周 軍 陳長(zhǎng)生

(新疆塔城地區(qū)畜牧科技研究推廣中心，新疆塔城市 834700)

養(yǎng)殖生產(chǎn)中抗生素的濫用，導(dǎo)致病原耐藥性的產(chǎn)生，給疾病的治療和預(yù)防帶來(lái)了巨大的困難，為了更好的指導(dǎo)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）用藥，筆者分離培養(yǎng)病料中的細(xì)菌，同時(shí)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料

于2010年5月無(wú)菌采集塔城市某豬場(chǎng)病死豬的心臟血、肝臟、脾臟、喉頭等。

1.1.2 主要器材

全自動(dòng)鑒定及藥敏測(cè)試儀 （ATB Expression）、HPX—9272MBE數(shù)顯不銹鋼電熱培養(yǎng)箱、數(shù)碼顯微鏡、SW-CJ-2FD超凈工作臺(tái)、LDIX—40BI型立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器、溫箱、冰箱等。

1.1.3 藥敏紙片

藥敏紙片購(gòu)自北京天壇藥物生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。

1.1.4 培養(yǎng)基及主要試劑

鮮血瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、各種糖發(fā)酵培養(yǎng)基、西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基、硝酸鹽、吲哚培養(yǎng)基。甲基紅、溴甲酚紫、α-萘酚酒精溶液、歐立希氏吲哚試劑、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、蛋白胨、葡萄糖、乳糖、蔗糖、氯化鈉、磷酸二氫鉀等。

1.1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康小白鼠6只，體重17～24g雌雄各半；健康家兔1只。

1.2 方法

1.2.1 直接涂片鏡檢

無(wú)菌采取病豬的心臟血、肝臟、脾臟、喉頭等直接抹片，進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡檢查。

1.2.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

無(wú)菌采取病豬的心臟血、肝臟、脾臟、喉頭，接種于鮮血瓊脂平板和普通瓊脂平板中，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，純化培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 生化試驗(yàn)

挑選單個(gè)菌落進(jìn)行常規(guī)生化實(shí)驗(yàn)，觀察結(jié)果。

1.2.4 動(dòng)物接種試驗(yàn)

挑選單個(gè)菌落用蒸餾水稀釋到1個(gè)麥?zhǔn)蠁挝坏木?，?只小白鼠，每只小白鼠腹腔注射菌液0.2mL；取2只小白鼠腹腔注射蒸餾水0.2mL做對(duì)照。同時(shí)用菌液滴入家兔一側(cè)結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)為對(duì)照。

1.2.5 藥敏試驗(yàn)

將分離的菌株接種于瓊脂平板上，貼上藥敏紙片 （8種藥物），37℃恒溫培養(yǎng)36小時(shí)，觀察抑菌圈直徑。

1.2.6 細(xì)菌鑒定儀鑒定

取1～2個(gè)純化的菌落，用生理鹽水稀釋到0.5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝?，取?xì)菌菌液200μL接種于一定量的培養(yǎng)液 （按照細(xì)菌鑒定儀的說(shuō)明書(shū)操作）；用連續(xù)加樣器將帶有細(xì)菌的培養(yǎng)基，分別加入鑒定條的32個(gè)孔，每孔135μL，蓋好鑒定條的蓋子，放入溫箱37℃恒溫培養(yǎng)8小時(shí)。打開(kāi)蓋子，用細(xì)菌鑒定儀鑒定。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 細(xì)菌形態(tài)

在顯微鏡下觀察到兩端鈍圓的革蘭氏陽(yáng)性，微彎曲、細(xì)長(zhǎng)的小桿菌。有的連成鏈狀，有的呈 “V”型、環(huán)狀或柵欄狀，此外還可見(jiàn)長(zhǎng)絲狀的菌體。

2.2 菌落形態(tài)

鮮血培養(yǎng)基出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，普通瓊脂培養(yǎng)基上呈中等大小的扁平菌落，表面光滑、邊緣整齊、不透明；中間也有圓形光滑，透明水樣的極小菌落；在肉湯培養(yǎng)基中呈均勻渾濁，有顆粒沉淀。

2.3 生化試驗(yàn)

發(fā)酵葡萄糖、水楊苷，24小時(shí)即產(chǎn)酸；甘露醇為陰性，在7天內(nèi)不發(fā)酵蔗糖和乳糖。不產(chǎn)硫化氫和吲哚，不還原硝酸鹽以及不利用枸櫞酸鹽。由于條件所限，生化試驗(yàn)未做全。

2.4 動(dòng)物試驗(yàn)

小鼠腹腔注射后，出現(xiàn)體溫升高，精神沉郁，食欲減少或廢絕，口渴，全身衰弱、僵硬、咳嗽、腹瀉、皮疹、呼吸困難、耳部和腹部皮膚發(fā)紺的癥狀；96小時(shí)注射菌液的小鼠全部死亡，對(duì)照組正常。

解剖發(fā)現(xiàn)脾臟、淋巴結(jié)、肺臟、腎上腺、心肌、胃腸道中有較小的壞死灶；取心血、肝臟、脾臟直接做抹片，鏡檢發(fā)現(xiàn)大量呈 “V”型、柵欄狀或長(zhǎng)絲狀的革蘭氏陽(yáng)性桿菌。兔左眼眼結(jié)膜滴入菌液72小時(shí)出現(xiàn)化膿性結(jié)膜炎。

2.5 藥敏試驗(yàn)

測(cè)量抑菌圈的直徑，按其大小報(bào)告敏感程度。結(jié)果顯示該菌株對(duì)頭孢唑林鈉、慶大霉素、復(fù)方磺胺甲惡唑、羅紅霉素高敏，對(duì)乙酰螺旋霉素、諾氟沙星中敏，青霉素鈉、呋喃唑酮低敏。

2.6 細(xì)菌鑒定儀鑒定結(jié)果

確診為李氏桿菌。

3 小結(jié)

通過(guò)鏡檢、生化試驗(yàn)、細(xì)菌鑒定儀鑒定確診為李氏桿菌病，通過(guò)藥敏實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該菌株對(duì)頭孢唑林鈉、慶大霉素、復(fù)方磺胺甲惡唑、羅紅霉素高敏，建議該豬場(chǎng)使用這些藥物進(jìn)行治療。

由于該病多呈零星散發(fā)，發(fā)病率較低，且第一頭發(fā)病時(shí)，病程短、死亡急，有的僅見(jiàn)神經(jīng)癥狀，有的甚至不見(jiàn)任何癥狀就突然死亡。

一旦發(fā)生該病，常誤診為常見(jiàn)病如偽狂犬病、水腫病、豬瘟、乙腦等，誤診后的治療導(dǎo)致仔豬病死率增加。故在臨床上，要根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、用藥情況結(jié)合剖檢變化和實(shí)驗(yàn)室診斷等進(jìn)行鑒別診斷，做到早確診早治療。

應(yīng)采用一頭發(fā)病全窩用藥的措施，保護(hù)健康豬群，提高治愈率，減少仔豬的死亡。

目前針對(duì)豬李氏桿菌病尚無(wú)很好的控制方案，疫苗尚在研制，因此要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，增強(qiáng)豬只抵抗力，處理好豬只糞尿，減少飼料和環(huán)境中的細(xì)菌污染，定期消毒，嚴(yán)格控制繼發(fā)感染。