結(jié)核蛋白芯片對(duì)肺結(jié)核球及肺門淋巴結(jié)結(jié)核與其他肺部占位病變的診斷價(jià)值

孫遜 蔣超英

(河北省白求恩國(guó)際和平醫(yī)院 石家莊 050082)

結(jié)核蛋白芯片對(duì)肺結(jié)核球及肺門淋巴結(jié)結(jié)核與其他肺部占位病變的診斷價(jià)值

孫遜 蔣超英

(河北省白求恩國(guó)際和平醫(yī)院 石家莊 050082)

肺部占位性病變依其部位可采取CT引導(dǎo)下肺穿、支氣管鏡下鉗取或穿刺針吸活檢等采集標(biāo)本,若出現(xiàn)胸液或有痰可抽取胸液或痰涂片檢查來(lái)確診,但仍有相當(dāng)部分患者由于病變部位、年齡、身體狀況、并發(fā)癥等限制不能取得標(biāo)本,尤其肺癌不能和肺結(jié)核球及肺門淋巴結(jié)結(jié)核鑒別,以至于治療失去了方向。蛋白芯片技術(shù)采用基因工程表達(dá)的結(jié)核桿菌重組蛋白抗原16 kD、38 kD和脂阿拉伯甘露聚糖LAM 3種結(jié)核分枝桿菌特異性抗原為標(biāo)的來(lái)檢測(cè)血清中的抗體,具有簡(jiǎn)便快速的特點(diǎn),結(jié)合其他指標(biāo)對(duì)肺癌與結(jié)核做出初步鑒別是本研究的目的。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取我院2006年4月—2009年6月肺部CT檢查顯示占位性病變患者58例,所有患者依其部位分別行CT引導(dǎo)下肺穿刺活檢、纖維支氣管鏡下鉗取或針吸活檢,痰涂片或胸液鏡檢,結(jié)合其他臨床資料,確診肺結(jié)核球及肺門淋巴結(jié)結(jié)核患者21例,均為病理切片抗酸染色陽(yáng)性或痰中找到結(jié)核桿菌。肺癌18例,炎性假瘤、肺膿腫、肺部其他瘤樣病變等19例,均為病理確診。將上述患者分為結(jié)核組21例及非結(jié)核組37例。所有患者均抽取空腹靜脈血5 ml,行結(jié)核分枝桿菌多種抗原IgG抗體蛋白芯片檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)方法和步驟 分離血清,采用南京大淵生物技術(shù)工程有限責(zé)任公司提供的蛋白芯片試劑盒(批號(hào)：PBT TBO1A20080302)和芯片閱讀儀,按芯片說(shuō)明書進(jìn)行操作,結(jié)果根據(jù)廠家設(shè)置參數(shù)自動(dòng)判別。LAM、38 kD與16 kD中任意一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性判為結(jié)核桿菌感染陽(yáng)性。采用盲法檢測(cè),檢驗(yàn)人員不知道檢測(cè)標(biāo)本的來(lái)源。

1.3 檢測(cè)原理 本研究所用的結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測(cè)試劑盒以微孔濾膜為載體,利用微陣列技術(shù)將純化的LAM、基因工程重組并純化的16 kD和38kD 3種抗原固相于同一膜片上,在加入待檢血清后利用微孔濾膜的濃縮、凝集和滲濾作用,使抗原抗體反應(yīng)在固相膜上快速進(jìn)行,再以免疫金作為顯色劑直接在膜上顯色以檢測(cè)血清中是否有相應(yīng)抗體,反應(yīng)后的反應(yīng)板放入芯片識(shí)別儀,在專門軟件的支持下對(duì)不同點(diǎn)陣的灰度值進(jìn)行分析,得出結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2組患者的陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn),P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

LAM、38 kD與16 kD中任意一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性總體判為陽(yáng)性。3項(xiàng)指標(biāo)均為陰性判斷為陰性。整體檢測(cè)結(jié)果如表1所示;結(jié)核組3項(xiàng)指標(biāo)的詳細(xì)檢測(cè)結(jié)果如表2所示。

由以上結(jié)果我們看到,結(jié)核組敏感性61.9%(13/21),其中LAM 和38 kD同時(shí)陽(yáng)性比例最高為19%(4/21),其次為 38 kD單項(xiàng)陽(yáng)性 14.3%(3/21)。非結(jié)核組誤診率24.3%(9/37),其中肺癌組為16.7%(3/18),其他組為31.6%(6/19)。非結(jié)核組總體特異性為75.7%(28/37),肺癌組特異性為83.3%(15/18),其他組特異性為 68.4%(13/19)。本研究陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值分別為59.1%(13/22)及77.8%(28/36)。結(jié)核組和非結(jié)核組總體陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),和肺癌組總體陽(yáng)性率亦差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。但結(jié)核組漏診率達(dá)38.1%(8/21)。

