楊峻　王紅琳等

摘要：禽流感滅活疫苗對(duì)鵪鶉首次免疫試驗(yàn)結(jié)果表明，２０日齡、２８日齡和３５日齡的鵪鶉首次免疫禽流感疫苗２周后，部分鵪鶉能測(cè)定到ＡＩ－ＨＩ抗體，３周時(shí)抗體水平達(dá)到高峰，ＡＩ－ＨＩ抗體為５ｌｏｇ２以上，但維持時(shí)間很短，４周時(shí)開(kāi)始下降，５周時(shí)降至３ｌｏｇ２以下；二次免疫２周后抗體達(dá)到７．６ｌｏｇ２，3周時(shí)抗體開(kāi)始下降，６周時(shí)降至３ｌｏｇ２以下；不同免疫途徑免疫效果比較，皮下注射抗體水平明顯高于肌肉注射抗體水平；試驗(yàn)同時(shí)設(shè)雞免疫試驗(yàn)為對(duì)照，相同劑量二次免疫后雞的抗體水平明顯高于鵪鶉，且維持時(shí)間可達(dá)６周以上；疫苗的安全性試驗(yàn)表明，免疫鵪鶉未見(jiàn)任何不良臨床反應(yīng)，精神、食欲和體重均正常。

關(guān)鍵詞：禽流感；滅活疫苗；免疫；鵪鶉；效果評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)：Ｓ８３９；Ｓ８５５．３ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０12）24－5734-02

高致病性禽流感對(duì)鵪鶉產(chǎn)業(yè)發(fā)展威脅很大［１，２］，目前商品化的禽流感疫苗效力檢驗(yàn)是以雞作為試驗(yàn)動(dòng)物［３］，國(guó)內(nèi)外有關(guān)疫苗對(duì)鵪鶉的免疫效果評(píng)價(jià)試驗(yàn)報(bào)告較少。通過(guò)對(duì)不同日齡鵪鶉不同免疫次數(shù)的免疫試驗(yàn)，評(píng)價(jià)禽流感疫苗對(duì)鵪鶉的免疫效果。

１ 材料與方法

１．１ 試驗(yàn)材料

鵪鶉由湖北神丹健康食品有限公司提供的２００只２０日齡的非免疫鵪鶉，分為３個(gè)不同日齡免疫組和非免疫對(duì)照組，每組5０只。自然條件下籠養(yǎng)。試驗(yàn)用雞為１８日齡海蘭褐非免疫雛雞５０只，本實(shí)驗(yàn)室孵化，自然條件下籠養(yǎng)。禽流感滅活疫苗：重組禽流感病毒Ｈ５亞型二價(jià)滅活疫苗（青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：２０１１１４２）。

１．２ 試驗(yàn)方法

１．２．１ 不同日齡首次免疫 分別在鵪鶉２０日齡、２８日齡和３５日齡時(shí)頸背皮下注射０．２ｍＬ，免疫后２、３、４、５周隨機(jī)取樣，免疫組和對(duì)照組各５只鵪鶉采血，分離血清，檢測(cè)ＡＩ－ＨＩ抗體。同時(shí)設(shè)１８日齡雛雞免疫組和非免疫組，觀察疫苗免疫效果。

１．２．２ 二次免疫試驗(yàn) ２０日齡鵪鶉在第一次免疫后３周（４１日齡，產(chǎn)蛋前）進(jìn)行二次免疫（０．３ｍＬ）。二次免疫后每周隨機(jī)取樣，免疫組和對(duì)照組各５只鵪鶉采血，分離血清，檢測(cè)ＡＩ－ＨＩ抗體。同時(shí)設(shè)雛雞二次免疫組，觀察疫苗免疫效果。

１．２．３ 不同免疫途徑的免疫試驗(yàn) 將首次免疫試驗(yàn)（ＡＩ－ＨＩ抗體下降為０）的６０只鵪鶉（７０日齡）分為３組，皮下注射和胸肌注射免疫組各２０只，另２０只為對(duì)照組。免疫后每周采血，檢測(cè)ＡＩ－ＨＩ抗體。

１．２．４ 疫苗對(duì)鵪鶉的安全性試驗(yàn) 每周測(cè)定免疫組和對(duì)照組鵪鶉的體重，觀察精神狀態(tài)，解剖免疫局部組織的病變，評(píng)價(jià)疫苗的安全性。

１．２．５ 抗體檢測(cè) 參照文獻(xiàn)［２］中常規(guī)的血凝抑制試驗(yàn)（ＨＩ）檢測(cè)，ＡＩ－ＨＩ抗原購(gòu)于哈爾濱獸醫(yī)研究所；１％雞和鵪鶉紅細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室制備。為了解兩種紅細(xì)胞在作ＡＩ－ＨＩ檢測(cè)時(shí)是否存在差異，本試驗(yàn)進(jìn)行雞和鵪鶉紅細(xì)胞檢測(cè)抗原和抗體效果比較。

