替硝唑氯己定洗劑的制備和質(zhì)量控制

黃德光

（湖南省安仁縣人民醫(yī)院，湖南安仁 423600）

替硝唑氯己定洗劑的制備和質(zhì)量控制

黃德光

（湖南省安仁縣人民醫(yī)院，湖南安仁 423600）

目的：建立制備替硝唑氯己定洗劑及含量測定方法。方法：以替硝唑和氯己定為主藥制備替硝唑氯己定洗劑，采用高效液相色譜法直接測定兩主藥含量。結(jié)果：替硝唑氯己定洗劑配伍合理，質(zhì)量可控。結(jié)論：該洗劑制備工藝簡單、質(zhì)量穩(wěn)定、含量測定方法準確。

替硝唑；氯己定；洗劑；高效液相色譜法

替硝唑氯己定是臨床使用較廣的藥物，常與頭孢類抗生素交替使用。其是對厭氧菌和原蟲感染有較高活性的藥物，是繼甲硝唑后的硝基咪唑類衍生物。它不僅克服了甲硝唑的不良反應(yīng)，而且具有在體內(nèi)分布廣、耐藥性低、療效高的特點。其作用原理是硝基被還原成一種細胞毒，從而作用于細菌的DNA代謝過程，促使細菌死亡。氯己定的機制為抑制其氧化還原反應(yīng)，使原蟲的氮鏈發(fā)生斷裂，從而殺死。但在替硝唑氯己定制劑中，由于替硝唑、氯己定紫外線吸收光譜相互重疊，干擾含量測定。因此，筆者建立了以高效液相色譜法（HPLC）同時測定替硝唑氯己定溶液中兩主藥含量的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

本組實驗采用LC-1OATvp液相色譜儀：日本島津。N2010色譜工作站 （中國科學(xué)院生產(chǎn)）。微型旋渦振蕩器（WH-1，上海滬西分析儀器廠），離心機（80-2上海手術(shù)器械廠）。2010 A紫外檢測器，2010 A柱溫箱，2010 A工作站。Milli-labo純水儀，sartorius BP211 D電子天平。

1.2 制備方法

替硝唑?qū)φ掌?（中國藥品生物制品檢定所，批號100336-200402），氯己定（上海人民制藥廠）。替硝唑200mg，氯己定 1 200mg，甘油 5 g，三乙醇胺 2.0 g，95%乙醇 25 g，水加到1 000 ml。加適量水使其充分溶脹，放置1～2 d后攪拌溶解，用三乙醇胺調(diào)pH至6左右；將替硝唑溶于95%乙醇，加甘油混合；然后合并兩液，加入溶解的透明質(zhì)酸鈉，再加水至100 g攪拌均勻。標準使用液：取一定量上述標準儲備液混合，用超純水逐級稀釋，配成替硝唑氯己定濃度為1.0mg/m l的混合標準使用液。

1.3 實驗條件

C18色譜柱 5 μm，（250mm×4.6mm），i.d； 柱溫：40℃；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.025mol/L磷酸溶液[取磷酸 0.7ml，置1 000ml量瓶中，加水約 800m l、三乙胺1.8ml，再加水至刻度，搖勻]（20∶80）為流動相；紫外可見檢測器，檢測波長250 nm。

1.4 實驗方法

取本品1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，密塞，稱翼定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取樣液與標準應(yīng)用液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

替硝唑氯己定中待測組分計算公式：Xy=Cs×Va

Xy為樣品中替硝唑氯己定的含量（μg）；Cs為由標準曲線查出的樣液中替硝唑氯己定濃度（pg/ml）；Va為樣品體積（ml）。

2 結(jié)果

2.1 色譜柱的平衡

待測組分與流動相中的緩沖溶液生成的離子對化合物易在色譜柱上產(chǎn)生吸附，可造成柱壓的變化，對色譜柱的柱效影響非常明顯。為防止壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力，需對色譜柱進行再生處理，使其恢復(fù)到初始狀態(tài)。通常采用5～10倍柱容積或者與分析周期等長時間的流動相流經(jīng)色譜柱，使固定相與流動相達到完全平衡。本實驗在一次色譜分離之后先用有較大洗脫能力的甲醇沖柱5 min，再用流動相沖柱10min使色譜柱達到平衡。在完成色譜分析之后，采用超純水、甲醇沖夠足夠的時間以充分沖掉色譜柱上的吸附物，保護色譜柱，延長其使用壽命。筆者比較含相同比例的不同有機相的流動相體系，甲醇更合適本實驗的分離體系，故選擇甲醇與緩沖溶液作為流動相進行優(yōu)化。

2.2 柱溫的選擇

固定其他條件，控制色譜柱柱溫分別為20℃、40℃、60℃、80℃進行實驗。實驗結(jié)果表明，當(dāng)色譜柱溫為60℃和65℃時，替硝唑及氯己定的色譜峰發(fā)生拖尾或者重疊；柱溫為40℃時，兩種組分的分離度均＞1.5、有較好的峰形和響應(yīng)值。故本實驗選擇色譜柱溫為40℃。

