楊 輝,李秀榮

(1.河北北方學(xué)院藥學(xué)系,河北張家口 075000;2.北京石景山醫(yī)院藥劑科,北京 100043)

不同產(chǎn)地桃葉鴉蔥多糖的含量測(cè)定

楊 輝1,李秀榮2

(1.河北北方學(xué)院藥學(xué)系,河北張家口 075000;2.北京石景山醫(yī)院藥劑科,北京 100043)

采用水提醇析的方法提取桃葉鴉蔥中多糖,用苯酚 -硫酸法測(cè)定多糖的含量.結(jié)果表明:不同產(chǎn)地桃葉鴉蔥多糖的含量有一定的差異,多糖含量范圍在 12.75% ～18.69%之間.

桃葉鴉蔥;多糖;含量測(cè)定;苯酚 -硫酸法;分光光度法

0 前言

桃葉鴉蔥是菊科植物桃葉鴉蔥 (Scorzonera sinensisLipsch)的干燥全草,廣泛分布于河北、內(nèi)蒙古、山東等地.民間有蜥蜴喂食煙袋油 (主要成分為煙堿)后,用桃葉鴉蔥的乳汁可瞬間解毒的報(bào)道.近來(lái)證實(shí)鴉蔥屬植物有保肝[1]及抗腫瘤[2]的作用.文獻(xiàn)報(bào)道其化學(xué)成分主要為苯丙素、木脂素及其苷、倍半萜及其苷、三萜及其苷和黃酮類(lèi)化合物[3-6].作者在前期研究發(fā)現(xiàn),桃葉鴉蔥中含有大量多糖類(lèi)成分.

植物多糖具有多種生物活性,能促進(jìn) T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、M細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能,并能促進(jìn)白介素、干擾素、腫瘤壞死因子等細(xì)胞因子的產(chǎn)生[7],是理想的免疫增強(qiáng)劑.植物多糖的含量可以在很大程度上體現(xiàn)該藥材免疫作用的強(qiáng)弱.目前有關(guān)桃葉鴉蔥多糖的研究尚未見(jiàn)報(bào)道.作者采用水提醇析的方法提取桃葉鴉蔥中多糖,采用苯酚-濃硫酸法[8]對(duì)不同產(chǎn)地的桃葉鴉蔥進(jìn)行多糖的含量測(cè)定,為桃葉鴉蔥的開(kāi)發(fā)應(yīng)用及其藥理作用的進(jìn)一步研究提供了理論依據(jù).

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

桃葉鴉蔥分別采自河北赤城、遼寧建平、內(nèi)蒙古商都、山東陵縣.

葡萄糖對(duì)照品:中國(guó)藥品生物制品檢定所;其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純.

1.2 儀器與設(shè)備

UV—2100紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):北京萊伯泰科儀器有限公司;TG—322A微量分析天平:上海天平儀器廠;RE—52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:上海亞榮儀器廠.

1.3 方法

1.3.1 桃葉鴉蔥多糖的提取與精制

稱(chēng)取不同產(chǎn)地桃葉鴉蔥粉末各 60 g,經(jīng) 95%乙醇浸提 3次,藥渣置室溫干燥后置索氏提取器中,加水 600 mL提取,虹吸 3次,提取液減壓濃縮至約 200 mL.分別加入 4倍體積的無(wú)水乙醇,攪勻,冰箱中靜置過(guò)夜,抽濾得粗多糖.將粗多糖溶于水,Sevage法脫蛋白[9],加 1%活性炭脫色,抽濾,濾液加入 4倍體積的無(wú)水乙醇,攪勻,靜置過(guò)夜,抽濾,所得沉淀用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚數(shù)次洗滌,置 60℃真空干燥箱中干燥,即得多糖精制品.

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精確稱(chēng)取 105℃干燥至恒重的葡萄糖 100 mg,置 100 mL的容量瓶中,加水溶解定容,搖勻,精確吸取葡萄糖對(duì)照品溶液適量,分別加水稀釋制成 0.03 mg/mL、0.04 mg/mL、0.05 mg/mL、0.06 mg/mL、0.07 mg/mL、0.08 mg/mL的溶液 ,搖勻.分別精確吸取上述不同濃度溶液 1.0 mL,置錐形瓶中,均加 10%苯酚溶液 1 mL,搖勻,迅速加入濃硫酸 5.0 mL,立即搖勻,室溫放置 30 min,平行空白,在 490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度 (A)和濃度 (C)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:A=9.957 1C+0.069 1,r=0.999 2.

