蟲草素對人肝癌Bel-7402細胞抑制及作用機制的研究

盧 群，羅少洪，何偉彬，梅文杰

(廣東藥學(xué)院，廣東廣州 510006)

蟲草素是蟲草的主要活性成分，具有抗腫瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白質(zhì)激酶活性等作用［1－2］。研究證明蟲草素能抑制mRNA的合成，誘導(dǎo)細胞凋亡，促進細胞分化，對多種腫瘤細胞的生長具有抑制作用［1－2］。誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡以及作用靶點已成研究的焦點。為探討蟲草素誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的新靶點，對蟲草素作用人肝癌Bel-7402細胞后的抑制和凋亡及p53、Bcl-2表達變化進行研究，尋找蟲草素對人肝癌Bel-7402細胞抑制的新機制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器 蟲草素(廣東藥學(xué)院梅文杰教授提供)、人肝癌Bel-7402細胞(廣東藥學(xué)院陸幸妍副教授提供)、MTT及新生牛血清(美國Sigma公司)、PRMI 1640(美國 Gibco公司)、p53(博奧森公司)、Bcl-2(Sant Cruz)、酶標儀(美國Bio SN206976)、熒光顯微鏡(Olympus BX51)、流式細胞儀(Epics-XL Beckman-Coulter)

1.2 細胞抑制實驗 MTT法檢測細胞抑制率。按下列公式計算細胞抑制率:抑制率/%=(1－實驗組平均OD值/對照組平均OD值)×100%

1.3 倒置相差顯微鏡觀察 不同濃度(0、25、50、100 mg·L－1)蟲草素作用細胞，倒置相差顯微鏡觀察細胞生長狀態(tài)。

1.4 Hoechst 33258染色檢測 不同濃度(0、25、50、100 mg·L－1)蟲草素作用細胞，Hoechst 33258染色觀察細胞形態(tài)。

1.5 流式細胞儀(FCM)檢測 采用Annexin V聯(lián)合 PI染色法檢測細胞凋亡率。

1.6 Western blot檢測 采用常規(guī)Western blot技術(shù)檢測p53、Bcl-2的表達。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 11.0進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)用±s表示，兩組數(shù)據(jù)較采用t檢驗，樣本間比較采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 細胞抑制 不同濃度蟲草素對Bel-7402細胞有明顯的抑制作用，呈濃度時間依賴性關(guān)系。在25 mg·L－1蟲草素作用2 d，抑制率達49.6%(P＜0.05)。

2.2 細胞生長狀態(tài) 不同濃度蟲草素作用Bel-7402細胞2 d有明顯的抑制作用，隨著濃度增加視野范圍內(nèi)細胞明顯死亡。

2.3 細胞形態(tài) 不同濃度蟲草素作用Bel-7402細胞24 h，大量細胞的染色質(zhì)邊集、凝聚、核碎裂、細胞核固縮及凋亡小體產(chǎn)生。

2.4 細胞凋亡 0、25、50、100 mg·L－1蟲草素作用 Bel-7402細胞2 d，細胞凋亡率分別為2.5%、20.6%、27.9%、53.1%，均高于對照組的2.5%(P＜0.05)。

2.5 基因表達 50 mg·L－1蟲草素作用Bel-7402細胞，在30 min內(nèi)p53表達水平增加、24 h后Bcl-2表達水平下降。

3 討論

蟲草素對Bel-7402細胞活性呈濃度時間依賴性抑制，同時誘導(dǎo)細胞凋亡，這與文獻報道相一致［3－5］。Western blot檢測結(jié)果顯示蟲草素可引起使凋亡基因p53表達量增加，而使抗凋亡基因Bcl-2表達量下降［6］。

綜上所述，蟲草素可明顯抑制Bel-7402細胞增殖，且誘導(dǎo)凋亡，其機制是上調(diào)p53、下調(diào)Bcl-2，促進細胞凋亡達到抗腫瘤細胞的效果，詳細機制有待進一步研究。

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