2.3 精密度實驗

本組實驗按選定的HPLC色譜條件，在同一天內(nèi)連續(xù)8次測定混合標準溶液，以各組分的峰面積，計算日內(nèi)精密度（以相對標準偏差RSD表示）。本法變異系數(shù)為1.02%～1.16%，符合測定要求的2%以內(nèi)。具體情況見表1。

表1 批內(nèi)精密度實驗（mg/m l）

2.4 準確度實驗

本組實驗還同時使用了己知含量的樣品進行了加標回收實驗。分別加入高、低兩種濃度水平的混和標準溶液，根據(jù)樣品含量和加標后測定值計算加標回收率，由實驗結(jié)果可知，替硝唑、氯己定的回收率分別為102.4%和98.6%，均有較好的回收率。具體情況見表2。

表2 批內(nèi)準確度實驗（m g/m l）

2.5 穩(wěn)定性實驗

按中藥穩(wěn)定性實驗要求 ，本品室溫存放，溫度15～30℃，相對濕度50%～90%，對不同批號的3批替硝唑氯己定洗劑進行3個月、1年的穩(wěn)定性考察，檢驗項目包括性狀、鑒別、均勻度、水分及菌檢。結(jié)果表明，檢品1年內(nèi)均無明顯變化，符合質(zhì)量標準規(guī)定。

3 討論

替硝唑是一種新型的抗厭氧菌藥物，效果較甲硝唑好，副作用小[1]。根據(jù)文獻報道，感染根管的細菌主要是厭氧菌。因此替硝唑已為治療口腔疾病首選抗生素藥物[2]。研究證明，感染根管及根尖周炎是以厭氧菌為主要并有需氧菌的混合感染[3]。除厭氧菌外，尚有一些革蘭陽性菌。替硝唑?qū)Ω鞣N厭氧菌有明顯殺菌作用，能殺滅根管內(nèi)及根尖周的厭氧菌。氯己定為廣譜抗菌藥。與替硝唑有協(xié)同作用，增強了抗菌能力，擴大了抗菌譜。當(dāng)前越來越多研究證明厭氧菌在牙髓病及根尖病感染中有著重要意義[4]。牙髓病及根尖周病雖經(jīng)根管制備、消毒、沖洗，但仍有部分細菌存留，易在適當(dāng)條件下復(fù)發(fā)。替硝唑粉+氯己定混合調(diào)成糊狀充填根管能繼續(xù)抑制和消滅存留在根管及根尖周的厭氧菌，防止再感染，從而取得良好效果[5]。

HPLC是發(fā)展較快也較成熟的分析方法，具有高效、高速、高靈敏度及高度自動化等特點，尤其適用于高沸點、不能氣化、熱穩(wěn)定性差的有機物及各種離子的分離分析。它是一種非破壞性的技術(shù)手段，可以達到制備、定性、定量的目的[6]。包括以紫外、紫外聯(lián)合示差折光、二極管陣列、熒光檢測器以及質(zhì)譜為檢測器的幾種方法。不同的檢測器采用不同的樣本處理方式。有文獻報道對辣椒樣本用0.08 mol/L磷酸鹽緩沖液-乙醇（1∶1）直接勻質(zhì)后超聲波處理，定容過濾后加一定量溴化四丁基胺和磷酸緩沖液，pH 3.0，再以水定容后用真空萃取裝置Sep-pakVac C18柱進行萃取。本實驗選擇甲醇-水作為流動相，并通過紫外線掃描，替硝唑在317 nm處有最大吸收度，氯己定在278 nm處有最大吸收度。兼顧二者吸收度的大小，故選擇250 nm作為檢測波長。研究結(jié)果表明，本方法簡單可行，重現(xiàn)性好，能同時測定替硝唑氯己定洗劑中替硝唑、氯己定的含量。

本文所建立的方法能同時分離測定替硝唑、氯己定，該方法具有重現(xiàn)性好，靈敏度及準確度較高且操作簡便、快速，被測組分損失少，試劑用量亦少的特點，在藥物檢驗中具有實際應(yīng)用價值。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[2]陳樹聲,俞蒙.乳酸左氧氟沙星葡萄糖注射液細菌內(nèi)霉素的測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2003,23(7):447.

[3]周謙,張春惠,張麗麗.應(yīng)用替硝唑治療細菌性陰道炎體會[J].中華中西醫(yī)雜志,2004,5(3):118.

[4]李方實,俞斌.無機與分析化學(xué)實驗[M].南京:東南大學(xué)出版社,2002.

[5]高素蓮,周寧國.現(xiàn)代分離純化與分析技術(shù)-在高分子材料研究中的應(yīng)用[M].合肥:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社,2004.

[6]曹紹聰,李鋼洪,歐陽麗英.復(fù)方替硝唑洗液的制備及質(zhì)量控制[J].中國藥房,2005,16(9):673.

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2010-02-21）