草異源易位系的研究
。最新發(fā)展的寡核苷酸探針套涂染技術可以通過一次FISH準確識別小麥及其親緣植物染色體，不但能揭示不同品種間染色體的多態(tài)性[4-5]，而且還可以不通過GISH分析直接識別我國小麥品種中常見的三種易位系，即T1BL·1RS，T6VS·6AL及相互易位T1RS·7DL和T7DS·1BL[5]，顯示了該技術的簡單、經濟和高效特點。但是，單一的寡核苷酸探針套涂染仍難以準確判斷發(fā)生在小麥和外源染色體常染色質區(qū)或缺少明顯帶紋特征區(qū)段的易位斷點，仍然存在一定的局限性[4-
麥類作物學報 2018年3期2018-05-04
- 核酸適配體篩選方法研究進展*
合成一個單鏈寡核苷酸庫，將之于與靶標物質混合，寡核苷酸鏈與靶標物質結合形成復合物，去除未結合的核酸鏈后，再將結合的核酸分子與靶標物質分離，以此寡核苷酸分子為模板進行PCR擴增，用其產物進行下一個循環(huán)的篩選。經過數次循環(huán)，即可得到能與靶標物質高親和力高特異性結合的核酸適配體分子。本文綜述了SELEX技術篩選核酸適配體技術的一些研究進展。自從上世紀90年代L. Gold 和J.W. Szostak創(chuàng)立了用指數富集的配基系統(tǒng)進化(Systematic evolu
陜西醫(yī)學雜志 2018年3期2018-03-20
- 中英文對照名詞詞匯（二）
（FA）反義寡核苷酸 antisense oligonucleotide（ASO）反轉時間 inversion time（TI）非結核分枝桿菌 nontuberculous Mycobacteria（NTM）非快速眼動睡眠期non?rapid eye movement（NREM）非運動癥狀 non?motor symptoms（NMS）肥厚性硬腦膜炎 hypertrophic pachymeningitis（HP）風疹病毒 rubella virus（RV
中國現代神經疾病雜志 2018年4期2018-01-19
- 外源寡核苷酸對大腸桿菌和雙歧桿菌生長的影響*
200)外源寡核苷酸對大腸桿菌和雙歧桿菌生長的影響*高曉夢1, 2， 蘇 健1， 王曉倩1， 李玉芝1， 孔 青1， 董 平1**， 梁興國1(1. 中國海洋大學食品科學與工程學院，山東 青島 266003； 2. 山東省萊陽市第九中學，山東 煙臺 265200)為研究外源寡核苷酸對2種典型腸道菌—雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)和大腸桿菌(Escherichiacoli)的影響，向核酸營養(yǎng)缺乏型的培養(yǎng)基中分別添加39和6
中國海洋大學學報（自然科學版） 2017年11期2017-10-17
- 基于寡核苷酸探針套painting的小麥“中國春”非整倍體高清核型及應用
子遺傳學基于寡核苷酸探針套painting的小麥“中國春”非整倍體高清核型及應用王丹蕊1杜 培1裴自友2莊麗芳1,*亓增軍1,*1南京農業(yè)大學作物遺傳與種質創(chuàng)新國家重點實驗室, 江蘇南京 210095;2山西省農業(yè)科學院作物科學研究所, 山西太原 030030基于寡核苷酸探針套painting的染色體鑒定技術簡單、經濟和高效, 可以促進小麥品種及親緣物種染色體識別和變異體鑒定, 提高染色體工程效率。我們前期開發(fā)了寡核苷酸探針套, 包含 pAs1-1、pAs
作物學報 2017年11期2017-10-17
- mt01對人牙周膜細胞中成骨細胞相關因子mRNA表達的影響
