OX40L/OX40基因組變異與早發(fā)冠心病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系＊

趙文強(qiáng),王俊,孫光明,歐陽(yáng)星文,謝紅珍,陳輝,吳艷君

OX40L/OX40基因組變異與早發(fā)冠心病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系＊

趙文強(qiáng),王俊,孫光明,歐陽(yáng)星文,謝紅珍,陳輝,吳艷君＊

目的：研究OX 40L/OX 40基因組變異與早發(fā)冠心病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。

方法：用序列特異性引物—聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)對(duì) 243例年齡 ＜55歲早發(fā)急性冠狀動(dòng)脈(冠脈)綜合征(PACS)的患者為 PACS組、209例早發(fā)穩(wěn)定性心絞痛(PSAP)為 PSAP組和 138例對(duì)照組檢測(cè)OX 40L基因rs3850641 A/G變異位點(diǎn)和OX 40基因rs2298212 G/A位點(diǎn)變異的基因型、等位基因及其單倍型;用冠脈造影測(cè)量病變血管支數(shù)和狹窄程度積分;用酶鏈免疫吸附法(ELISA)測(cè)試血漿可溶性 OX 40L(sOX 40L)、血管細(xì)胞黏附分子 1(VCAM-1);用散射比濁法測(cè)試血漿C反應(yīng)蛋白(CRP)水平;分析 OX 40L/OX 40基因變異與冠心病風(fēng)險(xiǎn)、冠脈病變程度和血漿 3個(gè)細(xì)胞因子之間的關(guān)系。

結(jié)果：OX 40LGG基因型和 G等位基因發(fā)生 PACS風(fēng)險(xiǎn)比 AA基因型和 A等位基因顯著增高(OR=1.99,1.83;P=0.021,P=0.0001);而 OX 40 A等位基因比 G等位基因發(fā)生 PACS風(fēng)險(xiǎn)顯著降低(OR=0.49,P=0.002);單倍型 GGGG比 AAGG(野生型)的 PACS風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(OR=2.11,P=0.033);在 4種高危因素(高血壓、高脂血癥、糖尿病和吸煙)被校正后 OX 40LG等位基因和GG基因型及單倍型 GGGG與 PACS風(fēng)險(xiǎn)仍具有獨(dú)立關(guān)聯(lián)性(OR=1.97、1.78、2.01,P=0.026、0.001、0.038),OX 40 A等位基因和 AA基因型對(duì) PACS風(fēng)險(xiǎn)仍有獨(dú)立的關(guān)聯(lián)性(OR=0.31、0.45;P=0.043、0.0001);OX 40L基因型 GG+AG比 AA型血管病變支數(shù)≥3支的百分率和狹窄程度積分均顯著增加;OX 40基因型AA+GA比 GG型血管病變支數(shù)≥3支的百分率和狹窄程度積分顯著減低;差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。基因型變異與炎性細(xì)胞因子表達(dá)：OX 40L基因型 GG+AG比 AA型血漿可溶性 OX 40L、C反應(yīng)蛋白、血管細(xì)胞黏附分子 1水平均顯著增高;OX 40基因型 AA+GA比 GG型三指標(biāo)顯著降低。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

結(jié)論：OX 40L/OX 40基因組變異可能與 PACS風(fēng)險(xiǎn)、冠脈病變程度及炎性因子的表達(dá)的正反調(diào)節(jié)有關(guān)。

冠狀動(dòng)脈疾病;聚合酶鏈反應(yīng);基因型;OX 40配體

(Chinese Circu lation Journal,2010,25：432.)

