匙唇蘭次生培養(yǎng)研究

黃建民，向極釬，覃大吉，曾凡忠，李紅英，鄒迎春

(1.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000；2.湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心鄂西綜合實(shí)驗(yàn)站，湖北 恩施 445000；3.湖北省恩施州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖北 恩施 445000)

匙唇蘭是一種來(lái)自于東印度、緬甸及泰國(guó)的重要的觀賞蘭花,在亞洲有近十個(gè)品種.Samuel Parish和Heinrich Gustav Reichenbach在1874年在《植物期刊》(Journal of Botany)上首次將它描述為Saccolabiumfragrans.1963年Gunnar Seidenfaden和Tem Smitinand在泰國(guó)將它更正為匙唇蘭[1-2].

匙唇蘭是一種迷你型蘭花.莖長(zhǎng)大約1～3 cm，具有兩列深顏色且厚的葉片，每片葉大約2～3 cm長(zhǎng)，1 cm寬.花序約2 cm長(zhǎng)，生長(zhǎng)有15～25朵緊密的小花，具有香味，花并不會(huì)完全開(kāi)放，一般寬2 mm長(zhǎng)5 mm.花瓣基部近白色，外部淡粉紅色.淡粉紅色唇瓣基部長(zhǎng)有一大團(tuán)單一的半球型的硬結(jié)組織.其深厚的稠密的根緊緊地扎在基質(zhì)中.它是一種熱帶植物，所以不需要保持太高的濕度.苔蘚和蕨類(lèi)植物生產(chǎn)在其根的周?chē)?，它能忍受較干燥一點(diǎn)的環(huán)境[3-5].

1 材料與方法

1.1 原球莖來(lái)源

原材料來(lái)源于泰國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)Rapee中心蘭花園,花梗頂芽與側(cè)花在MS培養(yǎng)基24℃條件下培養(yǎng)6～10星期.

1.2 培養(yǎng)基與培養(yǎng)方法

用改良MS培養(yǎng)基(見(jiàn)表1)并附加糖，瓊脂以及不同濃度水平的細(xì)胞分裂素6-BA 和生長(zhǎng)素NAA. 6-BA有4個(gè)水平，分別是0， 0.5， 1.0， 2.0 mg·L-1； NAA有3個(gè)水平，分別是0， 0.5， 1.0 mg·L-1(見(jiàn)表2).

表1 改良MS培養(yǎng)基各成分含量

表2 各處理及細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素含量

1.3 培養(yǎng)條件

溫度：(23±2 )℃,光照：1 500-2 000 Lux, 濕度：80%～90%.

2 結(jié)果

1)不同濃度的細(xì)胞分裂素(6-BA)與生長(zhǎng)素(NAA)配比下原球莖的體積增長(zhǎng)率 (見(jiàn)表3);

2)不同濃度的細(xì)胞分裂素(6-BA)與生長(zhǎng)素(NAA)配比下原球莖的芽誘導(dǎo)率(見(jiàn)表4) ;

3)附加有新鮮椰乳汁與沒(méi)有附加新鮮椰乳汁的培養(yǎng)基的原球莖的體積增長(zhǎng)率與芽誘導(dǎo)率(見(jiàn)表5);

4) 圖表來(lái)自于Minitab14.12統(tǒng)計(jì)分析軟件(表6，圖1～3).

表3 不同濃度的生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素配比下原球莖的體積增長(zhǎng)率

表4 不同濃度的生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素配比下原球莖的芽誘導(dǎo)率

表5 附加有新鮮椰乳汁與沒(méi)有附加新鮮椰乳汁的培養(yǎng)基的原球莖的體積增長(zhǎng)率與芽誘導(dǎo)率

本文獲得匙唇蘭原球莖增殖的可行性方法.完備了完整的匙唇蘭組織培養(yǎng).為了實(shí)現(xiàn)匙唇蘭的原球莖增殖，得到了適宜的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素種類(lèi)和含量.本文也闡述了不同含量的細(xì)胞分裂素6-BA和生長(zhǎng)素NAA在匙唇蘭原球莖增殖過(guò)程中的作用.第9號(hào)培養(yǎng)基是最佳的培養(yǎng)基配方，其含量是6-BA 2.0 mg·L-1和NAA 0.5 mg·L-1.新鮮的椰乳對(duì)于匙唇蘭的原球莖的次生培養(yǎng)有特殊的作用，相對(duì)于細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素而言，更能促進(jìn)原球莖的增殖與細(xì)莖的形成.用 Minitab14.12統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行方差分析.結(jié)果(見(jiàn)圖2)表明，兩個(gè)因素，細(xì)胞分裂素6-BA和生長(zhǎng)素NAA的效應(yīng)與交互效應(yīng)都顯著[6-7].

表6 方差分析表

R-S=6.86509，R-Sq=90.10%，Sq(adj)=87.16%

圖1 原球莖增殖圖

圖2 原球莖增殖交互影響圖

圖3 原球莖增殖效果圖

3 結(jié)論

1)添加6-BA有利于原球莖的增殖，添加NAA有利于芽的誘導(dǎo)形成;

2)新鮮椰乳汁對(duì)于原球莖的增殖與芽的誘導(dǎo)具有強(qiáng)列的刺激作用;

3)對(duì)于原球莖的增殖，最佳細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素含量是細(xì)胞分裂素6-BA為2.0 mg·L-1和生長(zhǎng)素NAA為0.5 mg·L-1;

4)對(duì)于芽的誘導(dǎo)，最佳細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素含量是細(xì)胞分裂素6-BA為2.0 mg·L-1和生長(zhǎng)素NAA為1.0 mg·L-1;

5)6-BA和NAA具有交互效應(yīng)抑制原球莖的增殖;

6)分析結(jié)果表明，兩個(gè)因素(6-BA和NAA)效應(yīng)顯著;

7)細(xì)胞分裂素6-BA比生長(zhǎng)素NAA有利于芽的增殖，但是生長(zhǎng)素NAA比細(xì)胞分裂素6-BA更有利于芽的誘導(dǎo).

[1] Arditti,J.，F(xiàn)actors affecting the germination of orchid seeds Bot[J].Botany,1967，33:1-97.

[2] Ball E A.Orchid seed germination and seedling culture[M].Cornell University Press,1982.

[3] M.K.拉茲丹,肖尊安,祝揚(yáng).物組織培養(yǎng)導(dǎo)論[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2006.

[4] 彭星元.植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京:高等教育出版社,2006.

[5] 范成明.蘭花組織培養(yǎng)及分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J].園藝學(xué)報(bào)，2003(4):487-491.

[6] 杜佳林.蘭花育種現(xiàn)狀及進(jìn)展[J].廣西熱帶農(nóng)業(yè),2009(5)：32-35.

[7] 王卜瓊.蘭花育種研究進(jìn)展[J].園藝學(xué)報(bào)，2005(3)：551-556.