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      食用油中3-氯-1,2-丙二醇酯檢測方法的研究進(jìn)展

      2012-09-17 02:31:56郝希成王松雪
      中國糧油學(xué)報(bào) 2012年12期
      關(guān)鍵詞:單酯雙酯鹽析

      張 蕊 謝 剛 張 艷 郝希成 王松雪

      (國家糧食局科學(xué)研究院,北京 100037)

      3-氯-1,2-丙二醇酯(3-MCPD酯)是3-氯丙醇與脂肪酸的酯化產(chǎn)物。1983年西班牙首次在鹽酸精煉苯胺污染的菜籽油中檢出3-MCPD酯[1],但20余年未受到重視。隨著科技的發(fā)展和對食品安全的高度重視,近年來3-MCPD酯越來越引起科學(xué)家及政府的重視。已有研究表明,3-MCPD酯在胰脂酶作用下會釋放出3-MCPD[2],而3-MCPD是公認(rèn)食品污染物,具有潛在致癌性。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),未加熱和精煉的油脂中,沒有或只有微量3-MCPD酯(<0.05 mg/kg),而幾乎所有精煉油中3-MCPD酯含量顯著(0.2~20 mg/kg)[3]。3 - MCPD 酯成為繼反式脂肪酸之后油脂精煉過程中引入的又一潛在危害因子。

      3-MCPD酯測定方法的研究已成為當(dāng)今食品安全檢測的一大熱點(diǎn)。各國專業(yè)組織,如,德國油脂學(xué)會(DGF)、歐盟聯(lián)合研究中心(JRC)等以及國內(nèi)外科研機(jī)構(gòu)都在進(jìn)行3-MCPD酯檢測方法的研究,近兩年來有大量相關(guān)報(bào)導(dǎo)。油脂中3-MCPD酯測定方法分為間接測定法和直接測定法。本文詳細(xì)介紹國內(nèi)外食用油中3-MCPD酯的各種檢測方法研究現(xiàn)狀,討論未來3-MCPD酯檢測技術(shù)的研究發(fā)展方向,為今后我國建立食用油中3-MCPD酯標(biāo)準(zhǔn)分析方法提供參考和依據(jù)。

      1 間接測定法

      目前油脂中3-MCPD酯測定主要采用間接法。理論上3-MCPD酯有3種化合物,分別為sn1-3-MCPD單酯、sn2-3-MCPD單酯和3-MCPD雙酯。間接法不直接測定各種3-MCPD酯(sn1-3-MCPD單酯、sn2-3-MCPD單酯和3-MCPD雙酯)的含量,而是通過酯交換將油脂中存在的各種3-MCPD酯轉(zhuǎn)化為游離態(tài)3-MCPD,測定3-MCDP的含量,即,以3-MCPD的含量表示3-MCPD酯的總量。通過間接法測得的3-MCPD含量,包括油脂中原有的游離

      3-MCPD和由油脂中各種3-MCPD酯轉(zhuǎn)化的3-MCDP,但文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)在食用油中游離態(tài)3-MCPD幾乎可以忽略不計(jì)(<20 μg/kg)[4]。

      間接法測定3-MCPD酯總量的一般分析步驟(5步)為:(1)首先將食用油溶解于溶劑中,添加適量氘代同位素內(nèi)標(biāo);(2)然后在催化劑作用下,油中存在的各種3-MCPD酯與甲醇發(fā)生酯交換反應(yīng),轉(zhuǎn)化為3-MCPD;(3)中和反應(yīng)物,鹽析,提取純化3-MCPD;(4)然后釋放的3-MCPD在衍生劑作用下衍生化;(5)最后用GC-MS檢測3-MCPD的含量,見圖1。已見報(bào)導(dǎo)的文獻(xiàn)中,各分析步驟使用過的試劑見表1。

      表1 間接法各分析步驟中已報(bào)導(dǎo)過使用的試劑

      圖1 間接法一般分析步驟

      根據(jù)酯交換使用催化劑種類不同,間接法主要分為堿催化(如:NaOH、NaOCH3)間接法和酸催化(如:H2SO4)間接法。下面分別介紹這兩種方法的研究現(xiàn)狀。

