青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院 孫淑潔 李文立＊

青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所 葛文華 張名愛 王寶維＊

維生素A作為動物所必需的一種營養(yǎng)素，具有維持生長發(fā)育、正常視覺、繁殖性能，促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖與分化及提高機體免疫力的重要作用。Friedman和Sklan（1989）研究發(fā)現(xiàn)，低維生素A日糧能抑制T淋巴細(xì)胞體外增殖活性及機體對特異性抗原的刺激、大腸桿菌感染的體液免疫應(yīng)答能力。Sklan等（1995）研究表明，日糧維生素A缺乏會導(dǎo)致火雞T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)顯著減弱，新城疫病毒的血清抗體效價下降；補充維生素A后免疫機能明顯提高，但是進(jìn)一步提高維生素A水平會抑制免疫反應(yīng)。也有報道指出，維生素A缺乏時大鼠脾NK細(xì)胞減少22%~80%，免疫應(yīng)答下降，血漿IgM、IgG水平分別下降70%和30%（Stephensen，2001）。本試驗研究了不同添加水平維生素A對青農(nóng)灰鵝屠宰性能、免疫性能的影響，旨為鵝維生素營養(yǎng)研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與基礎(chǔ)日糧 維生素A購于浙江新維普添加劑有限公司，其有效成分50萬IU/g。試驗鵝基礎(chǔ)日糧以玉米和豆粕為主要原料，參照NRC（1994）家禽營養(yǎng)需要量中推薦的鵝日糧營養(yǎng)水平設(shè)計配方。全期分為0~4周齡，5~12周齡兩個飼養(yǎng)階段，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 試驗動物及試驗設(shè)計 選擇1日齡青農(nóng)灰鵝200只，隨機分為5個處理，每處理4個重復(fù)，每重復(fù)10只鵝。分別在5個處理組（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、 Ⅴ）的基礎(chǔ)日糧中添加 0、1500、3000、6000、12000 IU/kg的維生素A，飼養(yǎng)期為12周。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗鵝自由飲水和采食，全期舍飼，自配混合料育雛期隨時調(diào)節(jié)育雛溫度：育雛前3周溫度分別為28~30℃、26~27℃、24~25℃，3周齡以后逐漸降到常溫。光照：1~2周，23 h；第3周，18 h；4~12周齡采用自然光照。平均相對濕度65%。按常規(guī)程序進(jìn)行疫苗的免疫接種（1～3日齡小鵝瘟、鵝副黏病毒二聯(lián)滅活疫苗；10日齡禽流感H5N1 0.3 mL/只；20日齡雞新城疫油苗每 1 mL/只；50日齡禽流感（H5/H9）二價滅活苗）。每天記錄喂料量、溫度、死淘數(shù)等相關(guān)數(shù)據(jù)，注意觀察鵝的生長狀況。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 屠宰性能指標(biāo) 28、84日齡，每重復(fù)按平均體重選取2只試驗鵝稱重，采血后進(jìn)行屠宰試驗，測定屠宰率、半凈膛率、全凈膛率、腹脂率。

活體重：試驗鵝每周以重復(fù)為單位稱重。稱重前12 h禁食、不禁水，第二天清晨8∶00進(jìn)行空腹稱重，并作詳細(xì)記錄。

屠體重：試驗鵝放血，去除羽毛、腳角質(zhì)層、趾殼和喙殼后的重量。

半凈膛重：屠體重去除氣管、食道、嗉囊、腸、脾、胰、膽、生殖器官、肌胃內(nèi)容物及角質(zhì)膜后的重量。

全凈膛重：半凈膛減去心、肝、胃、腹脂的重量。

腹脂重：腹部和肌胃周圍的脂肪剖離稱重。

按以下公式進(jìn)行計算：

屠宰率/%=屠體重/活體重×100；

全凈膛率/%=全凈膛重/活體重×100；

半凈膛率/%=半凈膛重/活體重×100；

腹脂率/%=腹脂重/（凈膛重+腹脂重）×100。

1.4.2 免疫性能指標(biāo)

