陳 羽,丁利偉,齊秀蘭

(沈陽藥科大學(xué)高等職業(yè)技術(shù)學(xué)院,遼寧沈陽 110026)

隨著人們對(duì)消毒重要性認(rèn)識(shí)的逐步提高,消毒藥物的使用越來越廣泛,但消毒效果與選用消毒劑的種類有著密切的關(guān)系。近年來,國內(nèi)外均致力于尋求高效、廣譜、快速的殺菌消毒劑[1]。洗必泰具有極強(qiáng)的廣譜抑菌、殺菌作用且毒性低,在生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛。其主要作用機(jī)制是破壞病原微生物細(xì)胞壁原生質(zhì)膜,快速殺死革蘭陽性菌、陰性菌、細(xì)菌芽胞、真菌及病毒等[2]。由于洗必泰的長期使用,相隨而來的是細(xì)菌對(duì)其耐藥性的增加,因此單純的洗必泰產(chǎn)品并不多見,一般是洗必泰的復(fù)配產(chǎn)品。新潔爾滅是一種季胺鹽類陽離子表面活性劑,具有穿透力強(qiáng)、作用快、無刺激性等特點(diǎn)。其主要作用機(jī)制是改變菌體細(xì)胞壁的通透性,使細(xì)菌喪失攝取營養(yǎng)物質(zhì)的能力,并抑制菌體的代謝及許多酶系統(tǒng)的活力[3]。新潔爾滅對(duì)許多芽胞型致病菌、革蘭陽性菌及霉菌具有強(qiáng)大的廣譜殺菌作用,但對(duì)革蘭陰性桿菌及腸道病毒卻作用較弱。鑒于洗必泰和新潔爾滅皆屬于常用的消毒劑,但單獨(dú)使用時(shí),其消毒效果往往受到微生物的種類、溫度、濃度和pH值等因素的影響。本文對(duì)洗必泰與新潔爾滅復(fù)合消毒劑的協(xié)同殺菌效果進(jìn)行了考察,以便為生活中物體表面消毒尋找理想復(fù)合消毒劑提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus ATCC 6538)、大腸埃希菌(Escherichia coli 8099)、白色念珠菌(CanidiaalbicansATCC 10231)由沈陽藥科大學(xué)微生物學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)教研室提供。

1.1.2 培養(yǎng)基(g/L) ①營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨10.0,牛肉膏5.0,氯化鈉5.0,瓊脂粉14.0;②沙堡瓊脂培養(yǎng)基：葡萄糖40.0,蛋白胨10.0,瓊脂粉14.0。

1.1.3 緩沖液(g/L) 標(biāo)準(zhǔn)硬水：氯化鈣0.304,氯化鎂0.139,用來配置待檢消毒劑;磷酸鹽緩沖液：無水磷酸氫二鈉2.83,磷酸二氫鉀1.36,pH 7.2;中和劑：硫代硫酸鈉5.0,溶解于磷酸鹽緩沖液中,起中和消毒劑的殺菌作用。

1.2 方法

1.2.1 菌懸液的制備 取5.0 mL磷酸鹽緩沖液加入已經(jīng)活化3代的新鮮斜面培養(yǎng)物試管內(nèi),反復(fù)吹吸,洗下菌苔。用移液管將洗液移至另一無菌試管中,用渦旋混合器振蕩20 s,使菌體懸浮均勻。初步制成的菌懸液,先用比濁測定法粗測其含菌濃度,然后用磷酸鹽緩沖液稀釋至1×1011～5×1011cfu/L之間。懸液可保存于4℃冰箱備用,當(dāng)天使用不得過夜。菌懸液在使用時(shí),應(yīng)先進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

1.2.2 消毒液的配置 取0.1 mL洗必泰、0.1 mL新潔爾滅和0.1 mL洗必泰+0.1 mL新潔爾滅,分別加入內(nèi)裝100 mL標(biāo)準(zhǔn)硬水的三角瓶中,混勻,即得0.1%洗必泰、0.1%新潔爾滅以及0.1%洗必泰+0.1%新潔爾滅復(fù)合消毒液。

1.2.3 中和劑的考察試驗(yàn) 設(shè)平行8組試驗(yàn),以S.aureusATCC 6538為試驗(yàn)菌,按懸液定量殺菌試驗(yàn)程序進(jìn)行[4]。a：消毒液+菌懸液,b：(消毒液+菌懸液)+中和劑,c：中和劑+菌懸液,d：(消毒液+中和劑)+菌懸液,e：磷酸鹽緩沖液+菌懸液(正常菌對(duì)照),f：磷酸鹽緩沖液,g：中和劑,h：培養(yǎng)基。中和劑及其濃度的判定標(biāo)準(zhǔn)：a組不長菌或僅有極少數(shù)菌落生長;b組有菌落生長,較a組為多,但較c、d、e組為少;c、d、e組菌落數(shù)分別在1×108～5×109cfu/L之間,且組間菌落數(shù)誤差率不應(yīng)超過15%;f、g、h組無菌生長。由此可判定所選中和劑及其濃度適宜。

1.2.4 懸液定量殺菌試驗(yàn) 試驗(yàn)時(shí),先將內(nèi)裝5 mL消毒液的試管置于20℃水浴中5 min,再將0.1 mL菌懸液加入其中,混勻,作用至規(guī)定時(shí)間。取0.5 mL菌藥混和液,移入4.5 mL中和劑溶液的試管中,混勻,中和作用10 min。取0.1 mL涂平板,置恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),活菌計(jì)數(shù)。以內(nèi)裝5 mL標(biāo)準(zhǔn)硬水的試管同步操作所得活菌數(shù)為基準(zhǔn),計(jì)算殺菌率。

