注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉制劑安全性研究

邢桂蘭,謝學(xué)立,曾 渝,符 健

(海南醫(yī)學(xué)院海南省藥物安全性評價研究中心,海南海口 271101)

注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉制劑安全性研究

邢桂蘭,謝學(xué)立,曾 渝,符 健

(海南醫(yī)學(xué)院海南省藥物安全性評價研究中心,海南海口 271101)

為考察注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1)制劑的安全性,分別進(jìn)行豚鼠全身過敏性、家兔局部刺激性和家兔紅細(xì)胞溶血性試驗.結(jié)果顯示,動物給藥后未見明顯溶血反應(yīng),家兔耳緣靜脈和股四頭肌未見明顯刺激反應(yīng),豚鼠也無全身過敏反應(yīng).表明本品符合肌肉和靜脈注射用藥安全性要求.

頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉;局部刺激性;過敏性;動物

頭孢呋辛鈉 (Cefuroxime)為第 2代合成頭孢菌素類抗生素[1],對β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定[2],對大多數(shù)革蘭氏陽性菌、陰性菌和厭氧菌均有強(qiáng)的抗菌活性,如:流感嗜血桿菌、卡他莫拉氏菌、化膿鏈球菌、肺炎桿菌、淋病奈瑟球菌等[4]有較好療效,臨床應(yīng)用于呼吸道、泌尿系、腦膜炎、肺炎[3]、眼科手術(shù)[4]等.由于臨床廣泛應(yīng)用,出現(xiàn)了頭孢呋辛鈉耐藥菌,如肺炎桿菌[5]、肺炎鏈球菌[6]、不產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的嗜血桿菌[7]、腸桿菌[8]和產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的大腸桿菌[9]等,并且其耐藥性問題日趨嚴(yán)重.

細(xì)菌耐藥性的最主要機(jī)制是細(xì)菌分泌β-內(nèi)酰胺酶降解抗生素[10],解決這問題最成功的策略是使用β-內(nèi)酰胺酶抑制劑[11].β-內(nèi)酰胺酶抑制劑能抗多數(shù)革蘭氏陽性菌、陰性菌,包括厭氧菌、假單胞菌[12]和不動細(xì)菌屬[13]等,為當(dāng)前抗生素領(lǐng)域發(fā)展的新趨勢.臨床上常使用他唑巴坦、舒巴坦和克拉維酸等β-內(nèi)酰胺酶抑制劑,其中他唑巴坦優(yōu)于后者[10].對細(xì)菌類感染常同時用 2種藥的有:一種是使用抗生素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁生長,另一種是抑制細(xì)菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶,阻止其酶解破壞抗生素[10].在美國使用β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的藥物有:哌拉西林他唑巴坦、氨芐西林舒巴坦、氨芐西林克拉維酸和替卡西林克拉維酸等[11].

Jalil等人發(fā)現(xiàn)頭孢呋辛鈉結(jié)合克拉維酸能顯著提高對產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶金黃葡萄球菌的抗菌活性[14].本項目的前期研究表明,頭孢呋辛鈉與他唑巴坦鈉組成復(fù)方制劑,對大多數(shù)耐藥且產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的細(xì)菌具有很好的協(xié)同抗菌作用.為考察注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1)制劑安全性,筆者對該藥進(jìn)行了全身過敏性、局部刺激性和溶血性等方面的制劑安全性試驗研究,為臨床用藥提供參考.

1 材料與方法

1.1 試驗藥物注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉,白色粉末,0.75 g·瓶-1,配比為m頭孢呋辛鈉:m他唑巴坦鈉=4∶1,即含頭孢呋辛鈉 0.6 g,他唑巴坦鈉 0.15 g,批號:2010630,由?？谄媪χ扑幑煞萦邢薰咎峁?氯化鈉注射液,海南東聯(lián)長富有限公司生產(chǎn),批號:1011051.使用前用氯化鈉注射液溶解注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉,稀釋成質(zhì)量濃度為 0.18 g·mL-1.牛白蛋白,購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,蛋白含量:≥98.0%(以牛白蛋白含量計).