上，我們選擇寡核苷酸mt01作為促進人牙周膜細胞成骨分化的切入點，分析不同濃度的寡核苷酸mt01對人牙周膜細胞成骨分化的影響，現報道如下。1 對象與方法1.1 對象選擇2015年1月-2016年1月在三門峽口腔醫(yī)院行牙齒正畸時拔除的健康牙齒作為研究對象。1.2 儀器與試劑ODN mt01(大 連 寶 生 物 公 司)；CO2恒溫培養(yǎng)箱(美國NAPCO公司生產)，倒置相差顯微鏡(日本Olympus公司生產)胰蛋白酶(美國Sigma公司生產)；磷酸鹽緩沖液(自
中國實驗診斷學 2017年8期2017-09-03
- 不同端粒片段通過沉默信息調節(jié)因子1/抑癌基因P53促進血管平滑肌細胞凋亡
研究不同端粒寡核苷酸序列對大鼠胸大動脈平滑肌細胞（A7R5） 凋亡的影響，及沉默信息調節(jié)因子1（SIRT1）/抑癌基因P53（P53）信號通路是否參與調控端粒寡核苷酸序列誘導A7R5的凋亡。方法：將三種端粒重復序列端粒寡核苷酸序列的二聚體、四聚體、六聚體[TE-12（TTAGGG）2、TE-24（TTAGGG）4、TE-36（TTAGGG）6]轉染至A7R5，分別作為TE-12組、TE-24組、TE-36組，另設A7R5空白為陰性對照組。應用流式細胞儀檢測
中國循環(huán)雜志 2017年6期2017-06-27
- 磁性載藥微球聯合反義寡核苷酸對人胰腺癌裸鼠模型的療效觀察
微球聯合反義寡核苷酸對人胰腺癌裸鼠模型的療效觀察趙會庚 權廣前 潘耀振 尹家俊目的 探討輻射促細胞轉染的多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)基因mdr1反義寡核苷酸(ASON)聯合5-氟尿嘧啶磁性載藥微球(PEG-5-FU-MAMS)治療裸鼠人胰腺癌的效果。方法 通過構建裸鼠人胰腺癌耐藥腫瘤模型基礎上，腫瘤局部以2 Gy60Coγ輻射，瘤內注射陽性脂質體介導的mdr1反義寡核苷酸(ASON)，經磁導下利用磁性載藥微球(PEG-5-M
實用癌癥雜志 2017年2期2017-03-08
- miR-497靶向Bcl-2調控肝癌細胞增殖及凋亡的研究
ics及對照寡核苷酸，采用RT-PCR、Western blot檢測組織中miR-497及Bcl-2蛋白表達，采用MTT法檢測各組細胞增殖活性，采用流式細胞儀檢測各組細胞凋亡，采用雙熒光素酶報告基因檢測細胞熒光酶活性。結果：1）與遠癌正常組織相比，肝癌組織中miR-497表達明顯降低（P＜0.05），Bcl-2蛋白表達明顯增高（P＜0.05）；2）與轉染對照寡核苷酸相比，轉染miR-497可使HepG2中miR-497表達增高（P＜0.05），Bcl-2蛋
中國腫瘤臨床 2016年16期2016-09-19
- 利用嗎啉代寡核苷酸技術下調早期斑馬魚胚胎lmna基因的初步研究
?利用嗎啉代寡核苷酸技術下調早期斑馬魚胚胎lmna基因的初步研究劉豐1,2，黃慧敏1,2,3，王志華1,2，吳西軍2，何志旭1,2,3，舒莉萍1,2,4(1. 貴州醫(yī)科大學免疫學教研室，貴陽，貴州550004；2. 貴州醫(yī)科大學組織工程與干細胞實驗中心，貴陽，貴州550004；3. 貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院兒科學教研室，貴陽，貴州550004；4. 貴州醫(yī)科大學實驗動物中心，貴陽，貴州550004)目的利用嗎啉代寡核苷酸技術建立下調斑馬魚lmna基因的技術方法
中國比較醫(yī)學雜志 2016年8期2016-09-13