      1.1 堿催化間接法

      有關(guān)堿催化間接法測定3-MCPD酯總量的研究報(bào)導(dǎo)較多,主要原因是常規(guī)堿催化間接法中,酯交換反應(yīng)時(shí)間短(幾分鐘),省時(shí)。但若不嚴(yán)格控制關(guān)鍵操作點(diǎn),可能產(chǎn)生額外或消除一部分3-MCPD,從而造成過高或過低評估3-MCPD酯總量,影響結(jié)果。

      早期較成熟測定3-MCPD酯總量的堿催化間接法是由Weisshaar R[5]提出。100 mg油樣溶于500 μL溶劑,加入250 μL 3-MCPD-d5內(nèi)標(biāo)溶液。在0.5 mol/L甲醇鈉/甲醇溶液作用下,反應(yīng)10 min后,加入3 mL異己烷、100 μL冰醋酸和3 mL NaCl溶液(200 g/L),棄去有機(jī)相,再加入3 mL異己烷,棄去有機(jī)相。向剩下水相中加入250 μL苯硼酸衍生化試劑,于80℃反應(yīng)20 min。冷卻至室溫后,加入3 mL己烷提取3-MCPD衍生物,最后用GC-MS檢測3-MCPD的含量。

      隨著深入研究,Weisshaar R等[6]發(fā)現(xiàn)使用文獻(xiàn)[5]中報(bào)導(dǎo)的堿催化測定油脂中3-MCPD酯總量的方法存在缺陷,會過高估計(jì)3-MCPD酯總量。這一結(jié)論在2009—2010年歐盟委員會聯(lián)合研究中心(JRC)下屬的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與測量研究所(IRMM)組織的測定食用油脂中3-MCPD酯試驗(yàn)驗(yàn)證中得到證明[7]。報(bào)告中測得3-MCPD酯含量過高的試驗(yàn)多是采用文獻(xiàn)[5]中的堿催化方法。分析原因是,鹽析試劑是氯化鈉,其中的氯離子與油脂中存在的一些前驅(qū)物(如:縮水甘油)反應(yīng)生成了額外的 3-MCPD,從而引起結(jié)果偏高。在 Weisshaar R等[6]這次研究中,提出了一種前處理方法,100 mg油脂溶解在0.5 mL 己烷/叔丁基甲基醚(80∶20),加入0.5 mL 1-丙醇/硫酸(100:0.5),45℃超聲波水浴中反應(yīng)15 min。其中硫酸用于破壞油脂樣品中可能存在的縮水甘油及縮水甘油酯。油脂樣品經(jīng)過前處理后按照堿催化方法測定,所測得3-MCPD含量作為樣品“真”3-MCPD酯總量。德國油脂科學(xué)協(xié)會(DGF)在此研究基礎(chǔ)上形成了官方方法C-III 18(09)[8]。

      測定油脂中3-MCPD酯總量的官方方法C-III 18(09)備受關(guān)注,很多研究者對其進(jìn)行了研究和改進(jìn)。

      Naoki Kaze1等[9]在 DGF標(biāo)準(zhǔn)方法 C-III 18(09)方法基礎(chǔ)上,研究了溶劑的極性對3-MCPD衍生物從水相到有機(jī)相中提取率的影響。與己烷相比,當(dāng)使用丁醇、氯仿、乙酸乙酯提取時(shí),回收率分別提高了(5.6 ±1.2)倍、(4.7 ±1.1)倍和(3.8 ±0.9)倍。其中丁醇極性強(qiáng),但提取物中含雜質(zhì)較多,影響MS檢測器,且丁醇沸點(diǎn)高,不易濃縮,因此從實(shí)用出發(fā),選擇氯仿、乙酸乙酯較為合適。通過實(shí)際樣品測試,證明使用氯仿、乙酸乙酯代替己烷可提高DGF標(biāo)準(zhǔn)方法C-III 18的定量準(zhǔn)確性。

