楊仕林,李小剛,謝云(.湖北陽新縣人民醫(yī)院,湖北 陽新 43500;.湖北中醫(yī)藥大學(xué),武漢 430064)
天王補(bǔ)心丸是2010年版《中國藥典》(一部)收錄的中藥制劑,以丹參、當(dāng)歸、黨參、茯苓、五味子、地黃、酸棗仁(炒)等中藥為原料,經(jīng)粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻,泛丸,干燥而得,具有滋陰養(yǎng)血、補(bǔ)心安神之功效,用于心陰不足、心悸健忘、失眠多夢、大便干燥等。在其藥品標(biāo)準(zhǔn)中僅對五味子醇甲進(jìn)行了含量測定[1],國內(nèi)有文獻(xiàn)報道該制劑中其他藥材主要成分的定量測定方法,如丹參素、酸棗仁皂苷A、丹酚酸B[2-4],但對該制劑中地黃的主要成分梓醇的含量測定方法未見報道。為此,筆者采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定天王補(bǔ)心丸中梓醇的含量。
LC-10A型HPLC儀(日本島津公司);BS124S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。
梓醇對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:808-9301);天王補(bǔ)心丸(上海和黃藥業(yè)有限公司,規(guī)格:9 g,批號:A090606、A091003、A091108);乙腈(色譜純,美國Fisher公司)。
色譜柱:Agilent-ZORBX SB-C18柱(250mm×4.6mm,5 μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(V/V)=1∶99;流速:1.0mL·min-1;檢測波長:210 nm;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量:20μL。在此色譜條件下,梓醇與相鄰峰的分離度均>1.5,理論板數(shù)按梓醇峰計算為7300。色譜見圖1。
圖1 高效液相色譜圖A.對照品;B.供試品;C.陰性對照;1.梓醇Fig 1 HPLC chromatogramA.reference substance;B.the test;C.negative control;1.catalpol
2.2.1 對照品溶液的制備 取梓醇對照品適量,精密稱定,置于50mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成相當(dāng)于梓醇濃度為200.4μg·mL-1的對照品溶液。
2.2.2 供試品溶液的制備 取天王補(bǔ)心丸10粒,研細(xì),取約4.5 g,精密稱定,加甲醇50mL,稱定重量,置水浴上加熱回流1.5 h,放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過。精密量取續(xù)濾液10mL,濃縮至近干,殘渣用流動相溶解,轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中,并用流動相稀釋至刻度,搖勻,用0.45 μm的濾膜濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.2.3 陰性對照溶液的制備 按天王補(bǔ)心丸處方配比及制備工藝,取除地黃外的其他藥材,制得陰性樣品,再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制得陰性對照溶液。
取梓醇對照品溶液適量,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件,分別精密量取對照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10mL,置于100mL容量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻,制得系列對照品溶液。精密吸取系列對照品溶液各20μL,注入HPLC儀。以梓醇濃度(X,μg·mL-1)為橫坐標(biāo),其峰面積(A)為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程A=3821.4X-832.7(r=0.9993)。結(jié)果表明,梓醇檢測濃度在2.004~20.046μg·mL-1范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。
取同一份梓醇對照品溶液(濃度為10.02μg·mL-1)適量,精密吸取20μL,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件,注入HPLC儀,重復(fù)進(jìn)樣5次,測定峰面積。結(jié)果,RSD=0.7%,表明該法的精密度良好。
取同一供試品溶液適量,分別于1、2、4、6、8 h測定梓醇的峰面積。結(jié)果,峰面積測定值基本不變,RSD=1.4%,表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。
精密稱取同一樣品(批號:A090606)適量,按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備5份供試品溶液,依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定峰面積。結(jié)果,樣品中每丸梓醇的平均含量為1.1mg,RSD=1.7%,表明該方法具有較好的重復(fù)性。
取已測含量的天王補(bǔ)心丸適量(批號:A090606),研細(xì),取2.5 g,精密稱定,分別精密加入梓醇對照品溶液(濃度為50.1μg·mL-1)4.0、5.0、6.0mL,加甲醇至 50mL,稱定重量,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測定含量,計算加樣回收率,結(jié)果見表1。
取3批樣品(批號:A090606、A091003、A091108)適量,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,精密吸取20μL,注入HPLC儀,記錄峰面積。另取梓醇對照品溶液(濃度為10.02μg·mL-1)適量,依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定,按外標(biāo)法以峰面積計算天王補(bǔ)心丸樣品中梓醇的含量。結(jié)果,3批樣品中每丸梓醇的平均含量分別為1.1、0.98、0.98mg。
表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)Tab 1 Results of recovery test(n=9)
梓醇的最大吸收波長為210 nm,故選擇210 nm波長作為檢測波長。考慮到甲醇溶劑的末端吸收,試驗(yàn)僅選擇了乙腈作為強(qiáng)溶劑。同時,比較了2種流動相乙腈-0.1%磷酸溶液(V/V)=1∶99和乙腈-水(V/V)=1∶99,結(jié)果前者的分離效果較佳,峰形對稱,干擾較少。雖然在8min后還有許多極性較小的物質(zhì)出峰,但對本試驗(yàn)未見影響。
筆者考察了加熱回流提取、超聲提取2種方式,結(jié)果前者提取率較后者高出近20%。此外,還對加熱回流的時間和次數(shù)進(jìn)行了研究,結(jié)果加熱回流提取1次、時間1.5 h即可基本提盡樣品中的梓醇。
綜上所述,本文建立的方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,加樣回收率符合要求,可用于天王補(bǔ)心丸的質(zhì)量控制。
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:515.
[2]何新榮,劉 萍,孫 艷.HPLC-ELSD測定天王補(bǔ)心丸中酸棗仁皂苷A的含量[J].中國醫(yī)院用藥評價與分析,2011,11(10):910.
[3]孫 裕,王蓮萍,楊玉華.HPLC法測定天王補(bǔ)心丸(濃縮丸)中丹酚酸B的含量[J].衛(wèi)生職業(yè)教育,2010,28(2):91.
[4]楊 芳.RP-HPLC法測定天王補(bǔ)心丸中丹參素含量的研究[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2008,22(6):105.