- L-核糖的生物合成及其在藥物中的應用
、糖綴合物、寡核苷酸中的應用進展。關鍵詞：L-核糖；生物合成；L-核苷類藥物；糖綴合物；寡核苷酸核糖是一種典型的五碳糖，是與生物遺傳相關的重要稀少糖類，其在生理上具有十分特殊的作用，是各種核糖核酸、核苷酸輔酶、ATP及NADP的組成成分。L-核糖是D-核糖的手性對映異構體，在自然界中并不存在，一般只能通過合成的方法得到[1]，其分子結構見圖1。圖1 L-核糖的分子結構1 The molecular structure of L-ribose合成L-核糖屬于
化學與生物工程 2016年7期2016-08-10
- 反相離子對色譜法對寡核苷酸藥物分析的進展
子對色譜法對寡核苷酸藥物分析的進展楊洪淼，范慧紅Δ(中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)寡核苷酸藥物是近年來藥物研發(fā)領域中的熱點之一，相應分析方法的研究也被廣泛開展，其中反相離子對色譜法以分離度高、易與MS對接等優(yōu)勢成為寡核苷酸分析中最常用的方法。本文綜述了反相離子對色譜法在寡核苷酸分析方面的新進展，以下將從色譜柱、流動相，分離規(guī)律的探索，MS檢測器方面進行系統(tǒng)介紹。離子對試劑；高效液相色譜；寡核苷酸藥物；綜述寡核苷酸藥物是指含有10～30個堿基的
中國生化藥物雜志 2015年7期2015-07-07
- 核因子-κB通路在潰瘍性結腸炎治療中的應用
3.1 反義寡核苷酸反義寡核苷酸（ASON）是一段人工合成的短鏈核酸（有15～25個核苷酸），其堿基順序與特定靶mRNA或靶DNA互補，可特異性抑制或阻止該基因的轉錄及表達，故又被形象地稱為“基因封條”。已有許多研究證實，UC患者腸黏膜組織中以NF-κB的亞單位p65為主，在調控靶基因轉錄方面發(fā)揮關鍵作用［11］。因此，采用 NF-κB p65 ASON抑制或封閉NF-κB p65 mRNA的表達，使p65蛋白合成減少，NF-κB的活性下降，從而使細胞因子
國際消化病雜志 2015年4期2015-03-20
- 應用通用寡核苷酸芯片技術檢測病原菌的研究
待檢細菌制備寡核苷酸芯片，根據雜交條件進行摸索，然后重新確立寡核苷酸芯片，通過結果的相似性來判斷樣本的種類。檢測中利用通用引物SUA和GO7B對涉及40多個進行擴增和標記后，針對不同的種、屬的混合模式，增加它們相互之間的分辨能力，同樣樣品中存在多個菌種時也可檢測出來，并為臨床診斷提供依據。綜合比較，該項檢測技術具有良好的使用價值。【文獻標識碼】B【文章編號】1674-9308（2015）06-0170-02doi：10.3969/j.issn.1674-9
中國繼續(xù)醫(yī)學教育 2015年6期2015-01-31
- 人慢性粒細胞白血病bcr-abl基因反義寡核苷酸對K562細胞株的凋亡誘導作用研究
bl基因反義寡核苷酸對K562細胞株的凋亡誘導作用研究平娟1，趙娜2，王保全1，申智慧2，陰明星2，龐曉斌3，陳傳波11.河南大學淮河臨床學院，河南 開封475001；2.鄭州大學附屬腫瘤醫(yī)院血液科，河南 鄭州 450009；3.河南大學藥學院化學生物學實驗室，河南 開封 475004背景與目的：隨著人類基因組計劃的完成，人們的研究重點已轉向基因功能的研究，反義核酸技術無疑為這項宏偉工程提供了一個新的發(fā)展方向。目前，國內關于反義寡核苷酸誘導K562細胞凋亡
中國癌癥雜志 2015年3期2015-01-04
- 通過CRISPR/Cas9系統(tǒng)敲除人源PDE10A基因