      Sjaak de Koning等[3]在DGF標(biāo)準(zhǔn)方法 C-III 18(09)方法基礎(chǔ)上,改進(jìn)了GC-MS分析,將大體積進(jìn)樣和GC×GC-TOFMS技術(shù)應(yīng)用于3-MCPD酯的分析,提高了方法的靈敏度。鹽析時(shí)用NaCl溶液的提取率是使用純水提取效率的5倍,可提高分析的靈敏度,但Cl-存在,會產(chǎn)生額外的3-MCPD,影響測試結(jié)果;不使用NaCl溶液進(jìn)行提取,可消除Cl-影響,但會損失靈敏度,大體積進(jìn)樣的應(yīng)用,解決了這一矛盾。大體積進(jìn)樣25 μL代替標(biāo)準(zhǔn)方法的1 μL,不僅彌補(bǔ)因不使用NaCl溶液而損失的靈敏度,同時(shí)還進(jìn)一步提高靈敏度。GC×GC的使用,可以消除基質(zhì)干擾,使目標(biāo)物質(zhì)更好的分離,同時(shí)也增加柱容量,改進(jìn)檢出限。此方法的檢出限為0.000 80 μg/g。TOFMS開放的離子源設(shè)計(jì),連續(xù)100次分析,體系依然穩(wěn)定。

      王力清等[10]在DGF標(biāo)準(zhǔn)方法C-III 18(09)基礎(chǔ)上,將三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜多重反應(yīng)監(jiān)測技術(shù)應(yīng)用于3-MCPD酯總量的分析。通過優(yōu)化質(zhì)譜分析條件,3-MCPD酯最低檢出限為20 μg/kg,回收率在80.3%~105.4%之間,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差3.45%。

      Naoki Kaze1等[11]采用 NMR 技術(shù),研究發(fā)現(xiàn),使用DGF標(biāo)準(zhǔn)方法C-III 18(09)時(shí),3-MCPD和縮水甘油會發(fā)生雙向轉(zhuǎn)化。在酯交換步驟,3-MCPD會部分轉(zhuǎn)化為縮水甘油(37%),而在衍生化步驟中,有氯化鈉存在的酸性條件下,縮水甘油又部分轉(zhuǎn)化為3-MCPD(>70%),因此,C-Ⅲ18(09)并不適用于測定含有縮水甘油酯的油脂樣品中3-MCPD酯總量和縮水甘油酯的含量。研究還表明,使用方法C-Ⅲ18(09)中B部分并不能完全去除試樣中縮水甘油和縮水甘油酯。

      目前DGF標(biāo)準(zhǔn)方法 C-Ⅲ 18(09)[8]因存在一定問題,已于2011年6月作廢,但同時(shí)兩個(gè)新的DGF 標(biāo)準(zhǔn)方法 C - VI 17(10)[12]和 C - VI 18(10)[13]已頒布。在2010年DGF聯(lián)合試驗(yàn)中,一些數(shù)據(jù)表明使用DGF標(biāo)準(zhǔn)方法C-III 18(09)中B部分測定3-MCPD酯會過高。因此對C-III 18(09)進(jìn)行了改進(jìn),形成了C-VI 17(10),用于測定3-MCPD酯和縮水甘油酯的總和,不再用于3-MCPD酯總量的測定。C-VI 18(10)是Kuhlmann提出的方法,由兩部分組成。A部分,假設(shè)在室溫下沒有其他物質(zhì)與無機(jī)氯離子反應(yīng)生成3-MCPD,堿催化酯交換后經(jīng)PBA衍生,然后測定縮水甘油酯、3-MCPD酯及可能的游離3-MCPD的總和。B部分,測定3-MCPD酯及可能存在的游離3-MCPD。然后通過A部分和B部分來計(jì)算縮水甘油酯。