1.2 試驗動物新西蘭家兔,雌雄不拘 (雌性無孕),體質(zhì)量為 2.0～2.5 kg·只-1,由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實驗動物科研服務(wù)部提供,質(zhì)量合格證號:No.HNACSDC20100767.HD豚鼠,雌雄不拘 (雌性無孕),體質(zhì)量 300～400 g,由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供,質(zhì)量合格證號:No.0079332.

1.3 試驗方法[15,16]

1.3.1 溶血性試驗 φ=2%的兔血細(xì)胞混懸液的制備:取家兔心臟采血 20 mL,用玻璃珠去除纖維蛋白,加氯化鈉注射液,搖勻,離心,棄上清液,加氯化鈉注射液洗滌沉淀至上清液無色為止,然后將紅細(xì)胞稀釋成φ=2%的混懸液.溶血性試驗:取試管 7支,按表 1加入各種液體,37℃水浴,開始每隔 15 min觀察 1次,1 h后,每隔 1 h觀察 1次,觀察 3 h.溶血判定標(biāo)準(zhǔn):如溶液澄明紅色為溶血;如溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀,表示有紅細(xì)胞凝集作用;如紅細(xì)胞全部下沉,上層液無色澄明,可判斷為無溶血.

表1 溶血性試驗加樣表 mL

1.3.2 家兔耳緣血管刺激試驗 取健康、耳緣無損傷的家兔 4只,每日每只家兔左側(cè)耳緣靜脈分別注射質(zhì)量濃度為 0.18 g·mL-1的注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1)5 mL,右側(cè)注射等體積氯化鈉注射液,連續(xù) 3次,給藥前、后肉眼觀察給藥血管局部及周圍組織的變化,包括注射局部血管及周圍組織是否有充血、水腫和組織壞死等刺激性反應(yīng)癥狀.末次給藥后 96 h,處死動物,解剖取出注射部位的血管組織,福爾馬林固定,脫水,常規(guī)石蠟包埋,切片,H.E染色,光鏡下觀察有無血管擴(kuò)張、管壁破壞、內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、腔內(nèi)血栓形成、組織變性或壞死等顯著性刺激反應(yīng).

1.3.3 家兔股四頭肌刺激試驗 取健康家兔 4只,左側(cè)股四頭肌內(nèi)分別注入質(zhì)量濃度為 0.18 g·mL-1的注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1)1 mL,右側(cè)股四頭肌內(nèi)注入等體積注射用水作對照,給藥后觀察注射局部肌肉反應(yīng)情況,如充血、紅腫、變性、壞死等.48 h后,處死動物,解剖取出股四頭肌,縱向切開,觀察受試物的局部刺激反應(yīng),按表 2換算成相應(yīng)的反應(yīng)分值,分別計算出左右側(cè)股四頭肌反應(yīng)分值的總和,并以注射部位為中心,取出肌肉,經(jīng)常規(guī)福爾馬林固定、石蠟切片、H.E染色后進(jìn)行病理組織學(xué)檢查.

表2 肌肉刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)

1.3.4 全身過敏試驗 取健康豚鼠 24只,體質(zhì)量 300～400 g,隨機(jī)分為注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉(4∶1)高、低劑量組、陽性對照組和陰性對照組,每組各 6只,隔日每只腹腔分別注射質(zhì)量濃度為 0.18 g·mL-1、0.09 g·mL-1的注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1)和質(zhì)量濃度為的 0.2 g·mL-1牛白蛋白和0.09 g·mL-1的氯化鈉注射液,給藥體積均為 0.5 mL·只-1,連續(xù) 3次.于末次用藥后 14 d,分別一次靜脈注射質(zhì)量濃度為 0.18 g·mL-1、0.09 g·mL-1的注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1)和質(zhì)量濃度為 0.2 g·mL-1的牛白蛋白和 0.09 g·mL-1的氯化鈉注射液進(jìn)行激發(fā),給藥體積均為 1.0 mL·只-1,注射后 30 min內(nèi),觀察動物有無抓鼻、豎毛、咳嗽、呼吸困難、顫抖、休克甚至死亡等過敏反應(yīng).