冠心病是否發(fā)病或發(fā)病早晚是基因與環(huán)境共同作用的結(jié)果,但早發(fā)冠心病的患者往往有顯著的家族遺傳或近親集聚傾向?；蛲蛔兓蜻B鎖失衡往往是本病早發(fā)的分子基礎(chǔ)。OX40L/OX40基因組是一對(duì)腫瘤壞死因子超家族成員-4配體/受體對(duì),OX40L/OX40基因組是編碼該配體/受體對(duì)的基因,OX40L/OX40兩者共同調(diào)控共刺激分子表達(dá)和信號(hào)通路傳遞。西方作者發(fā)現(xiàn)其基因組變異與心肌梗死發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)[1,2];本文對(duì)中國(guó)人江蘇漢族 243例年齡 ＜55歲的早發(fā)急性冠狀動(dòng)脈(冠脈)綜合征(PACS)患者、209例早發(fā)穩(wěn)定性勞力型心絞痛 (PSAP)與 138例對(duì)照組研究OX40L基因第一內(nèi)含子 rs3850641位點(diǎn) A/G和 OX40基因第 5內(nèi)含子 rs2298212位點(diǎn) G/A變異與 PACS風(fēng)險(xiǎn)和冠脈病變程度之間的關(guān)系。

1 資料與方法

病例選擇：2006-03至2009-03在我院和江蘇大學(xué)附屬四院行冠脈造影患者,選出早發(fā)冠心病(發(fā)病年齡 ＜55歲,至少有一根血管狹窄≥50%[3])452例,根據(jù)不同疾病分 2組：①PACS組：243例,包括急性心肌梗死 55例,不穩(wěn)定性心絞痛 188例,男 150例,女 93例,年齡(47±6)歲;②PSAP組：209例為早發(fā)穩(wěn)定性勞力型心絞痛,男 129例,女 80例,年齡(47±7)歲。對(duì)照組 ：138例,男 85例,女 53例 ,年齡 (46 ±7)歲,為冠脈造影正常者。所有研究對(duì)象無(wú)血緣關(guān)系。3組主要危險(xiǎn)因素見表 1。PACS組高血壓、高脂血癥、糖尿病、吸煙顯著高于對(duì)照組,PSAP組高脂血癥、糖尿病、吸煙顯著高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。 (表 1)

表 1 3組主要危險(xiǎn)因素[例(%)]

冠脈造影測(cè)量：①病變血管支數(shù)分 0支、＜3支、≥3支,分別記錄各類百分比;②狹窄程度積分(SSI)[4]：采用各狹窄段直徑狹窄百分比(PDS)與長(zhǎng)度(L)乘積的總和,即 SSI=∑(PDS×L)n(mm)。

基因檢測(cè)：①試劑與設(shè)備：所有試劑[全血基因組脫氧核糖核酸(DNA)提取試劑盒、引物合成、Taq DNA聚合酶、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)相關(guān)試劑]均由上海生工公司提供;采用美國(guó) PTC-200梯度基因擴(kuò)增儀、意大利BIO-RAD GIEIDOC2000型紫外凝光圖象分析系統(tǒng)。②引物研制：按序列特異性引物—聚合酶鏈反應(yīng)要求設(shè)計(jì) 6條引物：P1：5'-CATTTGCCAAGACTGCTCATCT;P2：5'-AGTGACTATATGGACCAGATGGGTA;P3：5'-AGTGACTATATGGACCAGATGGGTG;P4：5'-CTCCGTCGTTAGCCGTGGATCTTG;P5：GCGGACCGGGTCGGGTCG;P6：GCGGACCGGGTCGGGTCA。 P1為 OX40L基因多態(tài)位點(diǎn)的公共引物,P2、P3分別為對(duì)應(yīng) OX40L rs3850641多態(tài)性位點(diǎn)的兩個(gè)等位基因(A/G)匹配的序列特異性引物,并各自與 P1配對(duì)成特異引物對(duì),擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為698 bp;P4為 OX40基因多態(tài)性位點(diǎn)的公共引物,P5、P6分別為對(duì)應(yīng) OX40 rs2298212多態(tài)性位點(diǎn)兩等位基因(G/A)的序列特異性引物,各自與 P4配對(duì)成特異引物對(duì),擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為 522 bp。③DNA提?。撼閯?dòng)脈血2ml置于乙二胺四乙酸鹽(EDTA-K2)試管中,用全血基因組 DNA提取試劑盒以離心柱法提取基因組 DNA。④PCR擴(kuò)增：采取序列特異性引物-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù),擴(kuò)增體系共有 25μl,引物 P1與 P2、P1與 P3、P4與 P5、P4與 P6四管中各引物分別各加 5μmol/L,dNTP(四種核苷酸混合液)0.5mmol/L,Taq DNA聚合酶 2.5U,10×PCR緩沖液 5μl,25mmol/L MgCI23μl,雙蒸蒸餾水加至 25μl。擴(kuò)增條件：采用 Touch down循環(huán)法：95℃15min,95℃ 30',70℃ 1min,72℃ 10min,5個(gè)循環(huán);95℃ 30 s,69.5℃ 1 min(每一循 環(huán)減 0.5℃),72℃1.5min,30個(gè)循環(huán);72℃10min完成。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂凝膠電泳、紫外凝光儀下觀察結(jié)果。⑤基因型判斷：按電泳圖 DNA堿基條帶分布判斷基因型。