      此外,關(guān)于堿催化間接法,科研工作者還展開了其他方面的研究。

      瑞士通用公證行(SGS)德國公司 Kuhlmann[14]研究指出,在強(qiáng)堿條件下釋放出來3-MCPD極易轉(zhuǎn)化為縮水甘油,從而影響3-MCPD的測試結(jié)果,因此Kuhlmann對堿催化條件進(jìn)行了改進(jìn)。改進(jìn)后,酯化過程中釋放出的MCPD轉(zhuǎn)化為縮水甘油可以忽略。實(shí)驗(yàn)中,加標(biāo)樣品在緩和的堿催化條件下(即低濃度氫氧化鈉/甲醇),于-25℃下反應(yīng)至少16 h,釋放出MCPD和縮水甘油,接著加入600 μL溴化鈉酸性溶液終止反應(yīng),此時(shí)縮水甘油轉(zhuǎn)化成溴丙醇(MBPD),然后加入苯硼酸(PBA)將生成的MCPD和MBPD衍生化,最后用GC-MS進(jìn)行分析。Kuhlmann采用此方法參加了德國聯(lián)邦風(fēng)險(xiǎn)評估機(jī)構(gòu)(BfR)組織的測定食用油脂中3-MCPD酯的能力驗(yàn)證,五個(gè)食用油樣品的測試結(jié)果的 z值在-0.62~+0.35之間,較為理想。Kuhlmann還使用3-氯-1,2-棕櫚酸甘油酯(PP-3-MCPD)作為參比物,添加到空白芝麻油中,對方法進(jìn)行驗(yàn)證。添加濃度范圍在0.56~31 mg/kg的 PP-3-MCPD(相當(dāng)于 0.1~5.7 mg/kg的3-MCPD),標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)R2為0.999 6,檢出限(LOD)為 0.050 mg/kg ,定量限(LOQ)為 0.100 mg/kg。

      Karel Hrncirik等[15]研究了在堿催化條件下,鹽析試劑(氯化鈉和硫酸銨)及內(nèi)標(biāo)(3-MCPD-d5和PP-3-MCPD-d5)對間接法測定3-MCPD酯總量的影響。研究表明,堿催化酯交換條件下,3-MCPD的穩(wěn)定性差(只有40%左右的回收率),易轉(zhuǎn)化為縮水甘油,影響方法的靈敏度。這與文獻(xiàn)[9]、文獻(xiàn)[11]提到的一致。發(fā)現(xiàn)使用硫酸銨時(shí)作為鹽析試劑,結(jié)果比較接近真值,而使用氯化鈉時(shí),會過高評估油脂中3-MCPD酯的總量。這說明,在鹽析步驟時(shí)氯離子與油脂中存在的一些前驅(qū)物(如:縮水甘油)反應(yīng)生成了額外的3-MCPD。他們還發(fā)現(xiàn),使用硫酸銨作為鹽析試劑,測定結(jié)果不受鹽析步驟中pH的影響,當(dāng)使用氯化鈉作為鹽析試劑時(shí),鹽析步驟的pH對測定結(jié)果有很大的影響。當(dāng)pH值大于3時(shí),與硫酸銨相比,使用氯化鈉鹽析測得的3-MCPD的量高出近20%;當(dāng)pH值小于3時(shí),使用氯化鈉鹽析測得的3-MCPD的量高出近一倍。使用3-MCPD-d5作為內(nèi)標(biāo),3-MCPD酯的測定結(jié)果會高出7%~15%,而使用PP-3-MCPD-d5作為內(nèi)標(biāo),測定結(jié)果更加準(zhǔn)確。分析原因是內(nèi)標(biāo)PP-3-MCPD-d5與食用油中存在的主要3-MCPD酯(主要為3-MCPD雙酯)結(jié)構(gòu)更加相似。目前,在德國油脂學(xué)會(DGF)2011年頒布的用于分析油脂中3-MCPD酯的標(biāo)準(zhǔn)方法 C -VI 18(10)[13]已使用 PP -3-MCPD -d5作為內(nèi)標(biāo)。

      1.2 酸催化間接法

      已有文獻(xiàn)表明,酸催化間接法耐用性好,能提供更加可靠的3-MCPD酯總量的測量值,但常規(guī)酸催化酯交換反應(yīng)往往需要16 h,比較耗時(shí)[15]。