1.4.2.1 免疫器官指數(shù)測定 28、84日齡時，從重復(fù)中分別抽取2只體重接近該組平均體重的鵝，頸靜脈放血致死，剖開腹腔，小心將胸腺、脾臟、法氏囊一并摘取，去除脂肪后用濾紙吸干血水進(jìn)行準(zhǔn)確稱重，按下式計算胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)：

免疫器官指數(shù) （mg/g）=免疫器官重量/活體重。

1.4.2.2 禽流感抗體效價的測定 按常規(guī)方法給鵝群免疫禽流感疫苗，每隔7 d分別從各重復(fù)隨機抽取2只試驗鵝，翼下靜脈采血，分離血清，采用血凝和血凝抑制試驗法（HA-HI）測定鵝禽流感抗體滴度。

1.4.2.3 外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的測定 試驗至28、84日齡分別從各重復(fù)隨機抽取2只試驗鵝，翼下靜脈采血（肝素鈉抗凝），采用四甲基偶氮唑鹽（MTT）法測定外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，結(jié)果以刺激指數(shù)（SI）表示：

1.5 統(tǒng)計分析 采用SPSS17.0軟件中單因素方差分析 （One-Way ANOVA），LSD法進(jìn)行多重比較。試驗數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。通過回歸分析對劑量-效應(yīng)關(guān)系作二次曲線擬合，根據(jù)二次方程計算最適添加量。

2 結(jié)果

2.1 維生素A對鵝屠宰性能的影響 由表2可見，4周齡時，維生素A對青農(nóng)灰鵝屠宰率、全凈膛率、半凈膛率和腹脂率均無顯著影響 （P>0.05）。12周齡時，各維生素A添加組屠宰率、半凈膛率、全凈膛率均高于未添加組；Ⅲ、Ⅳ組與Ⅰ組相比，屠宰率提高3.4%、3.1%（P<0.05），半凈膛率提高 3.9%、4.4%（P<0.05）；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組的全凈膛率分別較Ⅰ組提高4.2%、4.2%、3.3%（P<0.05）；各處理組間腹脂率均無顯著差異（P>0.05）。通過回歸分析，屠體率、半凈膛率、全凈膛率（Y）與日糧維生素A水平（X）間均呈二次曲線關(guān)系，分別為：Y=-0.135X2+1.291X+86.626（R2=0.839，P=0.161），Y=-0.178X2+1.682X+77.668（R2=0.839，P=0.161），Y=-0.132X2+1.301X+69.466（R2=0.892，P=0.108），而腹脂率與維生素A添加水平間的二次曲線關(guān)系不顯著（R2<0.700）。

2.2 維生素A對鵝免疫性能的影響

2.2.1 維生素A對鵝免疫器官指數(shù)的影響 由表3可見，4周齡時，各維生素A添加組的胸腺指數(shù)均高于未添加組，其中，Ⅳ、Ⅴ組較Ⅰ組分別提高 116.1%、100.8%（P<0.01），Ⅱ、Ⅲ組較Ⅰ組分別提高 53.4%、66.9%（P<0.05）；各處理組間脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)無顯著差異 （P>0.05）。12周齡時，Ⅳ組的胸腺指數(shù)較Ⅰ組提高30.9%（P<0.05），其他各處理組間均差異不顯著 （P>0.05）；各處理組間的脾臟指數(shù)均差異不顯著（P>0.05）；法氏囊指數(shù)，除Ⅱ組外，其他各組均高于Ⅰ組，其中Ⅳ組極顯著高于Ⅰ組（P<0.01），Ⅲ組顯著高于Ⅰ組（P<0.05）。經(jīng)回歸分析，胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)（Y）與日糧維生素A水平（X）間均呈二次曲線關(guān)系，分別為：Y=-0.015X2+0.156X+1.431（R2=0.851，P=0.149），Y=-0.013X2+0.123X+0.335（R2=0.797，P=0.203），而脾臟指數(shù)與維生素A添加水平間的二次曲線關(guān)系不顯著（R2<0.700）。