2 結(jié)果與分析

2.1 溶血性試驗按表 1加樣可見,37℃保溫 4 h,在 1～6號管,上層液無色澄明,紅細(xì)胞全部下沉,未見有溶血和凝集反應(yīng),陽性對照管 (7號管)完全溶血,產(chǎn)生紅色透明溶液,表明質(zhì)量濃度為 0.18 g·mL-1的注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1)無明顯溶血作用.

2.2 家兔耳緣血管刺激試驗家兔耳緣靜脈連續(xù) 3次滴注質(zhì)量濃度為 0.18 g·mL-1的注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1),給藥前后注射部位血管未見明顯充血及水腫,血管邊緣清晰.末次給藥 96 h后,處死動物,病理組織檢查,觀察到注射部位耳緣靜脈壁由內(nèi)膜、中膜和外膜構(gòu)成,內(nèi)膜腔面被覆內(nèi)皮細(xì)胞,中膜有多層平滑肌,外膜為結(jié)締組織,未見明顯病變.

2.3 家兔股四頭肌刺激試驗家兔左股四頭肌注射質(zhì)量濃度為 0.18 g·mL-1的注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1)1 mL,右側(cè)股四頭肌注射等體積的氯化鈉注射液,給藥后 48 h,處死動物,每塊股四頭肌均未見充血、水腫、變性或壞死等明顯刺激反應(yīng);股四頭肌反應(yīng)分值均為 0.病理組織檢查,發(fā)現(xiàn)各取材點橫紋肌結(jié)構(gòu)正常,橫紋清晰,間質(zhì)血管無明顯擴(kuò)張充血,未見明顯病理改變.表明該受試品對家兔股四頭肌無明顯刺激作用.

2.4 全身過敏試驗注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉高、低劑量組和陰性對照組在第 1、2、3次致敏和激發(fā)給藥后即刻至 30 min內(nèi),均未觀察到過敏反應(yīng)癥狀,過敏反應(yīng)均為陰性.陽性對照組在激發(fā)給藥后,發(fā)生咳嗽、呼吸困難、步態(tài)不穩(wěn)、顫抖、搔鼻、旋轉(zhuǎn)等過敏反應(yīng)癥狀,其中 1只死亡,致敏率為 100%.

3 小結(jié)

本研究通過動物全身過敏性、血管、肌肉刺激性和溶血性試驗對注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1)進(jìn)行了制劑安全性考察.實驗結(jié)果表明:注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉 (4∶1)靜脈和肌肉注射給藥,不會引起血管變性和肌肉壞死等刺激反應(yīng),對豚鼠無全身過敏反應(yīng),家兔亦未發(fā)生紅細(xì)胞凝集和溶血現(xiàn)象,提示該藥臨床肌肉和靜脈注射給藥安全.注射用頭孢呋辛鈉他唑巴坦鈉(4∶1)屬于化藥 1.5類新藥,該藥的研發(fā)為解決臨床上細(xì)菌感染性耐藥提供更好的治療藥物,也為本品的繼續(xù)研究開發(fā)提供了依據(jù).

[1]L ILJA M,M?KITIE A A,ANTT ILA V J,et al.Cefuroxime as a prophylactic preoperative antibiotic in septoplasty.A double blind randomized placebo controlled study[J].Rhinology,2011,49(1):58-63.

[2]HUGO J,IS MAEL L,ANGéL ICA C,et al.Effect of severity disease on the phar macokinetics of cefuroxime in children with multiple organ system failure[J].Biol.Pharm.Bull,2008,31(2):316-320.

[3]BUL ITTA J B,LANDERSDORFER C B,K INZIGM,et al.New semiphysiological absorption model to assess the phar macodynamic profile of cefurox ime axetil using nonparametric and parametric population pharmacokinetics[J].AntimicrobialAgents and Chemotherapy,2009,53(8):3462-3471.

[4]KARADAG S,OZKAN B,KARABASV L,et al.Effectof cefurox ime andmoxifloxacin on Staphylococcus epider midis adherence to intraocular lenses[J].Can J Ophthalmol,2009,44:663-667.

[5]SCHUMACHER H,SCHE IBEL J,MOLLER J K.Cross-resistance patterns among clinical isolates of Klebsiella pneumoniae with decreased susceptibility to cefuroxime[J].J Ant imicrob Chemother,2000,46(2):215-221.