成sgRNA寡核苷酸序列，并克隆進PX330質粒中。將克隆正確的質粒PX330-sgRNA轉染至HEK293T細胞中，提取基因組DNA并對敲除位點附近的DNA片段進行PCR擴增，再通過SURVEYOR分析和一代測序對敲除效率進行檢測。最后采用有限稀釋法挑選穩(wěn)定敲除PDE10A的HEK 293T細胞株。結果目的sgRNA 寡核苷酸雙鏈成功插入PX330質粒中且序列正確；靶向Exon 7的sgRNA可成功敲除PDE10A，且敲除效率高達31.4%；穩(wěn)定敲除PD
基礎醫(yī)學與臨床 2014年4期2014-11-27
- 用于寡核苷酸二級結構預測的熱力學數據庫研究進展
可靠性依賴于寡核苷酸分子與其靶點結合的高穩(wěn)定性與特異性，而分析這種結合特性的關鍵在于寡核苷酸與靶分子結合的二級結構的精確預測，否則會導致假陰性或假陽性的檢測結果［1－4］。已有研究顯示最近鄰模型(Nearest-Neighbor Model，簡稱NN model)是預測寡核苷酸二級結構最可靠的熱力學計算方法［5］，該模型指出一個給定堿基對的穩(wěn)定性依賴于其臨近堿基對的穩(wěn)定性。其基本思想是將核酸分子結合過程中的標準焓變和熵變計算轉化為由A、T、G、C所形成的1
生物信息學 2014年3期2014-11-14
- VEGF-C在宮頸癌細胞的表達及其與細胞黏附和侵襲的關系
VEGF-C寡核苷酸鏈：5’-CCCAGCCTTCCAGCTCCTTG-3’，兩端各3個堿基進行硫代修飾，目標核苷酸232～251，在5’端標記FITC，隨機鏈序列為：5’-CAGCTCCTGTCCAGCCTCTC-3’，兩端各3個堿基進行硫代修飾；陽離子脂質體LipofectamineTM2000(Invitrogen公司，系尹如鐵副教授惠贈)；Transwell小室(3428型，孔徑8um，Corning-Costar公司),VEGF-C及內參照GAP
延安大學學報(醫(yī)學科學版) 2014年2期2014-09-12
- 小分子干擾RNA和反義寡核苷酸技術的比較及其應用意義
RNA和反義寡核苷酸技術在不同方面的比較和實際應用意義,找到兩者的優(yōu)勢點。1 RNA干擾與反義寡核苷酸技術概念分析RNA干擾是指因為目標mRNA降解,以及抑制所導致的轉錄后基因沉默。其具有21-23個堿基的單鏈,也就是所謂的小分子干擾RNA,可以利用RNA干擾,有效,特異地間隔體內同源基因表達,促進同源mRNA降解,使細胞體現出獨特的基因匱乏的類型。隨著社會的發(fā)展,人們逐漸在秀麗隱桿線蟲,以及哺乳動物細胞等等中表明這種RNAi現象。一些專家在秀麗隱桿線蟲基
生物技術世界 2014年7期2014-08-15
- 硫代磷酸化修飾的反義TGF-β1寡核苷酸抑制血管損傷后內膜增殖*
法1 反義寡核苷酸的設計及合成應用Wilbar-Lipman方法，尋找出大鼠TGF-β1的cDNA序列[4]，在跨過cDNA序列的起始密碼區(qū)ATG范圍內，設計包含有15個堿基、無修飾或硫代磷酸化修飾的反義TGF-β1寡核苷酸，同時設計與此反義寡核苷酸相對應的、作為對照的正義寡核苷酸(與反義寡核苷酸互補)，無修飾的寡核苷酸應用于離體的細胞培養(yǎng)實驗，而硫代磷酸化修飾的寡核苷酸則用于在體治療實驗。具體如下：反義 TGF-β1(AS TGF-β1): 5’-CG
中國病理生理雜志 2014年8期2014-08-09
- miR-155種子序列的反義寡核苷酸對抗多發(fā)性骨髓瘤的作用*