      Veronica Divinova等[16]以3 -MCPD -d5為內(nèi)標(biāo),使用GC-MS檢測3-MCPD酯。含有3-MCPD-d5的樣品,加入1.8 mL H2SO4/甲醇,40℃下反應(yīng)16 h。冷卻至室溫后,加入0.5 mL飽和NaHCO3溶液中和,55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),殘留物溶解于2 mL 20%NaCl溶液中,衍生化,進(jìn) GC-MS進(jìn)行分析。食用油樣品,3-MCPD檢出限(LOD)和定量限(LOQ)分別是1.1 mg/kg 和3.3 mg/kg。

      Weisshaar R[5]將甲醇鈉/甲醇堿催化方法與Veronica Divinova等[16]提出的 H2SO4/甲醇酸催化方法進(jìn)行了對比。使用兩種方法分別測定了10個(gè)樣品,包括甘油、單硬酯?;视?、兩個(gè)特級初榨橄欖油、精煉橄欖油以及這5個(gè)樣品對應(yīng)加入1%NaCl的樣品。結(jié)果表明,添加了1%NaCl的樣品,使用H2SO4/甲醇酸催化,會產(chǎn)生大量額外3-MCPD,此結(jié)論與文獻(xiàn)[17]一致。在試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)未添加NaCl的樣品,使用H2SO4/甲醇酸催化比使用甲醇鈉/甲醇催化所測得的3-MCPD值偏高,此結(jié)果與其他研究酸催化間接法報(bào)導(dǎo)[15,17-19]不一致。Weisshaar R 給出的原因是可能樣品中或試劑中存在痕量的氯離子。

      Alessia Ermacora等[17]評價(jià)了酸催化間接法測定3-MCPD酯的方法靈敏度和耐用性,研究了氯離子和縮水甘油對結(jié)果的干擾。結(jié)果表明,在酸催化條件下,縮水甘油酯不會干擾3-MCPD的分析結(jié)果。指出只有當(dāng)氯離子添加量高出典型實(shí)際油品中氯離子含量(實(shí)際典型的油品中氯離子的含量一般少于10 mg/kg)一個(gè)數(shù)量級時(shí),才表現(xiàn)出明顯的氯離子干擾。樣品分析之前通過使用去離子水萃取可消除氯離子的干擾。此外考察了酯交換時(shí)間(2~16 h)對3個(gè)樣品(精煉棕櫚油、加標(biāo)棕櫚原油、煎炸油)測定結(jié)果的影響,結(jié)果表明4~16 h的測定結(jié)果一致,沒有顯著差別。將酯交換時(shí)間從16 h改為4 h,沒有降低結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。他們也指出使用PP-3-MCPD-d5測定結(jié)果更加準(zhǔn)確,與文獻(xiàn)[15]一致。

      R A Abd Razak等[18]基于德國聯(lián)邦風(fēng)險(xiǎn)評估機(jī)構(gòu)(BfR)的方法 BfR -008[20](酸催化)上,評估了酯交換時(shí)間對結(jié)果的影響,并評價(jià)了方法的回收率。他們考慮到棕櫚油熔點(diǎn)高,可能需要更長酯化時(shí)間,考察了16 h、18 h、20 h的測定結(jié)果,結(jié)果表明18 h和20 h的測定結(jié)果沒有差別,最終酯化時(shí)間選擇了18 h。添加量在0.25~6.0 mg/kg范圍內(nèi)時(shí),回收率在97.6%~107.9%之間。所測校準(zhǔn)曲線線性相關(guān)性R2≥0.999,方法檢出限(LOD)和定量限(LOQ)分別是 0.25 mg/kg 和0.5 mg/kg。

      Hrncirik等[15]研究結(jié)果表明,堿催化間接法易受酯交換時(shí)間和其他因素(如:pH)的影響,最終影響方法的回收率、特異性和耐用性,而酸催化間接法避免了這個(gè)問題。因?yàn)樵谒岽呋g接法中,縮水甘油酯被不可逆轉(zhuǎn)的破壞(存在的縮水甘油酯在鹽析步驟中會轉(zhuǎn)化為額外的3-MCPD,從而干擾分析結(jié)果)。研究還表明在酸催化間接法中,鹽析試劑(硫酸銨、氯化鈉)的類型對測定結(jié)果沒有顯著影響。酸催化間接法表現(xiàn)出更好的耐用性。