3 討論

結(jié)核病的診斷目前方法較多,主要包括痰涂片鏡檢、痰/其他體液或組織培養(yǎng)、血清ELISA檢測(cè)結(jié)核抗體、PCR檢測(cè)結(jié)核菌特異性DNA片斷、影像學(xué)檢查等,對(duì)于采樣方便,臨床表現(xiàn)典型的病例,診斷不難。但多數(shù)肺門淋巴結(jié)結(jié)核及肺結(jié)核球和肺癌等占位病變鑒別困難。對(duì)于占位部位靠近縱隔或大血管,或患有肺氣腫、肺大皰容易并發(fā)氣胸,或腫大的淋巴結(jié)氣管鏡下穿刺困難等情況,由于無(wú)法取樣做病理,只能尋求其他診斷途徑。結(jié)核蛋白芯片的出現(xiàn)為我們提供了診斷結(jié)核病的新途徑,其檢測(cè)原理如前所述,LAM是一種非蛋白結(jié)核分枝桿菌抗原,化學(xué)本質(zhì)是多糖,具有較強(qiáng)的免疫原性,能夠刺激結(jié)核菌感染者產(chǎn)生抗體,而其他分枝桿菌由于表面LAM含量低,不能刺激機(jī)體產(chǎn)生高水平抗體量,故抗LAM-IgG抗體檢測(cè)的特異性和敏感性都較高。基因工程重組的38 kD和16 kD抗原蛋白和結(jié)核桿菌本身合成的抗原免疫性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,3種抗原均為結(jié)核桿菌特異性較高的抗原,存在于結(jié)核桿菌復(fù)合群中,南京大淵公司采用這3種抗原同時(shí)檢測(cè)確實(shí)能提高檢測(cè)的陽(yáng)性率。一般來(lái)說(shuō),感染結(jié)核菌后IgG抗體在體內(nèi)可存在6個(gè)月～1年的可檢測(cè)到水平,而后下降,若出現(xiàn)結(jié)核活動(dòng)可再次升高,這就為鑒別結(jié)核和肺癌提供了依據(jù)。

表1 蛋白芯片檢測(cè)血清標(biāo)本的整體結(jié)果

表2 結(jié)核組3種結(jié)核分枝桿菌抗原的抗體檢測(cè)結(jié)果

國(guó)內(nèi)很多學(xué)者對(duì)于大淵公司的蛋白芯片檢測(cè)結(jié)核菌感染的敏感性和特異性已有較多研究,蛋白芯片檢測(cè)結(jié)核病變的陽(yáng)性率多在 60%～65%[1-2]。有研究顯示蛋白芯片對(duì)于各種結(jié)核的整體檢測(cè)敏感性約為 65%～80%[1-4],痰涂陽(yáng)者達(dá)到80%以上[5],痰涂陰者也可達(dá)到60%稍多[7],但對(duì)于單純的肺門淋巴結(jié)或肺結(jié)核球未見專門研究。肺門淋巴結(jié)多為近期幾個(gè)月內(nèi)的病變,抗體水平多在可檢測(cè)到的水平。肺結(jié)核球多由于干酪性病變吸收和周邊纖維膜包裹或干酪空洞阻塞性閉合形成的,少數(shù)結(jié)核球內(nèi)可液化壞死形成空洞,也可長(zhǎng)期無(wú)變化,有時(shí)和肺癌等無(wú)法區(qū)別,總體來(lái)說(shuō)是個(gè)慢性改變。本研究蛋白芯片對(duì)于病理確診的結(jié)核結(jié)節(jié)樣病變敏感性為61.9%,和肺癌、炎性假瘤、肺膿腫及其他瘤樣病變陽(yáng)性率(24.3%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可做為篩檢的指標(biāo)。其中,38 kD和 LAM出現(xiàn)陽(yáng)性者較多,分別為10例和8例,其他研究也顯示感染結(jié)核后38 kD和LAM陽(yáng)性率較高[7-8]?？紤]到老年人患結(jié)核病同時(shí)患肺癌的機(jī)率較高,影像學(xué)很難區(qū)分,檢測(cè)結(jié)核抗體就有優(yōu)勢(shì),從本次研究看,陰性預(yù)測(cè)值77.8%,即3項(xiàng)抗體均陰性則未患結(jié)核的機(jī)會(huì)遠(yuǎn)大于一半。對(duì)于單純的肺癌患者,陽(yáng)性率為16.7%(3/18),和結(jié)核組61.9%(13/21)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),若再結(jié)合其他指標(biāo)及臨床特點(diǎn)則可做鑒別。但本研究樣本量較小,今后應(yīng)擴(kuò)大研究例數(shù)得到的結(jié)論才更可靠。

必須指出的是,結(jié)核分枝桿菌抗原多而復(fù)雜,在宿主體內(nèi)表達(dá)的數(shù)量、種類或時(shí)機(jī)可能隨病人的個(gè)體免疫背景和病程而異,表現(xiàn)出不同的抗原抗體譜。蛋白芯片3種抗體聯(lián)合檢測(cè)是為了提高檢測(cè)的靈敏度。血清學(xué)診斷,無(wú)論是ELISA、Digfa還是蛋白芯片,均只發(fā)揮輔助診斷作用,無(wú)論確診結(jié)核或腫瘤,均需要結(jié)合其他方面的證據(jù)。

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2009-10-24)

(本文編輯：李樹萍)