法1 反義寡核苷酸的設計與合成從microRNA Families數據庫中獲取人miR-155的種子序列，根據序列互補原理設計針對種子序列的反義寡核苷酸序列(t-antimiR-155)，并采用BLAST軟件分析確定其反義寡核苷酸序列及隨機對照序列，見圖1。Figure 1. The sequences of miR-155 and t-antimiR-155.2 主要試劑MTT和DMSO購自Sigma；胎牛血清及RPMI-1640培養(yǎng)基購自Gibco；
中國病理生理雜志 2014年8期2014-08-09
- AP-1 和Smad3 雙功能誘騙寡核苷酸對L929 成纖維細胞增殖及纖維化介質表達的影響
的雙功能誘騙寡核苷酸轉染L929 成纖維細胞，競爭抑制活化AP-1 和Smad3 與啟動子區(qū)域的結合位點結合，進而抑制了L929 成纖維細胞的生長、增殖，旨在為進一步研發(fā)并制備治療病理性瘢痕和組織纖維化疾病的藥物奠定基礎。材料與方法1.材料:L929 成纖維細胞購自ATCC。脂質體轉染試劑LipofectamineTM2000(美國Invirtogen 公司)，96 孔酶聯板(美國Active Motif 公司的TransAMTMTranscription
醫(yī)學研究雜志 2014年3期2014-01-16
- 基因合成技術研究進展
方法是以短鏈寡核苷酸作為原料，經拼接組裝得到長鏈DNA[2-6]。柱式合成是寡核苷酸的常規(guī)來源，以多孔玻璃(Controlled pore glass，CPG)或聚苯乙烯(Polystyrene，PS)作為固相載體，微升級體積的化學試劑和溶劑通過抽壓流穿合成柱，經脫保護、偶聯、封閉和氧化四步反應循環(huán)，使核苷酸單體不斷加成到增長的寡核苷酸鏈上[7-8]。近幾十年來，商品化的DNA合成儀普遍采用這種固相亞磷酰胺三酯法 (Phosphoramidite chem
生物工程學報 2013年8期2013-09-04
- MicroRNA-29 a對血管平滑肌細胞增殖和遷移的影響
29 a反義寡核苷酸(上海生工);兔抗鼠PCNA抗體、兔抗鼠 MMP-9、MMP-2抗體、小鼠抗β-actin單克隆抗體、PCR試劑盒、HRP標記山羊抗小鼠二抗(北京中杉金橋公司)。1.2 細胞培養(yǎng)及轉染 選取100～180 g雄性 SD大鼠，取胸腹主動脈血管中膜，用貼塊法分離、培養(yǎng) VSMC。細胞在含10%FBS的DMEM中生長至匯合后，0.25%胰蛋白酶消化傳代，取3～6代細胞進行實驗。MicroRNA-29 a反義寡核苷酸轉染按照lipofectam
中國老年學雜志 2013年5期2013-08-22
- 端粒酶反義寡聚脫氧核苷酸對子宮內膜癌細胞株的影響
析顯示，反義寡核苷酸在細胞進入DNA合成期前引起DNA損傷，使細胞停滯在G0～G1期，并誘導細胞凋亡。結論端粒酶反義寡聚脫氧核苷酸能抑制端粒酶活性，誘導子宮內膜癌細胞凋亡，從而抑制子宮內膜癌的增殖。端粒酶;子宮內膜癌細胞;反義寡聚脫氧核苷酸;凋亡近年來子宮內膜癌發(fā)病率占全世界常見惡性腫瘤的第七位，為女性生殖道惡性腫瘤之一。隨著生活方式的改變，發(fā)病率在世界范圍內呈上升趨勢，有研究表明，95%的子宮內膜癌組織的端粒酶陽性［1］，端粒酶子宮內膜癌中高表達，而在大
河北醫(yī)藥 2012年17期2012-12-28
- 反義寡核苷酸對血管瘤內皮細胞VEGF表達的影響＊