細(xì)胞因子測(cè)定：用日本 BIO-RAD 550型酶標(biāo)分析儀按試劑盒說(shuō)明的操作步驟(加樣、溫育、染色、洗板、讀板過(guò)程)對(duì)每例受試者以酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)量血漿可溶性 OX40L和血管細(xì)胞黏附分子 1水平,用散射比濁法測(cè)試血漿 C反應(yīng)蛋白水平。OX40L試劑盒購(gòu)自美國(guó) R＆D公司。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用 SPSS12.0軟件包處理,用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算各組基因型頻率、等位基因頻率[=(2×純合子數(shù) +雜合子數(shù))/(2×受檢人數(shù))]、聯(lián)合單倍型頻率及各型 PACS風(fēng)險(xiǎn)的優(yōu)勢(shì)比(OR);并根據(jù)要求采用 χ2檢驗(yàn)、配伍組 t檢驗(yàn)。以多因素 Logistic回歸分析校正混雜因素對(duì)基因作用的影響。以 P＜0.05作為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。對(duì)研究對(duì)象與Hardy-Weinberg平衡的吻合程度采用 χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

擴(kuò)增產(chǎn)物與基因型：OX40L基因 rs3850641 A/G位點(diǎn)檢測(cè)到 3種基因型：AA、AG、GG;擴(kuò)增產(chǎn)物為698 bp的 DNA片段,見圖 1。 OX 40基因 rs2298212 G/A位點(diǎn)檢測(cè)到 3種基因型：GG、GA和 AA;擴(kuò)增產(chǎn)物為522 bp的 DNA片段,見圖 2。

基因型與 PACS風(fēng)險(xiǎn)：研究對(duì)象經(jīng)檢驗(yàn)符合 Hardy-Weinberg平衡;3組基因型頻率分布對(duì)比：PACS組比對(duì)照組 OX40L GG基因型和 G等位基因的頻率分布顯著增高(P=0.021、0.0001),GG基因型比 AA基因型、G等位基因比 A等位基因發(fā)生 PACS風(fēng)險(xiǎn)均顯著增大(OR=1.985、1.829,95%CI為 1.098～3.589、1.338～2.500,P＜0.05～0.01);而 OX40 A等位基因的頻率分布 PACS組比對(duì)照組顯著降低(P=0.0001)。A等位基因比 G等位基因發(fā)生 PACS風(fēng)險(xiǎn)顯著降低(OR=0.486,95%CI 0.307～0.769,P＜0.05);PSAP組各基因型分布與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;單倍型 GGGG頻率分布 PACS組比對(duì)照組顯著增高(P＜0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,單倍型 GGGG比AAGG(野生型)的 PACS風(fēng)險(xiǎn)顯著增大(OR=2.11,P=0.033);其余差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表 2。

圖 1 OX 40L基因內(nèi)含子 1 A/G多態(tài)性電泳圖 M：DNA maker 1、2：AA型(泳道 1見 698 bp條帶,泳道 2無(wú)條帶)3、4：AG型(泳道 3和泳道 4均見 698 bp條帶)5、6：GG型(泳道5無(wú)條帶,泳道 6見 698bp條帶) 圖2 OX 40基因內(nèi)含子 5G/A多態(tài)性電泳圖 M：DNA maker 1、2：GG型(泳道 1見 522bp條帶,泳道 2無(wú)條帶)3、4：GA型(泳道 3和泳道 4均見 522 bp條帶)5、6：AA型(泳道 5無(wú)條帶,泳道 6見 522 bp條帶)7、8：無(wú)