２ 結(jié)果與分析

２．１ 不同日齡首次免疫效果

由表１可知，２０、２８、３５日齡的鵪鶉首次免疫禽流感疫苗２周后，部分鵪鶉能測(cè)到ＡＩ－ＨＩ抗體，３周抗體水平達(dá)到高峰，ＡＩ－ＨＩ抗體為５log２以上，但維持時(shí)間很短，４周后開(kāi)始下降，５周降至３log２以下。雞疫苗免疫組抗體能維持到５周以上。

２．２ 二次免疫試驗(yàn)效果

由表２可知，２０日齡鵪鶉在第一次免疫后３周進(jìn)行二次免疫，免疫量０．３ｍＬ／只，免疫后２周抗體達(dá)到７．６log２，3周后抗體下降，６周降至３log２以下。二次免疫雛雞組抗體水平能持續(xù)到６周以上。

２．３ 不同途徑免疫試驗(yàn)效果

由表３可知，７０日齡的成年鵪鶉分別經(jīng)頸背皮下和肌肉注射進(jìn)行二次免疫，結(jié)果為皮下免疫組１周抗體明顯上升，２周達(dá)到高峰，抗體為８．２ｌｏｇ２，４周后開(kāi)始下降；肌肉注射組２周才測(cè)定到抗體，３周抗體達(dá)高峰，且抗體水平明顯低于皮下免疫組。

２．４ 疫苗對(duì)鵪鶉安全性試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果表明，禽流感油乳劑滅活疫苗免疫鵪鶉后未見(jiàn)不良臨床反應(yīng)，精神、食欲和體重正常；每周抽檢１～２只鵪鶉進(jìn)行局部注射觀察，２周時(shí)可見(jiàn)少量的未吸收的疫苗黃色顆粒，３周時(shí)疫苗完全吸收。

２．５ １％雞和鵪鶉紅細(xì)胞檢測(cè)抗原和抗體效果比較

通過(guò)對(duì)同批次抗體和血清樣品的檢測(cè)比較，兩種禽類紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差異，證明用１％雞紅細(xì)胞作ＡＩ－ＨＩ檢測(cè)是完全可行的。

３ 小結(jié)與討論

１）通過(guò)對(duì)不同日齡鵪鶉不同免疫次數(shù)的免疫試驗(yàn)結(jié)果表明，商品化滅活疫苗免疫鵪鶉的ＡＩ－ＨＩ抗體水平與鴨、鵝相比存在較大的差異［３-5］，主要表現(xiàn)在抗體水平低，持續(xù)時(shí)間短，不論是首次還是二次免疫，持續(xù)時(shí)間均不超過(guò)６周，而成年產(chǎn)蛋鵪鶉的淘汰周期為８～１２個(gè)月，這與生產(chǎn)需要相差較大。

２）為了評(píng)價(jià)疫苗的免疫效果，本研究設(shè)有同批疫苗免疫雞對(duì)照組和鵪鶉紅細(xì)胞對(duì)照組，結(jié)果表明二次免疫雞的ＡＩ－ＨＩ抗體能持續(xù)６周以上，證明疫苗是有效的。為了驗(yàn)證不同禽類的紅細(xì)胞檢測(cè)鵪鶉抗體的敏感性，還作了１％雞和鵪鶉紅細(xì)胞檢測(cè)抗原和抗體效果比較試驗(yàn)，通過(guò)對(duì)同批次抗原和血清樣品的檢測(cè)比較，２種禽類紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果完全一致，證明用雞的紅細(xì)胞作ＡＩ－ＨＩ檢測(cè)是完全可行的。

３）本次試驗(yàn)的疫苗安全性試驗(yàn)表明，免疫鵪鶉未見(jiàn)不良臨床反應(yīng)，精神、食欲和體重正常。疫苗免疫效果表明，不同日齡首次免疫后２周可檢測(cè)到抗體，３周抗體水平達(dá)到高峰，為５log２以上，但維持時(shí)間很短，４周后開(kāi)始下降，５周降至３log２以下；二次免疫后２周抗體達(dá)到７．６log２，3周后抗體開(kāi)始下降，６周降至３log２以下；不同免疫途徑免疫效果比較，頸背皮下注射抗體水平明顯高于肌肉注射抗體水平。至于抗體維持時(shí)間短的問(wèn)題，可能與鵪鶉免疫系統(tǒng)有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

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