－2］。反義寡核苷酸（AS－ODN）藥物是一類作為腫瘤基因治療的較有前途的新型藥物［3－4］。筆者前期研究發(fā)現，應用VEGF AS－ODN能顯著抑制皮膚血管瘤內皮細胞的增殖［5］。為了進一步研究其作用機制，本研究將采用RT－PCR 法和ELISA 法檢測血管內皮生長因子反義寡核苷酸（VEGF AS－ODN）作用后皮膚血管瘤內皮細胞VEGF mRNA 的表達及培養(yǎng)上清液中VEGF 蛋白分泌的改變，以期為皮膚血管瘤的發(fā)病機制和臨床治療提供新的思路。1 材料與方
華中科技大學學報（醫(yī)學版） 2012年3期2012-12-23
- miR-125b在兒童AML中的表達及其反義寡核苷酸對白血病細胞的作用*
表達及其反義寡核苷酸對白血病細胞的作用*劉曉丹1， 徐 令2△， 檀衛(wèi)平3， 顏慕霞2(中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院1醫(yī)學研究中心，3兒科, 廣東 廣州 510120；2廣州市婦女兒童醫(yī)療中心血液科，廣東 廣州 510623)目的研究兒童急性髓細胞白血病(AML)患者骨髓細胞中miR-125b的表達及miR-125b為靶標的反義寡核苷酸對人白血病細胞的作用。方法采用基因芯片和實時熒光定量PCR技術(qRT-PCR)檢測兒童AML治療前后骨髓細胞中miR-125b
中國病理生理雜志 2012年4期2012-11-06
- p73基因表達模式對于HeLa細胞萘醌類化療藥物敏感性的影響
)特異性反義寡核苷酸干預HeLa細胞內p73基因表達模式，以RT-PCR法驗證干預效果，同時觀察細胞對于DDN藥物敏感性的變化；運用MTT和TUNEL法分別檢測在DDN藥物作用下細胞活力以及凋亡指數(apoptosis index，AI)的變化情況。結果：TAp73特異性反義寡核苷酸特異性阻遏細胞TAp73的表達、下調TAp73/DNp73(dominant negative p73)表達比，從而明顯降低HeLa細胞對于DDN的敏感性，導致該藥物抑制細胞增
中國癌癥雜志 2012年2期2012-05-28
- hTERT反義寡核苷酸對子宮內膜癌細胞增殖的影響
TERT反義寡核苷酸對子宮內膜癌細胞增殖的影響楊蓉娟，許艷蕾，劉雪芹，魏麗莉（河北省石家莊市第四醫(yī)院婦產科，河北石家莊 050011）目的探討人端粒酶催化亞基（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）反義寡核苷酸對子宮內膜癌細胞增殖的影響。方法反義寡核苷酸轉染ishikawa細胞系，采用TRAP-ELISA法檢測轉染后細胞端粒酶的活性，觀察其前后的變化。MTT法檢測細胞活性，流式細胞儀觀察細胞周期及細胞凋亡
河北醫(yī)科大學學報 2012年7期2012-05-09
- HIV－P24核酸適配體的篩選
X技術從隨機寡核苷酸庫中篩選與HIV-P24結合的寡核苷酸，利用凝膠阻滯實驗鑒定第12輪篩選到的寡核苷酸與HIV-P24的結合，再用Dot-blot法篩選出與HIV-P24結合的核酸適配體，并檢測核酸適配體識別HIV-P24的特異性。結果 Dot-blot篩選到5條與HIV-P24有較強結合能力的核酸適配體，且均為不同的序列。特異性檢測顯示，18和26號配體只與HIV-P24特異性結合，而與人血清白蛋白、牛血清白蛋白和脫脂奶粉均無明顯結合。結論 成功篩選到
基礎醫(yī)學與臨床 2012年9期2012-01-11
- ANGPTL3反義寡核苷酸對EC9706細胞侵襲黏附能力的影響*