表2 飼糧中不同水平維生素A對青農(nóng)灰鵝屠宰性能的影響 %

表3 飼糧中不同水平維生素A對青農(nóng)灰鵝免疫器官指數(shù)的影響 mg/g

2.2.2 維生素A對鵝禽流感抗體效價的影響由表4可見，免疫后7 d，各維生素A添加組抗體效價均有不同程度的提高，其中Ⅳ組較Ⅰ組提高18.3%（P<0.05），其他各組間均差異不顯著（P>0.05）；免疫后14 d，Ⅳ、Ⅴ組抗體效價分別較Ⅰ組提高 13.3%、13.3%（P<0.05），其余各組間均差異不顯著（P>0.05）；其他階段各組的抗體效價均無顯著差異（P>0.05）。通過回歸分析，免疫后7、14日，血清抗體效價（Y）與日糧維生素A水平（X）間均呈二次曲線關(guān)系，分別為：Y=-0.149X2+1.067X+5.898 （R2=0.787，P=0.213），Y=-0.104X2+0.798X+5.714（R2=0.894，P=0.106），而免疫前、免疫后21日血清抗體效價與維生素A添加水平間的二次曲線關(guān)系不顯著（R2<0.700）。

表4 飼糧中不同水平維生素A對鵝禽流感抗體效價的影響log2

2.2.3 維生素A對鵝淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響由表5可見，4周齡時，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率分別較Ⅰ組提高30.3%、25.5%、22.4%（P<0.01）， Ⅱ組較Ⅰ組提高 12.7%（P<0.05）；12 周齡時，各維生素A添加組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均高于未添加組，其中，Ⅳ組較Ⅰ組提高13.7%（P<0.01），Ⅲ組較Ⅰ組提高 8.33%（P<0.05），其他各組間均差異不顯著（P>0.05）。通過回歸分析，4、12周齡時，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率（Y）與日糧維生素A水平 （X）間均呈二次曲線關(guān)系，分別為：Y=-0.020X2+0.199X+1.694 （R2=0.801，P=0.199），Y=-0.016X2+0.129X+2.051（R2=0.951，P=0.049）。

表5 飼糧中不同水平維生素A對青農(nóng)灰鵝鵝外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

3 討論

3.1 維生素A對鵝屠宰性能的影響 屠宰性能是評價家禽品種優(yōu)劣、飼養(yǎng)管理水平及屠宰加工效益的重要依據(jù)。屠宰率和全凈膛率是衡量畜禽產(chǎn)肉性能的主要指標(biāo)（韋來紅，2001）。目前，不僅維生素A對鵝屠宰性能的影響研究鮮見報道，而且對其改善鵝屠宰性能的機制尚不十分清楚，現(xiàn)有報道的可能途徑為：（1）維生素A具有類激素的活性，能夠調(diào)控分泌生長激素的基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)生長激素的分泌，而生長激素能促進(jìn)動物蛋白質(zhì)的沉積，減少脂肪的沉積（咼于明，1999）。（2）維生素A的代謝產(chǎn)物視黃酸能夠抑制乙酰輔酶A基因的表達(dá)，阻止未成熟脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞，進(jìn)而減少脂肪的沉積（Surai等，2000）。本試驗結(jié)果表明，日糧中添加一定水平的維生素A能顯著提高青農(nóng)灰鵝后期（12周齡）的屠宰率、半凈膛率和全凈膛率，但對前期（4周齡）的屠宰性能的影響不顯著。經(jīng)回歸分析擬合二次曲線，12周齡時青農(nóng)灰鵝屠宰率、半凈膛率及全凈膛率最高時維生素A的添加水平分別為7172.22、7087.08、7392.05 IU/kg。綜上所述，當(dāng)以屠宰性能作為衡量指標(biāo)時，日糧維生素A的添加水平以7000 IU/kg比較適宜。