[6]FENOLL A,AGU ILAR L,ROBLEDO O,et al.Influence of the beta-lactam resistance phenotype on the cefuroxime versus cefditoren susceptibility of Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae recovered from children with acute otitis media[J].J Ant imicrob Chemother,2007,60(2):323-327.

[7]STRAKER K,WOOTTON M,S IMM A M,et al.Cefurox ime resistance in non-beta-lactamase Haemophilus influenzae is linked to mutations in ftsI[J].J Antimicrob Chemother,2003,51(3):523-530.

[8]CHABOKA,T?RNBERGM,S MEDH K,et al.Prevalence of fecal carriage of antibiotic-resistant bacteria in patientswith acute surgical abdominal infections[J].Scand J Gastroenterol,2010,45(10):1203-1210.

[9]K?LLMAN O,GISKE CG,SAMUELSEN O,et al.Interplay of efflux, impermeability,andAmpc activity contributes to cefuroxime resistance in clinical,non-ESBL-producing isolatesof Escherichia coli[J].Microb Drug Resist,2009,15(2):91-95.

[10]MATTHEW K,MON I CA A,JOHN D,et al.Different intermediate populations formed by tazobactam,sulbactam,and clavulanate reactingwith SHV-1β-lactamases:Raman crystallographic evidence[J].J Am Chem Soc,2009,131(6):2338-2347.

[11]DOR ITZA P,XIANG Z,REIKO S,CHR ISTOPHER R,et al.Tazobactam Inactivation of SHV-1 and the Inhibitor-resistant Ser130 3 Gly SHV-1-actamase[J].The Journal ofBiological Chemistry,2004,279(19):19494-19501.

[12]OZTOPRAK,N I HAL P,HANDE A R,et al.Piperacillin-tazobactam versus carbapenem therapy with and without amikacin as empirical treatment of febrile neutropenia in cancer patients:Results of an open randomized trial at a university hospital[J].Nefise.Jpn J Clin Oncol,2010,40(8):761-767.

[13]PAUL G,H ILMARW,DANUTA S,et al.In vitro activitiesof the beta-lactamase inhibitors clavulanic acid,sulbactam,and tazobactam alone or in combination with-lactams against epidemiologically characterized multidrug-resistantAcinetobacter baum anniistrains[J].AntimicrobialAgents and Chemotherapy,2004,48(5):1586-1592.

[14]JAL IL A,N IAZI ID,KHAN SU.Evaluation of restoration of sensitivities of resistant staphylococcus aureus isolates by using cefurox ime and clavulanic acid in combination[J].J AyubMed CollAbbottabad,2008,20(2):28-30.

[15]國家食品藥品監(jiān)督管理局.化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[S].北京:國家食品藥品監(jiān)督管理局,2005.

[16]陳奇.中藥藥理實驗方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1993.

Safety Evaluation of Cefurox imetazobactam Sodium for I njection

X ING Gui-lan,XIE Xue-li,ZENG Yu,FU Jian

(Drug Safety Evaluation&Research Center of Hainan Province,HainanMedicalUninversity,Haikou,571101)

To evaluate the safety of combinations of cefuroximetazobactam sodium according to ratio 4∶1 for injection,the tests on guinea pig irritability,hemolysis,muscle and vascular st imulation of rabbitwere performed.The results showed that the Cefuroximetazobactam (4∶1)injection had no hypersensitive reaction on guinea pigs,no evidences of hemolyzation and aggregation on rabbit erythrocytein vitro,and no obvious stimulatory effects on muscles and marginal ear veins of rabbit.These results suggested that the Cefuroximetazobactam(4∶1)injection was safe for clinical application.

cefuroximetazobactam sodium injections;muscles and vascular stimulation;hypersensitivity;animal

R 978.1+1 < class="emphasis_bold">文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

A

1004-1729(2011)02-0143-04

2011-02-23

海南省重點研究項目(090215)

邢桂蘭 (1979-),女,海南文昌人,海南醫(yī)學(xué)院海南省藥物安全性評價研究中心研究實習(xí)員.

符健,教授,海南醫(yī)學(xué)院海南省藥物安全性評價研究中心主任,0898-66982118,fujianhnmc@163.com.