鍵一步。反義寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide，ASODN)技術能夠干預腫瘤的生物學行為，逐漸成為腫瘤基礎和臨床研究的熱點。該實驗通過應用ASODN技術，研究血管生成素樣蛋白3(angiopoietin-like protein 3，ANGPTL3)對食管癌細胞EC9706侵襲黏附能力的影響，探討ANGPTL3 ASODN對食管癌浸潤轉移生物學行為的影響。1 材料與方法1.1 實驗材料與儀器 EC9706細胞購自中國科學
鄭州大學學報（醫(yī)學版） 2011年5期2011-09-18
- 端粒酶抑制劑在惡性腫瘤治療中的作用
質包括：反義寡核苷酸，逆轉錄抑制劑，G-四連體穩(wěn)定劑，蛋白激酶C抑制劑，化療藥物。1 反義寡核苷酸(antisense oligodexoynuclectide，ASODN)反義寡核苷酸能夠與靶RNA或DNA特異性互補，能夠使得惡性腫瘤細胞端粒酶活性降低，進而其增殖能力下降，甚至調亡。應用這一原理，人工的合成針對模板序列的反義核苷酸抑制劑在研究中已取得很大突破。例如 Mete等［2］使用硫代反義核苷酸(PAS-ODN)對Burkitt's瘤中淋巴瘤細胞系O
中國實用醫(yī)藥 2011年28期2011-08-15
- 小窩蛋白-1反義寡核苷酸在AVP誘導大鼠心肌成纖維細胞增殖erk1/2信號轉導中的作用及辛伐他汀的干預效應
cav1反義寡核苷酸設計及處理 根據大鼠cav1的腳手架域cDNA序列設計反義、正義及錯配寡核苷酸，序列運用Blast程序在GenBank數據庫進行同源性檢索，無同源序列。由上海生工有限公司合成，聚丙烯酰胺凝膠電泳純化，寡核苷酸分子兩端堿基均行硫代修飾，反義寡核苷酸序列如下〔6〕:5'-AAA CTG TGT GTC CCT TCT GG-3'，所有堿基均以硫代磷酸基修飾，并以該序列的錯義寡核苷酸為對照(錯義序列5'-AAA CAG TCT GAC CGT
中國老年學雜志 2011年15期2011-08-02
- 核酸治療的靶向性傳遞
30062)寡核苷酸包括反義核酸和干擾RNA等，它們能夠為多種疾病提供快速、特異性的治療，具有很高的應用潛力。然而這些分子能否有效地傳遞到特定的細胞和組織對于最終的臨床應用非常關鍵。靶向性的傳遞能夠提高寡核苷酸藥物的特異性和使用效率，使藥物分子能有效到達作用位點，進而發(fā)揮它們的治療效果。一些基于不同平臺的靶向性配體傳遞策略已經形成，并能夠很好的發(fā)揮其生物學活性。本文針對當前該研究領域的進展提供一個概述。AS-ODNs;siRNA;靶向性傳遞寡核苷酸(Oli
中國比較醫(yī)學雜志 2011年3期2011-02-11
- LC/MS技術在寡核苷酸類藥物生物樣品定量分析和代謝物鑒定中的應用
/MS技術在寡核苷酸類藥物生物樣品定量分析和代謝物鑒定中的應用鄧 泮,鐘大放,陳笑艷(中國科學院上海藥物研究所,上海 201203)寡核苷酸是藥物發(fā)展的新領域,這類藥物是人工合成的DNA或RNA片段,一般由15～50個核苷酸組成,其藥動學研究的經典方法是酶聯免疫法,但由于該方法的建立耗時、耗資,因此成為新藥研發(fā)的瓶頸。液相色譜-質譜(LC/MS)聯用技術在寡核苷酸類藥物生物分析中面臨的主要問題有:待測物離子化效率低、基質效應嚴重、色譜分離條件與質譜不易兼容
質譜學報 2011年1期2011-02-02
- 結核分支桿菌鏈霉素耐藥基因的雜交檢測