1.3.3 多糖換算因子的測(cè)定

精確稱(chēng)取干燥至恒質(zhì)量的精制多糖 6 mg,置于 100 mL容量瓶中,加蒸餾水定容至刻度,搖勻.精確量取 1.00 mL,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法操作,測(cè)定吸光度值,根據(jù)線性回歸方程求出質(zhì)量濃度,再代入下式計(jì)算換算因子,求得 f=1.320,(n=6).

f=W/(C×D),

式中:W為多糖質(zhì)量;C為多糖質(zhì)量濃度;D為多糖稀釋因數(shù).

1.3.4 精密度試驗(yàn)

精確稱(chēng)取桃葉鴉蔥多糖樣品 6.0 mg,置 100 mL容量瓶中,加水溶解定容,搖勻,按 1.3.2操作,平行 5份,測(cè)定吸光度 A,RSD=0.07%.

1.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精確稱(chēng)取桃葉鴉蔥多糖樣品 6.0 mg,置 100 mL容量瓶中,加水溶解定容,搖勻,按 1.3.2操作 ,分別于 20、40、60、80、100、120、140、160 min測(cè)定吸光度,RSD=0.28%.

1.3.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批藥材粉末 5份,分別按上述方法制備供試液,按 1.3.2操作并測(cè)定吸光度 A,RSD=0.24%.

1.3.7 回收率試驗(yàn)

精確稱(chēng)取已知濃度的桃葉鴉蔥多糖樣品 5份各 6.0 mg,加水溶解后,定容至 100 mL容量瓶中,搖勻,精確吸取 1 mL,分別加入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.2 mg,按 1.3.2操作,測(cè)定吸光度,得平均加樣回收率為 101.7%,RSD=0.61%.

1.3.8 樣品多糖的含量分析

取各供試品溶液,按 1.3.2方法操作,測(cè)定吸收值,從回歸方程中求出供試液中葡萄糖的含量,按下式計(jì)算樣品中多糖含量:多糖含量 (%)=C×D ×F×100/W.

2 結(jié)果與討論

在桃葉鴉蔥多糖的含量測(cè)定中,因較難得到相應(yīng)多糖對(duì)照品,采用葡萄糖代替對(duì)照品,測(cè)定樣品中多糖的相對(duì)含量.作者以比色法測(cè)定樣品中的單糖,通過(guò)單糖和多糖的換算因子計(jì)算藥材中多糖,結(jié)果見(jiàn)表1.

從表1可知,不同產(chǎn)地桃葉鴉蔥多糖含量有一定的差異,其中內(nèi)蒙古產(chǎn)的桃葉鴉蔥多糖含量最高,山東產(chǎn)的桃葉鴉蔥多糖含量最低.可能與所處生長(zhǎng)環(huán)境緯度及氣候有關(guān).

表1 不同產(chǎn)地桃葉鴉蔥多糖的含量 %

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DETERM I NATI ON OF POLYSACCHAR I DES OFSCORZONERA SINENSISOF D IFFERENT PLACES

YANG Hui1,L IXiu-rong2
(1.Phar m acy Departm ent,Hebei N orth University,Zhangjiakou075000,China;2.Phar m acy Departm ent of Shijingshan Hospital,B eijing100043,China)

The article extracted polysaccharides fromScorzonera sinensisof different places by water extraction and alcohol precipitation,and determined the content of the polysaccharides by phenol-sulphuric acid method.The results showed that theScorzonera sinensisof differentplaces had different contentsof polysaccharides,and the content of polysaccharides ranged from 12.75%to 18.69%.

Scorzonera sinensis;polysaccharide;content determination;phenol-sulfuric acid method;spectrophotometry

TS201.2

B

1673-2383(2010)05-0059-03

2010-07-22

楊輝 (1972-),男,河北赤城人,碩士,講師,主要從事藥物化學(xué)教學(xué)與科研.