      Colin G等[19]對基于HFBI衍生劑的酸催化間接法進(jìn)行了單實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證,研究了方法的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、方法檢出限、線性范圍以及耐用性。與Veronica Divinova等[16]的酸催化間接法有所不同,在酯交換前增加了前處理過程(加標(biāo)油樣溶于正己烷/乙醚中,兩次加入5 mL去離子水,離心分離,棄去水層。有機(jī)層過無水硫酸鈉,旋轉(zhuǎn)除掉溶劑。最終溶于1 mL的THF,備用),衍生化之前增加了Extrelut填料凈化步驟(因HFBI衍生劑對水分非常敏感,必須除去提取液中的水分)。酯交換過程與文獻(xiàn)[16]類似。結(jié)果表明,對于油脂,方法檢出限(LOD)為40 μg/kg,線性范圍為 40~10 000 μg/kg。當(dāng)樣品中分別添加游離3-MCPD、氯離子、甘油、縮水甘油丁酸酯時(shí),對3-MCPD酯的回收率沒有顯著影響,方法選擇性(耐用性)好。Colin G等[19]使用此方法參加了2009年歐盟聯(lián)合研究中心(EC JRC)組織的測定食用油脂中3-MCPD酯的能力驗(yàn)證,2個(gè)食用油樣品測試z值分別為-0.1和+0.2之間,結(jié)果理想。

      2 直接測定法

      間接測定法只能測定油脂中3-MCPD酯的酯交換產(chǎn)物3-MCPD的總量,不能區(qū)分油脂中原有3-MCPD酯是單酯還是雙酯,這給3-MCPD酯安全性評估帶來問題。單酯和雙酯與腸道中胰脂酶的親和性不同[2],在體內(nèi)的酶解速率、代謝途徑和毒性都不同。因此,開發(fā)一種能同時(shí)分析游離3-MCPD、3-MCPD單酯和3-MCPD雙酯的檢測方法是非常必要的。直接法是指不將油樣中的3-MCPD酯裂解為3-MCPD,而直接分析各3-MCPD酯的含量。目前關(guān)于直接法測定3-MCPD酯的方法正式期刊上發(fā)表相對較少。

      Zuzana Zelinková等[21]測定了嬰兒食品中油脂各3-MCPD酯的含量。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)合成了各種3-MCPD酯標(biāo)準(zhǔn)品。油脂溶于1 mL四氫呋喃,添加內(nèi)標(biāo)P-3-MCPD-d5和PP-3-MCPD-d5,上硅膠柱,用溶劑洗脫。收集250~500 mL含有3-MCPD雙酯流出液以及625~850 mL含有3-MCPD單酯流出液,用于GC-MS分析。方法可用于分析1,2-二月桂酸-3-MCPD 酯、1,2- 二豆蔻酸 -3-MCPD 酯、1,2- 二棕櫚酸-3-MCPD酯等9種3-MCPD酯。1,2-二棕櫚酸-3-MCPD酯最低檢出限為180 μg/kg,RSD為0.7%,在0.52~20.801 μg/mL 范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)為0.999 5;棕櫚酸-3-MCPD單酯最低檢出限為200 μg/kg,RSD 為1.7%,在0.165~20.705 μg/mL 范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)為0.996。

      Haines等[22]采 用 LC - TOFMS 直 接 測 定3-MCPD酯,不需要衍生、強(qiáng)烈的化學(xué)處理過程。首先在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)合成各種3-MCPD酯(如:3-氯-1,2-油酸甘油酯、3-氯 -1,2-亞油酸甘油酯、3-MCPD單酯混合物等)標(biāo)準(zhǔn)品,用于測定標(biāo)準(zhǔn)曲線。添加內(nèi)標(biāo)的樣品用HPLC的流動相B(100 mL 0.26 mmol醋酸鈉/800 mL亞甲基氯/100 mL乙腈)稀釋,進(jìn)樣5 μL,HPLC 流速為0.25 mL/min。高分辨率的TOFMS可以消除干擾,提高分析的靈敏度。它的結(jié)果與DGF所測結(jié)果并不一致。他們認(rèn)為是DGF中強(qiáng)烈的化學(xué)反應(yīng)步驟-酯交換和樣品制備,產(chǎn)生了額外的3-MCPD,從而造成過高估計(jì)3-MCPD酯的總量。但Haines等[22]開發(fā)的方法,也面臨一些問題。試驗(yàn)中為了得到有效ESI電離,檢測[M+Na+]加合物,向流動相中加入Na+。流動相中Na+會嚴(yán)重污染質(zhì)譜系統(tǒng),儀器需要每天使用前清理,一周需要一次昂貴清理。ESI源一些器件易被腐蝕,需要經(jīng)常更換,如:不銹鋼的噴霧針需要一周更換一次(正常使用一年或更長時(shí)間更換一次)。這些都大大增加了儀器使用成本。

