淫羊藿總黃酮對高脂血癥大鼠血清脂聯(lián)素水平的影響

蔡 輝 趙智明 趙凌杰 董曉蕾

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院（江蘇南京210002）

淫羊藿為為小檗科淫羊藿的多年生植物，主要含淫羊藿總黃酮。淫羊藿苷為淫羊藿總黃酮主要成分。研究顯示淫羊藿總黃酮有改善冠狀動脈血管內(nèi)皮功能［1-2］。本實驗研究高脂血癥模型大鼠經(jīng)淫羊藿總黃酮處理后主動脈內(nèi)皮改變及血漿脂聯(lián)素水平的變化，探討淫羊藿總黃酮對高脂大鼠血管內(nèi)皮的保護(hù)作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及試藥 （1）動物：剛斷乳的SD雄性大鼠35只，平均體質(zhì)量約60g，清潔型，由南京軍區(qū)南京總醫(yī)院動物實驗中心提供［實驗動物使用許可證號：SYXK（蘇）2003-0032］。 （2）試藥：淫羊藿總黃酮由南京澤朗醫(yī)藥公司合成，其中淫羊藿總黃酮含量占90%。脂聯(lián)素ELISA試劑盒購于美國R＆D公司；甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 造模及給藥 所有大鼠均適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為自配方高脂飼料（魚粉3%、豬油12%、白蔗糖5%、雞蛋10%、膽固醇2%、膽酸鹽0.5%、甲基硫氧嘧啶0.2%和67.3%基礎(chǔ)飼料）組（26只）和對照組（予普通飼料，9只）。高脂飼料進(jìn)食量控制在15g（100g/d），分早、中、晚三餐定時定量給予，第12周末從大鼠眶后靜脈抽血檢測血脂水平以確定模型是否復(fù)制成功。再將高脂飼料組大鼠隨機(jī)分為模型組 （8只）和低劑量淫羊藿總黃酮組（100mg/kg，9 只）、高劑量淫羊藿總黃酮組（200mg/kg，9 只）。 模型組及高、低劑量淫羊藿總黃酮組繼續(xù)喂飼高脂飼料，并予相應(yīng)藥物灌胃，對照組和模型組予空白溶劑灌胃。各組均給藥4周。

1.3 標(biāo)本采集 12周末從大鼠眶后靜脈抽取血液4mL，常規(guī)消毒。實驗結(jié)束后第16周，禁食24h，于次日上午8時，用20%氯胺酮，以1mL/100g劑量麻醉后，剪開胸腹腔，暴露心臟，左心室穿刺取血5mL，室溫靜置1h后，3000r/min離心 5min，分離血清置-20℃冰箱保存；于冰盤中分離主動脈，置液氮中保存。

1.4 血脂指標(biāo)檢測 甘油三酯 （TG）用TPO-PAP法，膽固醇（TC）用CHOD-PAP法，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）用選擇性沉淀法，均按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 主動脈病理檢測 大鼠主動脈弓與胸主動脈交界處取材，10%中性甲醛固定，石蠟包埋，水平橫切面制備石蠟切片，厚度4μm，蘇木素伊紅（HE）染色，100倍光鏡下觀察。

1.6 脂聯(lián)素（ADP）檢測 脂聯(lián)素用ELISA法檢測，應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠ADP水平，每份標(biāo)本測2次取平均值，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以表示，多組資料組間比較用單因素方差分析，方差齊性用LSD，方差不齊用Dunnett T3。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組血脂及ADP水平比較 見表1，表2。造模后12周時（干預(yù)前）高脂飲食組TG、TC、LDL-C較對照組明顯升高 （＜0.01）。實驗16周末（干預(yù)后），模型組TG、TC顯著高于對照組和高、低劑量淫羊藿總黃酮組（P＜0.05或0.01），模型組HDL-C明顯高于對照組（P＜0.01），與高、低劑量淫羊藿總黃酮組比較無明顯差異（P＞0.05）；模型組LDL-C高于對照組及高劑量淫羊藿總黃酮組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。模型組血清ADP水平顯著低于其他各組（P＜0.05）；高劑量淫羊藿總黃酮組ADP水平較低劑量高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 第12周時（干預(yù)前）血脂水平比較 （mmol/L