校正混雜因素：在 4種高危因素(高血壓、高脂血癥、糖尿病和吸煙)被校正后 OX40LG等位基因和GG基因型及單倍型 GGGG與 PACS風(fēng)險(xiǎn)仍具有獨(dú)立關(guān)聯(lián)性 (OR=1.97、1.78、2.01,P=0.026、0.001、0.038),OX40 A等位基因和 AA基因型對(duì) PACS風(fēng)險(xiǎn)仍有獨(dú)立的關(guān)聯(lián)性(OR=0.31,0.45;P=0.043,0.0001)。

基因型與血管病變程度：OX40L基因型 GG+AG比 AA型血管病變支數(shù)≥3支的百分率和狹窄程度積分均顯著增加;OX40 AA+GA型比 GG型血管病變支數(shù)≥3支的百分率和狹窄程度積分顯著減低;差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見表 3。

基因型變異與炎性細(xì)胞因子表達(dá)：OX40L基因型GG+AG比 AA型血漿可溶性 OX40L、C反應(yīng)蛋白、血管細(xì)胞黏附分子 1水平均顯著增高;OX40基因型 AA+GA比 GG三指標(biāo)顯著降低。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均 ＜0.01),見表 4。

表 2 3組OX40L/OX 40基因型、等位基因及單倍型頻率分布對(duì)比[例(%)]

表 3 不同基因型的血管病變支數(shù)和狹窄程度積分的比較

表 4 不同基因型血漿各炎性細(xì)胞因子水平的比較(±s)

表 4 不同基因型血漿各炎性細(xì)胞因子水平的比較(±s)

基因型 n 可溶性 OX 40L(ng/L) C反應(yīng)蛋白(mg/L) 血管細(xì)胞黏附分子1(μg/L)OX 40L AA 242 19.67±15.65 3.36±3.32 39.71±16.34 GG+AG 348 25.74±19.32＊＊ 5.71±3.47＊＊ 49.56±17.87＊＊OX 40 GG 481 24.37±17.69 5.41±3.12 46.89±16.11 AA+GA 109 18.45±13.48△△ 3.54±3.09△△ 39.26±19.07△△

注：與 AA比較＊＊P＜0.01;與 GG的比較△△P＜0.01

3 討論

OX40L由活化的抗原呈遞細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)和分泌[5],OX40是定位于活化的 CD4+和 CD8+T細(xì)胞表面受體,兩者結(jié)合產(chǎn)生共刺激信號(hào)調(diào)控 CD4+T細(xì)胞活化、增殖、遷移和釋放反應(yīng)[白細(xì)胞介素(IL)-4、-2、-12和腫瘤壞死因子 α(TNF)-α等分泌][6,7],介導(dǎo) T細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附、抗體分泌和炎癥反應(yīng)。OX40L基因位于 1q25號(hào)染色體、屬腫瘤壞死因子超家族 4的編碼基因,OX40基因位于 1p36號(hào)染色體、屬 OX40L受體的編碼基因,與腫瘤壞死因子超家族其他協(xié)同分子等位于同一個(gè)基因簇;基因掃描證實(shí)[2,8],OX40基因與鼠動(dòng)脈粥樣硬化定量性狀基因座和人心肌梗死位點(diǎn)共定位于同一區(qū)域,Smith等[8]發(fā)現(xiàn) 1號(hào)染色體 q25-36帶OX40L基因恰好位于動(dòng)脈粥樣硬化易感基因區(qū) Ath1,該區(qū) OX40L與比鄰基因的多態(tài)性單倍型與高發(fā)心肌梗死顯著關(guān)聯(lián);近來(lái)對(duì)應(yīng)于鼠類 Ath1區(qū)的人類早發(fā)冠心病和心肌梗死的 QTL圖已被繪出。晚近報(bào)道OX40L基因第一內(nèi)含子相對(duì)保守序列 rs3850641位點(diǎn) A/G變異和 OX40基因第 5內(nèi)含子 rs2298212 G/A變異與早發(fā)心肌梗死相關(guān)連[1,2];但該基因組變異是否與中國(guó)人漢族PACS有關(guān)至今尚無(wú)報(bào)道。

