劉加元 周偉

(1.湖北省中山醫(yī)院藥學(xué)部中藥房 武漢 430033; 2.湖北省藥品檢驗(yàn)所 武漢 430028)

雞血藤片質(zhì)量控制研究①

劉加元1周偉2

(1.湖北省中山醫(yī)院藥學(xué)部中藥房 武漢 430033; 2.湖北省藥品檢驗(yàn)所 武漢 430028)

目的 對(duì)雞血藤片進(jìn)行質(zhì)量控制。方法 采用薄層色譜法(TLC)鑒別雞血藤片中的芒柄花素,用高效液相色譜法測(cè)定其中芒柄花素的含量;以十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑,乙腈:水(33:67)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)250nm,柱溫30℃,流速1.0mL/min。結(jié)果 TLC鑒定方法專(zhuān)屬性強(qiáng),芒柄花素在進(jìn)樣量為0.01025ug～0.5125ug／mL(r=1.000)范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系。測(cè)得回收率平均值為99.10%,RSD為0.79%(n=6);供試品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)論 該法簡(jiǎn)便、迅速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好,可用于雞血藤片的質(zhì)量控制。

芒柄花素 質(zhì)量控制 薄層色譜法 高效液相色譜法

雞血藤片主要用于補(bǔ)血活血,舒筋活絡(luò),可治療腰膝酸痛、肢體麻木、風(fēng)濕麻痹、經(jīng)閉、痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)等[1]。本研究采用高效液相色譜法測(cè)定雞血藤片中其中一個(gè)有效成分芒柄花素的含量,且用薄層色譜法鑒定芒柄花素,建立簡(jiǎn)便、迅速、準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性強(qiáng)的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

DIONEX高效液相色譜儀;ULTIMAT3000;分析天平AG135和BS210S(梅特勒-托利多儀器有限公司);UV-500紫外分光度計(jì) (英國(guó)熱電公司);芒柄花素對(duì)照品(批號(hào):111703-200501)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;利川香連藥業(yè)(批號(hào):090601、090701、090801);洛陽(yáng)天生藥業(yè)(090109);江西中興漢方藥業(yè)(090102);乙腈為色譜純,水為重蒸水;其它試劑均為分析純。

2 質(zhì)量控制

2.1 性狀

本品為包糖衣型的片劑。

2.2 鑒別

取本品,除去糖衣,研細(xì),取約2g,加甲醇30mL,超聲處理30min,濾過(guò),液蒸干,殘?jiān)铀?0mL使溶解,用乙醚振搖提取3次,每次50mL,合并乙醚提取液,蒸干,殘?jiān)訜o(wú)水乙醇5mL使溶解,作為供試品溶液;另取雞血藤對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn),吸取上述二種溶液各10μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷∶乙酸乙酯(2∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,105℃加熱5min,置紫外燈下(365nm)檢視。檢驗(yàn)結(jié)果:供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

色譜柱:HypersilODSC18(150mm×4.6mm,5um);流動(dòng)相:乙腈∶水(33∶67);檢測(cè)波長(zhǎng)250nm;流速:1.0mL/min;柱溫為30℃。取“3.2”、“3.3”、“3.4”項(xiàng)下供試品、標(biāo)準(zhǔn)品、空白輔料溶液進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果空白輔料對(duì)主藥無(wú)干擾。

3.2 供試品的溶液制備。

取本品20片,除去包衣,精密稱(chēng)定,研細(xì),取約2g,精密稱(chēng)定,精密加入甲醇50mL,稱(chēng)定重量,加熱回流提取1h,放冷,再稱(chēng)定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),精密量取續(xù)濾液25mL于蒸發(fā)皿,揮干溶劑,殘?jiān)铀?0mL分次溶解并轉(zhuǎn)移到分液漏斗,用乙酸乙酯振搖提取5次,每次30mL,合并乙酸乙酯提取液,揮干溶劑,殘?jiān)蛹状际谷芙?轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),即得

3.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備

取芒柄花素對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,用甲醇制成5.125μg/mL的溶液,即得。

3.4 空白輔料溶液的制備

取缺雞血藤提取物的陰性對(duì)照樣品,照供試品溶液制備方法制備,即得。分別吸取上述3種溶液各10uL,按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果在陰性對(duì)照溶液色譜圖中,在芒柄花素峰位置處無(wú)干擾色譜峰。

表1 芒柄花素回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.5 線(xiàn)性關(guān)系考察

取芒柄花素對(duì)照品適量,加甲醇制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(μg/mL:1.025、2.05、5.125、10.25、20.5、25.625、51.25)。照含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定峰面積。以芒柄花素濃度對(duì)峰面積進(jìn)行線(xiàn)性回歸,得回歸方程Y=1.04X-0.401r=1.000,芒柄花素在進(jìn)樣量為0.01025 μ g～0.5125 μ g(進(jìn)樣量10μL)范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取雞血藤片(批號(hào):090102),照含量測(cè)定項(xiàng)下制備供試品溶液。按含量測(cè)定項(xiàng)下方法在0、1、2、3、4、5、6h進(jìn)樣進(jìn)行峰面積測(cè)定,結(jié)果:RSD為0.7%,表明供試品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批雞血藤片共稱(chēng)取6份(批號(hào):090102),按“3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,并按“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以芒柄花素的含量計(jì)算。結(jié)果,芒柄花素的RSD為0.87%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。

3.8 回收率試驗(yàn)

取已知芒柄花素含量的雞血藤片(批號(hào):090102含量為74.01ug/g)6份,每份約1g,分別加入芒柄花素對(duì)照品85.2ug,按含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定。結(jié)果測(cè)得回收率平均值為99.10%,RSD為0.79%,表明方法回收率符合相關(guān)規(guī)定(表1所示)。

3.9 樣品含量測(cè)定

分別取3個(gè)廠(chǎng)家的雞血藤各20片,按“3.2”項(xiàng)下方法制備供試品液,精密吸取10uL進(jìn)樣分析,記錄色譜;另取“3.4”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)品溶液,同法測(cè)定,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品的含量,結(jié)果見(jiàn)表2

4 討論

我們對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液在200～300nm內(nèi)進(jìn)行紫外光掃描結(jié)果發(fā)現(xiàn)在250nm處有最大的吸收,在試驗(yàn)中我們選擇甲醇∶水(65∶35);乙腈∶水(33∶67)作為流動(dòng)相,比較發(fā)現(xiàn)乙腈∶水為流動(dòng)相的色譜分離度效果最佳,故采用。本方法檢測(cè)有效成分芒柄花素簡(jiǎn)便,迅速、準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性強(qiáng)、可檢測(cè)雞血藤片中的有效成分芒柄花素的含量,從而用于對(duì)雞血藤片進(jìn)行質(zhì)量控制。

[1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:212～213.

[2]陳蕙芳.植物活性成分辭典[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2001.

[3]海力茜,徐建軍.高效液相色譜法測(cè)定新疆紅芪中芒柄花素的含量[J].華西藥學(xué)雜志,2005:20(5):433.

R286.0

A

1674-0742(2011)05(c)-0150-02

劉加元(1974～):男,湖北武漢人,湖北省中山醫(yī)院藥學(xué)部中藥房,主管藥師,研究方向?yàn)獒t(yī)院藥學(xué)。周偉(1976～):男,湖北武漢人,湖北省藥品檢驗(yàn)所中藥室,副主任藥師,研究方向?yàn)樗幤窓z驗(yàn)。

2011-02-16