表1 第12周時（干預(yù)前）血脂水平比較 （mmol/L

與對照組比較，*P＜0.05。

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表2 干預(yù)后各組血脂及脂聯(lián)素水平比較

表2 干預(yù)后各組血脂及脂聯(lián)素水平比較

與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與高劑量淫羊藿總黃酮組比較，▲P＜0.05。

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2.2 主動脈病理檢測結(jié)果 見圖1。光鏡下可見：對照組血管壁結(jié)構(gòu)清晰、內(nèi)皮細(xì)胞完整無脫落，內(nèi)膜薄，中層平滑肌層均勻、厚度正常，外層為疏松結(jié)締組織；模型組血管內(nèi)皮細(xì)胞部分脫落，內(nèi)膜增厚，血管壁向管腔內(nèi)突出，可見中膜平滑肌增生、排列紊亂；低劑量淫羊藿總黃酮組可見內(nèi)膜輕度增厚，少量缺損，未見明顯平滑肌增生；高劑量淫羊藿總黃酮組沒有明顯的病理改變。

圖1 各組主動脈病理學(xué)切片

3 討 論

高脂飲食為動脈粥樣硬化獨立危險因素，在沒有代謝綜合征情況下高脂飲食可增加血漿TC及LDL，并增加動脈粥樣硬化形成危險［3］。其中氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）和TC會對動脈內(nèi)膜造成功能性損傷，出現(xiàn)血管內(nèi)皮損傷［4］。本研究利用高脂飲食飼養(yǎng)大鼠12周后，發(fā)現(xiàn)大鼠血脂水平增高，模型組TG、TC均明顯升高，主動脈病理切片示出現(xiàn)不同程度的內(nèi)膜增厚、斷裂、脫落、平滑肌增生，符合內(nèi)皮損傷表現(xiàn)，形成高脂血癥內(nèi)皮損傷模型。藥物干預(yù)后可見，淫羊藿總黃酮能降低血脂（TG、TC）水平，減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，說明淫羊藿總黃酮通過調(diào)節(jié)血脂改善血管內(nèi)皮。

ADP為白色脂肪組織分泌的唯一與體內(nèi)脂含量負(fù)相關(guān)的脂肪因子，為診斷心血管疾病的一個新的生物標(biāo)志物［5］，其水平隨著不斷增加的血脂水平而下降。ADP通過激活cAMP和AMP激酶的活性來抑制TNF-α誘導(dǎo)的核因子κB，從而起到抗炎、抗氧化等作用，改善高脂所致的內(nèi)皮細(xì)胞損傷［6-8］。并有研究顯示高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠可出現(xiàn)血管內(nèi)皮損傷，舒張功能障礙，通過加入ADP進(jìn)行孵化，可改善動脈血管內(nèi)皮的功能［9］。ADP素抑制動脈粥樣硬化主要通過抑制單核細(xì)胞聚集和吞噬細(xì)胞的激活，并可抑制血管內(nèi)皮損傷及增加內(nèi)皮性NO的量，改善內(nèi)皮細(xì)胞功能［10］。本研究顯示，高脂血癥模型組較對照組ADP水平顯著下降，進(jìn)一步證明了低ADP與高脂血癥及其誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮損傷有關(guān)。有研究顯示ADP改善高脂血癥所致的血管內(nèi)皮損傷，可能與增加eNOS的活性，抑制iNOS活性相關(guān)，從而增加NO的量，減輕氧化應(yīng)激水平［8］。淫羊藿總黃酮可顯著提高血漿ADP水平，高劑量治療組較低劑量治療組改善更為明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。病理切片示淫羊藿組血管未見明顯改變，未見脂質(zhì)沉積，內(nèi)皮完整，平滑肌未見增厚。提示淫羊藿總黃酮可能通過提高血漿ADP水平發(fā)揮保護(hù)血管內(nèi)皮，抗動脈粥樣硬化作用。

本研究顯示淫羊藿總黃酮通過調(diào)節(jié)高脂血癥大鼠血脂及提高血漿ADP水平，從而達(dá)到抗高脂癥所致的早期動脈粥樣硬化血管內(nèi)皮損傷。

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