OX40L/OX40基因變異與早發(fā)冠心病風(fēng)險(xiǎn)：Wang等[1]報(bào)道 OX40L rs3850641 A/G多態(tài)性與 60歲以下早發(fā)心肌梗死相關(guān)連,發(fā)現(xiàn)女性心肌梗死患者攜帶 G等位基因頻率顯著高于對(duì)照組,顯示了明顯的性別效應(yīng);Ria等[2]發(fā)現(xiàn) OX40L基因變異與心肌梗死的易感性和冠狀動(dòng)脈病變程度顯著相關(guān);本文 GG基因型和G等位基因 55歲以下的 PACS風(fēng)險(xiǎn)比野生型顯著增大(OR=1.985,1.829),表明 GG基因型和 G等位基因可能是 PACS的易感基因型。Ria等[2,9]報(bào)道 OX40基因 rs2298212 G/A多態(tài)性與 60歲以下早發(fā)心肌梗死相關(guān)連,心肌梗死組小等位基因 A頻率較對(duì)照組顯著降低(P=0.035)顯示了其對(duì)心肌梗死發(fā)病的保護(hù)作用;對(duì)攜帶 rs17568大等位基因 G和 rs2298212小等位基因 A的單倍型頻率研究發(fā)現(xiàn),心肌梗死組比對(duì)照組亦顯著減少(P=0.023),證明了這種保護(hù)作用。本文 rs2298212位點(diǎn) A等位基因在 ＜55歲 PACS組比對(duì)照組顯著降低,A等位基因 PACS風(fēng)險(xiǎn)比野生型(G等位基因)減少 51%(OR=0.49);表明 A等位基因可能有抵抗 PACS易感風(fēng)險(xiǎn)作用。本組單倍型 GGGG發(fā)生PACS風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(P=0.033),而 AAAA發(fā)生 PACS風(fēng)險(xiǎn)降低、兩基因變異與 PSAP風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系均無(wú)顯著性意義可能與研究例數(shù)少有關(guān)。本組 OX40L A/G變異和 OX40 G/A變異與 PACS風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系在 4種危險(xiǎn)因素校正后仍顯示獨(dú)立的促發(fā)/保護(hù)作用。

OX40L/OX40基因變異與血管病變程度：Ria等[2]研究表明,OX40L基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重度有關(guān),G等位基因多支血管病變的頻率顯著增加;本文研究也得出相同的結(jié)論;表明 G等位基因可能是冠脈病變的致病基因。Wang等對(duì)小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),用抗 OX40L處理的小鼠比對(duì)照組血管動(dòng)脈粥樣硬化的斑塊顯著縮小;將 OX40L突變基因敲除后心肌梗死發(fā)生率和血管病變程度顯著降低;過(guò)度表達(dá) TNFSF4則顯著增大動(dòng)脈粥樣硬化病變范圍。另有研究發(fā)現(xiàn),阻斷 OX40L轉(zhuǎn)錄可使免疫和炎癥反應(yīng)的程度減輕。他們?cè)趧?dòng)脈粥樣硬化斑塊部位的巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及淋巴細(xì)胞中用免疫組化法均可檢測(cè)到 OX40L,但壞疽的脂質(zhì)斑塊核心檢不出 OX40L[5,9],這些研究證據(jù)使得 OX40L及其基因變異致動(dòng)脈粥樣硬化作用得到充分肯定。本文 OX40基因 AA+GA型比 GG型≥3支病變的頻率顯著減少,狹窄程度積分也顯著降低,顯示 A等位基因可能對(duì)是冠脈病變發(fā)展起保護(hù)作用。