1.2.5 評(píng)價(jià)指標(biāo) 協(xié)同系數(shù)(T/E)=各因子單獨(dú)作用時(shí)微生物存活百分率之乘積/多因子共同作用實(shí)測微生物存活百分率(其中,存活率為0時(shí),按0.000 1%計(jì)算)。T/E值為判斷復(fù)合增效作用強(qiáng)弱的標(biāo)準(zhǔn)。T/E值小于1為拮抗作用,等于1為相加作用,大于1為增效作用,其值越大,增效作用越強(qiáng)[5]。

1.2.6 模擬現(xiàn)場試驗(yàn) 選擇木質(zhì)桌面,在桌面上劃定5 cm×5 cm范圍的3個(gè)不同區(qū)域,以涂抹法污染E.coli8099懸液(菌數(shù)為1×107cfu/L),干燥后用棉拭沾采樣液涂抹采樣作消毒前對(duì)照;然后分別將0.1%洗必泰、0.1%新潔爾滅以及0.1%洗必泰+0.1%新潔爾滅復(fù)合消毒劑均勻噴涂在各自區(qū)域,作用10 min,以同樣方法進(jìn)行消毒后采樣;對(duì)消毒前后采樣液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù),觀察殺菌效果。

2 結(jié) 果

2.1 中和劑的考察試驗(yàn)

經(jīng)檢測,用質(zhì)量濃度為0.5 g/L的硫代硫酸鈉可分別有效中和0.1%洗必泰、0.1%新潔爾滅以及0.1%洗必泰+0.1%新潔爾滅復(fù)合消毒劑的殺菌作用,中和劑及中和產(chǎn)物對(duì)受試菌及培養(yǎng)基無影響(見表1)。

表1 消毒劑的中和劑試驗(yàn)Table 1 The result of neutralizer test for the disinfectants

2.2 復(fù)合消毒劑的協(xié)同殺菌作用考察

2.2.1 對(duì)金黃色葡萄球菌的協(xié)同殺菌作用 試驗(yàn)結(jié)果表明：洗必泰與新潔爾滅復(fù)合消毒劑對(duì)S.aureusATCC 6538的協(xié)同殺菌能力較洗必泰和新潔爾滅單獨(dú)作用時(shí)強(qiáng)(見表2)。經(jīng)計(jì)算,復(fù)合消毒劑作用2 min時(shí),T/E值為784.86,起到了顯著的增效作用。

表2 洗必泰、新潔爾滅及其復(fù)合消毒劑對(duì)金黃色葡萄球菌的殺滅效果Table 2 Efficacy of chlorhexidine,bromogeramine and complex disinfectant in killing S.aureus ATCC 6538

2.2.2 對(duì)大腸埃希菌的協(xié)同殺菌作用 試驗(yàn)結(jié)果表明：洗必泰與新潔爾滅復(fù)合消毒劑對(duì)E.coli 8099的協(xié)同殺菌能力較洗必泰和新潔爾滅單獨(dú)作用時(shí)強(qiáng)(見表3)。經(jīng)計(jì)算,復(fù)合消毒劑作用2 min時(shí),T/E值為12.39,起到了顯著的增效作用。

表3 洗必泰、新潔爾滅及其復(fù)合消毒劑對(duì)大腸埃希菌的殺滅效果Table 3 Efficacy of chlorhexidine,bromogeramine and complex disinfectant in killing E.coli8099

2.2.3 對(duì)白色念珠菌的協(xié)同殺菌作用 試驗(yàn)結(jié)果表明：洗必泰與新潔爾滅復(fù)合消毒劑對(duì)C.albicansATCC 10231的協(xié)同殺菌能力較洗必泰和新潔爾滅單獨(dú)作用時(shí)強(qiáng)(見表4)。經(jīng)計(jì)算,復(fù)合消毒劑作用2 min時(shí),T/E值為2 422.16,起到了顯著的增效作用。

2.3 模擬現(xiàn)場試驗(yàn)

用0.1%洗必泰、0.1%新潔爾滅以及0.1%洗必泰+0.1%新潔爾滅復(fù)合消毒劑進(jìn)行模擬現(xiàn)場試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明：洗必泰、新潔爾滅及其復(fù)合消毒劑對(duì)E.coli8099懸液作用10 min,殺菌率分別為98.73%、96.12%和100%。說明該復(fù)合消毒劑具有明顯地協(xié)同殺菌優(yōu)勢(shì),為生產(chǎn)生活中的實(shí)際應(yīng)用提供了技術(shù)支持。

表4 洗必泰、新潔爾滅及其復(fù)合消毒劑對(duì)白色念珠菌的殺滅效果Table 4 Efficacy of chlorhexidine,bromogeramine and complex disinfectant in killingC.albicansATCC 10231

3 結(jié) 論

研究結(jié)果表明：0.1%洗必泰+0.1%新潔爾滅復(fù)合消毒劑協(xié)同作用可以克服單一消毒劑存在的不足,作用2 min,對(duì)S.aureusATCC 6538、E.coli8099和C.albicansATCC 10231均起到了顯著地協(xié)同殺菌效果。通過對(duì)比0.1%洗必泰、0.1%新潔爾滅以及0.1%洗必泰+0.1%新潔爾滅復(fù)合消毒劑模擬現(xiàn)場試驗(yàn)結(jié)果,證明該復(fù)合消毒劑具有明顯地協(xié)同殺菌優(yōu)勢(shì)。

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[3] 雒曉芳,董開忠,王冬梅,等.新潔爾滅對(duì)三種細(xì)菌的抑菌效果研究[J].西北民族大學(xué)學(xué)報(bào),2009,30(1)：64-66.

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