用 PCR-寡核苷酸探針反相斑點雜交技術檢測了 55株肺結核患者痰標本臨床分離株,并對 25例結核患者痰標本直接進行 rpsL基因、rrs基因突變檢測,現將結果報告如下。1 材料與方法1.1 材料 23例敏感株和32例耐 SM或含耐SM的臨床分離株來自本所。25例耐 SM或含耐SM的肺結核患者痰標本來自本院住院結核患者。按結核病診斷細菌學規(guī)程進行菌種鑒定及藥敏實驗證實為結核分支桿菌并對鏈霉素耐藥。1.2 方法1.2.1 細菌 DNA的制備[3]臨床分離株
中國實用醫(yī)藥 2010年10期2010-09-17
- 核仁素對LPS誘導的白細胞介素1β釋放的影響*
因轉染、反義寡核苷酸技術從正反兩方面深入探討核仁素對LPS所致細胞炎癥因子分泌的影響，從而為進一步探討核仁素在炎癥反應中的作用奠定基礎。材料和方法1 材料BALB/c小鼠由本校實驗動物中心提供。正常RAW264.7細胞 (小鼠巨噬細胞)，貼壁生長，由本校細胞中心提供。pcDNA3.1－C23真核表達載體由本科室王海云碩士構建。鼠抗核仁素單克隆抗體購于Santa Cruz;GAPDH小鼠單克隆抗體購于中國康成公司;鼠IL－1β ELISA試劑盒購于Boste
中國病理生理雜志 2010年9期2010-08-02
- 脂質體介導的 VEGF-C反義寡核苷酸對肺癌微淋巴管生成的影響
GF-C反義寡核苷酸對肺癌細胞VEGF-C表達水平和種植瘤內微淋巴管生成的影響,來尋找肺癌基因治療新方法。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 細胞及動物 肺癌 A549細胞株由山東大學齊魯醫(yī)院胸外科胡國強教授惠贈,生長特性為貼壁生長,傳代培養(yǎng)。4～6周齡雌性 BALB/C系裸鼠 30只,購自上海斯萊克實驗動物有限公司。1.1.2 主要試劑 RPMI1640培養(yǎng)基購自 GIBCO公司,胎牛血清系杭州四季青產品。全硫代磷酸化修飾的寡核苷酸均由上海生工公司合成
中國老年學雜志 2010年12期2010-05-31
- 靶向TLR9含非甲基化CpG寡核苷酸片段的合成及篩選
酰(CpG)寡核苷酸片段,用于阻斷SLE患者外周血單一核細胞上的TLR9,觀察該片段能否使SLE患者機體減少甚至不產生致病性抗dsDNA抗體。1 材料與方法1.1 主要試劑 RPMI 1640、胎牛血清,小牛胸腺DNA(nCTDNA)、Protein Detector TMELISA試劑盒。1.2 含非甲基化CpG寡核苷酸片段的設計及合成設計含非甲基化CpG的寡核苷酸片段(擬合成的寡核苷酸序列為Cp GODN(5′-TCCATCACGTTCCTGATGCT
山東醫(yī)藥 2010年46期2010-04-13
- CTGF反義寡核苷酸對體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞轉分化的影響
CTGF反義寡核苷酸對體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞轉分化的影響莊 華 徐國興 白 月 謝茂松 郭 健 王婷婷 胡建章福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院,福建省眼科研究所目的：研究結締組織生長因子(connective tissue growth factor, CTGF)反義寡核苷酸對體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞(human lens epithelial cells, HLECs)合成CTGF與а-SMA表達的影響。方法：測算CTGF反義寡核苷酸對體外培養(yǎng)HLECs的轉染
海峽科學 2010年5期2010-01-07