黃秋潔　葉勇　歐賢紅　劉華鋼

摘要：采用Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｌｕｎａ）Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇－０．０５％磷酸（１０∶９０，Ｖ／Ｖ），檢測(cè)波長(zhǎng)為２８０ｎｍ，流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ，柱溫３０℃，建立了瑤族藤茶（Ａｍｐｅｌｏｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）中沒食子酸的ＲＰ－ＨＰＬＣ定量分析方法。結(jié)果表明，沒食子酸進(jìn)樣量在０．０５７４～０．３４４４μｇ范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（ｒ＝０．９９９９），平均回收率為９９．１５％（ＲＳＤ＝１．８０％）。本法簡(jiǎn)便快捷，可用于瑤族藤茶中沒食子酸的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：藤茶（Ａｍｐｅｌｏｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）；沒食子酸；高效液相色譜

中圖分類號(hào)：Ｏ６５７．７＋２ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０12）24－5764-02

藤茶是葡萄科蛇葡萄屬中的一種野生藤本植物，學(xué)名為顯齒蛇葡萄［Ａｍｐｅｌｏｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ（Ｈａｎｄ．－Ｍａｚｚ．）Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ］，俗稱藤茶、藤婆茶等［１］。藤茶是瑤族常用藥之一，入藥以葉為主，至今已有數(shù)百年的藥用歷史。廣西瑤族人民常將其幼嫩莖葉制成保健茶，用于治療感冒發(fā)熱、咽喉腫痛等癥，藥理研究表明藤茶及其提取物具有抑菌、降血脂、降血壓等功效［２］。現(xiàn)已從該植物體中分離了二氫楊梅素（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）、楊梅素（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）、沒食子酸甲酯、沒食子酸、沒食子酸乙酯等成分［３－６］，目前已有關(guān)于藤茶中黃酮類成分含量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道［７，８］，但未見藤茶中沒食子酸含量測(cè)定的報(bào)道。本試驗(yàn)建立了ＨＰＬＣ法測(cè)定藤茶中沒食子酸含量的方法，為藤茶及其制劑的研制提供質(zhì)量控制依據(jù)。

１ 材料與方法

１．１ 材料

藤茶購(gòu)于廣西恭城縣，并經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)劉壽養(yǎng)副教授鑒定為顯齒蛇葡萄的干燥嫩莖葉。

甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為去離子水；沒食子酸對(duì)照品，購(gòu)于桂林萊茵生物科技股份有限公司，含量大于９８％）。

１．２ 儀器

Ａｇｉｌｅｎｔ－１２００高效液相色譜儀（美國(guó)Ａｇｉｌｅｎｔ公司），包括四元梯度泵、二極管陣列檢測(cè)器、微量自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和化學(xué)工作站；ＸＳ２０５ＤＵ電子天平（瑞士梅特勒－托利多公司）；ＳＫ２５１０ＨＰ超聲儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）。

１．３ 方法

１．３．３ 樣品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取樣品粉末０．５ｇ，甲醇溶解，超聲３０ｍｉｎ至樣品完全溶解后，定容至２５ｍＬ，過０．４５μｍ的微孔濾膜后待測(cè)。

２ 結(jié)果

２．１ 線性關(guān)系考察

２．２ 精密度試驗(yàn)

精確吸取濃度為０．０２８７ｍｇ／ｍＬ的沒食子酸對(duì)照品溶液１０μＬ，按以上色譜條件連續(xù)進(jìn)樣６次，測(cè)定峰面積。測(cè)定值的ＲＳＤ為０．５８％，表明儀器精密度良好。

２．３ 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別于０、２、４、８、１０、１２ｈ吸取供試品溶液１０μＬ注入色譜儀，測(cè)定峰面積，測(cè)定值的ＲＳＤ為０．９６％，表明供試品溶液在１２ｈ內(nèi)穩(wěn)定性良好。

２．４ 重復(fù)性試驗(yàn)

取６份同一批藥材樣品，制備供試品溶液后，各?。保唉蹋套⑷肷V儀，測(cè)定峰面積，測(cè)定值的ＲＳＤ為２．１２％，表明方法重復(fù)性良好。

２．５ 加樣回收率試驗(yàn)

２．６ 樣品含量測(cè)定

３ 討論

在預(yù)試驗(yàn)中考察了溫浸提取法、超聲法及加熱回流法等方法，其中溫浸提取法時(shí)間長(zhǎng)、效率低、操作繁瑣，加熱回流法與超聲提取法的結(jié)果沒有明顯差異，但加熱回流法的雜質(zhì)較多，干擾樣品的測(cè)定，而超聲法提取效率高、快速、雜質(zhì)干擾少、操作簡(jiǎn)單，因此最終選擇超聲提取法。同時(shí)比較了不同超聲提取時(shí)間的測(cè)定結(jié)果，結(jié)果表明超聲提取３０ｍｉｎ后樣品中沒食子酸含量不再增加，因此選取３０ｍｉｎ為超聲提取時(shí)間。本試驗(yàn)還考察了不同提取溶劑：甲醇、體積分?jǐn)?shù)為５０％（下同）的甲醇-水、３０％的甲醇-水及水等，發(fā)現(xiàn)用甲醇和５０％甲醇-水作為溶劑提取沒食子酸含量較高，兩者所得結(jié)果無明顯差異，但５０％甲醇-水提取的樣品中雜質(zhì)干擾較多，難以分離測(cè)定，故以甲醇作為提取溶劑。

本試驗(yàn)建立了測(cè)定瑤族藤茶中沒食子酸含量的HPLC方法，結(jié)果表明，該法簡(jiǎn)便快捷，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，能分析藤茶藥材中沒食子酸的含量，完善了藤茶藥材中黃酮類成分含量進(jìn)行測(cè)定的質(zhì)量控制方法，對(duì)藤茶藥材及其制劑的質(zhì)量控制具有現(xiàn)實(shí)的指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)：

［１］中國(guó)科學(xué)院植物研究所．中國(guó)高等植物圖鑒（第二冊(cè)）補(bǔ)編［Ｍ］．北京：科學(xué)出版社，１９８３．３４９．

［２］莫國(guó)艷．藤茶藥理作用研究進(jìn)展［Ｊ］．廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，２００３，６（４）：６６－６７．

［３］袁阿興，黃筱美，陳 勁．顯齒蛇葡萄化學(xué)成分的研究［Ｊ］．中國(guó)中藥雜志，１９９８，２３（６）：３５９．

［４］王定勇，劉佳銘，章駿德，等．顯齒蛇葡萄（藤茶）化學(xué)成分研究［Ｊ］．亞熱帶植物通訊，１９９８，２７（２）：３９．

［５］王 巖，周莉玲，李 銳，等．顯齒蛇葡萄化學(xué)成分的研究［Ｊ］．中藥材，２００２，２５（４）：２５４．

［６］張友勝，楊偉麗，崔 春．顯齒蛇葡萄化學(xué)成分的研究［Ｊ］．中草藥，２００３，３４（５）：４０２．

［７］覃潔萍，譚建寧，歐 瑩，等．廣西瑤族藤茶中雙氫楊梅樹皮素的含量測(cè)定方法研究［Ｊ］．中國(guó)新藥雜志，２００４，１３（１０）：９１５．

［８］張友勝，楊偉麗，龔雨順．ＲＰ－ＨＰＬＣ法測(cè)定顯齒蛇葡萄中楊梅素的含量［Ｊ］．中草藥，２００１，３２（１１）：９８３．