OX40L/OX40基因變異與血漿可溶性 OX40L、血管細(xì)胞黏附分子;血漿 C反應(yīng)蛋白表達(dá)：本研究發(fā)現(xiàn),OX40L基因第一內(nèi)含子 A/G變異與 OX40基因第 5內(nèi)含子 G/A變異使血液中血漿可溶性 OX40L、血管細(xì)胞黏附分子;血漿 C反應(yīng)蛋白水平成正、反向變化,OX40L基因變異有促進(jìn) OX40L表達(dá)、促細(xì)胞黏附和促炎癥作用,可能是促動(dòng)脈粥樣硬化、增加 PACS風(fēng)險(xiǎn)的分子機(jī)制;而 OX40基因變異則抑制 OX40L基因表達(dá)、減少細(xì)胞黏附和炎癥程度作用,可認(rèn)為是對(duì) PACS風(fēng)險(xiǎn)、冠狀動(dòng)脈病變程度起保護(hù)作用的重要環(huán)節(jié)。

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(編輯：常文靜)

Relationship Between Variation of OX 40L/OX 40Gene Group and the Risk of Premature Coronary Artery Disease

ZHAOWen-qiang,WANG Jun,SUN Guang-ming,OUYANG Xing-wen,XIE Hong-zhen,CHEN Hui,WU Yan-jun.
Department of Cardiology,Anhui Province Friendship Hospital,Hefei(230041),Anhui,China Corresponding Author：ZHAOWen-qiang,Email：zwenqiang 2008@sohu.com

Objective：To investigate the relationship between genetic variations of OX 40L/OX 40 and the risk of p remature coronary artery disease(PCAD).

Methods：Our research included three groups,PACSgroup,243 patientswith premature acute coronary syndrome(PACS)younger than 55 years of age,PSAP group,209 patientswith premature stable angina pectoris(PSAP)and Control group of 138 subjects.Sequence specific primers-polymerase chain reaction(PCR-SSP)was performed to detect genotypes,alleles and halo types of A/G variant in OX 40L rs3850641SNP lociand G/A variant in OX 40 rs2298212SNP loci.Diseased vesselnumber(DVN)and stenostic severity integral(SSI)were examined by coronary angiography,and serum levels of soluble OX 40L(sOX 40L),C-reactive p rotein(CRP),vascu lar cell adhesion molecule-1(VCAM-1)were tested by ELISA and nephelometry.The relationship between OX40L/OX 40gene variants and PCAD risk,DVN,SSIand p lasma levels of three cytokines were analyzed.

Resu lts：OX40L gene A/G variant and OX40 gene G/A variant were significantly associated with PACS risk but in-significantly related with PSAP risk.GG genotypes and G allele in OX40L showed thehigher risk of PACS than their wild types(OR=1.99,1.83;P=0.021,P=0.0001)but AA genotypes and A allele in OX 40 had the lower risk of PACS than their wild types.Risk of PACS in Halo type GGGG was higher than that in wild type(OR=2.11,P=0.033).A/G variant in OX 40L and G/A variant in OX 40 presented the independent role for PACS risk after four risk factors ofhigh blood pressure,high blood lipids,diabetes and smoking were corrected by statistic analysis.Variant genotypes in OX 40L had significantly higher DVN,SSI,sOX 40L,CRP and VCAM-1 than the wild types while variant genotypes in OX 40 showed inverse changes of those five index in OX 40L.Those differences had the statisticmeawing.

Conclusion：Genetic variations of OX 40L/OX 40might be related with PACS risk,coronary lesion severity and expression of inflammatory cytokines.

Coronary artery disease;Polymerase chain reaction;Genotype;OX40 ligand

＊ 鎮(zhèn)江市科技局社會(huì)發(fā)展基金資助項(xiàng)目(SH 2006048)

230041 安徽省合肥市,安徽省立友誼醫(yī)院 心內(nèi)科(趙文強(qiáng)、歐陽(yáng)星文),江蘇省鎮(zhèn)江市,江蘇大學(xué)第四附屬醫(yī)院 心內(nèi)科(王俊、孫光明、謝紅珍、陳輝、吳艷君)

趙文強(qiáng) 主任醫(yī)師 碩士 科主任 主要從事心血管介入治療和基因治療研究 Email：zwenqiang 2008@sohu.com 通訊作者：趙文強(qiáng)

R541

A

1000-3614(2010)06-0432-05

10.3969/j.issn.1000-3614.2010.06.009

2010-03-01)

?臨床研究?