3.2 維生素A對鵝免疫性能的影響

3.2.1 維生素A對鵝免疫器官指數(shù)的影響 胸腺、脾臟、法氏囊是家禽的主要免疫器官。胸腺是產(chǎn)生免疫的中樞淋巴器官，是免疫細(xì)胞發(fā)育分化的場所。脾臟是動物的外周免疫器官，是T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞定居和對抗原的刺激進(jìn)行免疫應(yīng)答的場所。法氏囊為禽類特有的淋巴上皮器官，是抗體生成系統(tǒng)的細(xì)胞成長和分化的部位。免疫器官指數(shù)反映了機體免疫器官的生長發(fā)育狀況，直接決定禽類的免疫水平。魏立民等（2008）研究表明，日糧中維生素A缺乏時，北京鴨的胸腺、脾臟和法式囊指數(shù)均顯著降低，說明維生素A能夠影響北京鴨免疫器官的發(fā)育。馬軼凡等（1998）在大鼠上也得到了相似的結(jié)論。而龐建建（2010）研究發(fā)現(xiàn)，日糧維生素A水平對免疫器官指數(shù)未產(chǎn)生顯著影響。本試驗結(jié)果表明，日糧添加維生素A能極顯著提高4周齡胸腺指數(shù)及12周齡法氏囊指數(shù)，顯著提高12周齡胸腺指數(shù)，說明維生素A能夠提高青農(nóng)灰鵝免疫力。經(jīng)回歸分析擬合二次曲線，4周齡青農(nóng)灰鵝胸腺指數(shù)最高時維生素A的添加水平為8331.52 IU/kg；12周齡青農(nóng)灰鵝胸腺及法氏囊指數(shù)最高時維生素A的添加水平分別為7800、7096.15 IU/kg。綜上所述，當(dāng)以免疫器官指數(shù)作為衡量指標(biāo)時，日糧維生素A的添加水平以7000~8000 IU/kg比較適宜。

3.2.2 維生素A對鵝抗體效價的影響 禽流感抗體效價是反映機體禽流感免疫狀態(tài)的指標(biāo)?？贵w效價的高低直接反映了機體的體液免疫狀態(tài)，同時也體現(xiàn)了動物體對疫病的抵抗力。維生素A與動物免疫應(yīng)答有著密切的關(guān)系。宋志剛（2002）研究表明，維生素A缺乏能顯著降低肉雞體液免疫能力。王選年等（2002）研究指出，日糧中缺乏維生素A時，雛雞對β-酪蛋白抗原刺激的特異抗體生成能力明顯降低，而補充維生素A后，抗體水平則逐漸升高。然而，也有報道指出，維生素A對體液免疫無顯著影響（張春善等，2002）。本試驗結(jié)果顯示，在4次禽流感抗體效價測定中，維生素A添加水平對免疫后7、14 d影響顯著，對免疫前及免疫后21 d影響不顯著，這與前人的研究結(jié)果相似。經(jīng)回歸分析擬合二次曲線，免疫后7、14 d維生素A的最適添加量分別為5370.80、5754.81 IU/kg。

3.2.3 維生素A對鵝淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響檢測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率是細(xì)胞免疫研究的一種常用方法，通常是用來檢查細(xì)胞免疫功能的缺損，篩選具有免疫調(diào)節(jié)作用的藥物等。其中，T細(xì)胞是進(jìn)行細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要功能細(xì)胞，維生素A是T細(xì)胞生長、分化、激活不可缺少的因子。張春善等（2002）研究證明，維生素A水平在750、1500、2700 IU/kg與外周血T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率間呈顯著正相關(guān)，說明維生素A對維持和增強肉仔雞細(xì)胞免疫功能具有一定作用。高士爭和雷風(fēng)（1999）在肉雞日糧添加維生素A（0~44000 IU/kg）時發(fā)現(xiàn)，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率隨維生素A水平提高而增加，22000 IU/kg時達(dá)到最高值，高于22000 IU/kg時免疫反應(yīng)則降低。本試驗結(jié)果表明，維生素A能夠極顯著提高4、12周齡青農(nóng)灰鵝淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。經(jīng)過回歸分析擬合二次曲線，4、12周齡淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率最高時，維生素A的最適添加水平為7462.50、6064.88 IU/kg。

4 結(jié)論

4.1 日糧中添加維生素A可以提高12周齡青農(nóng)灰鵝的屠宰率、半凈膛率和全凈膛率，綜合考慮屠宰性能的各項指標(biāo)，得出維生素的適宜添加量為7000 IU/kg。

4.2 維生素A可以提高青農(nóng)灰鵝免疫器官指數(shù)和血清禽流感抗體效價，刺激外周血淋巴細(xì)胞的增殖，以6000~7000 IU/kg添加水平效果最佳。

綜上所述，本試驗條件下肉雞日糧中維生素A的適宜添加量為7000 IU/kg。

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