      Eliska Moravcova等[23]開發(fā)了兩種直接分析各種3-MCPD酯的方法。一種是采用U-HPLC與高分辨率質(zhì)譜orbitrap MS聯(lián)用技術(shù)分析植物油中9種3-MCPD雙酯。為消除油脂干擾,經(jīng)過快速硅膠小柱從油脂樣品中分離出分析物,收集5~25 mL流出液用于分析3-MCPD雙酯。向油樣中添加2 mg/kg和10 mg/kg一系列的目標(biāo)檢測物標(biāo)物,回收率為89%~120%,RSD為5%~9%。方法最低檢出限為2~5 μg/kg(依據(jù)3-MCPD雙酯)。另一種是采用最新解析離子化技術(shù)-實(shí)時(shí)直接分析與高分辨率質(zhì)譜orbitrap MS聯(lián)用技術(shù)(DART-MS)對樣品中3-MCPD雙酯半定量檢測,4 min中內(nèi)可分析12個(gè)樣品,但最低檢出限高(40~118 μg/kg)。此外,因?yàn)?-MCPD單酯在ESI和DART條件下的離子化效率低,檢出限高(分別是365 ~420 μg/kg,2 996 ~4 300 μg/kg),所以使用目前兩個(gè)方法檢測實(shí)際樣品中3-MCPD單酯不可能。

      3 結(jié)語

      無論是間接測定3-MCPD酯總量還是直接測定各3-MCPD酯含量都存在一定優(yōu)缺點(diǎn)。

      間接法最大優(yōu)點(diǎn)是可操作性強(qiáng)[檢測儀器易得(GC-MS)、使用標(biāo)準(zhǔn)品品種少],高靈敏度(因間接法是將所有的3-MCPD酯轉(zhuǎn)化為3-MCPD,最后測定總的3-MCPD)。校準(zhǔn)曲線只需一個(gè)內(nèi)標(biāo)(如:3-MCPD-d5或PP-3-MCPD -d5等)和一個(gè)參比物(如:3-MCPD或PP-3-MCPD等),在市場可以買到相應(yīng)有效商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品,無需實(shí)驗(yàn)室自行合成,提高了實(shí)驗(yàn)室之間可比性。但另一方面間接法也存在缺點(diǎn)。間接法需要經(jīng)過一系列前處理過程,往往在酯交換、鹽析等環(huán)節(jié)可能產(chǎn)生額外或消除一部分3-MCPD,從而造成過高或過低評估3-MCPD酯總量,影響測試結(jié)果。堿催化間接法易受酯交換時(shí)間和其他因素(如:pH)影響,在操作過程中要嚴(yán)格控制關(guān)鍵點(diǎn);酸催化間接法耐用性更好,能提供更加可靠的3-MCPD酯總量測量值,但操作相對耗時(shí)。此外,間接法另一個(gè)缺點(diǎn)是無法區(qū)分3-MCPD、3-MCPD單酯和3-MCPD雙酯,只能以3-MCPD的含量來表示油脂中3-MCPD酯總量。

      直接法最大優(yōu)點(diǎn)是專一性強(qiáng),可以區(qū)分3-MCPD、3-MCPD單酯和3-MCPD雙酯。直接法無需復(fù)雜的化學(xué)前處理,可簡單處理直接進(jìn)樣,從而避免在酯交換、鹽析等過程中生成新物質(zhì),影響結(jié)果的準(zhǔn)確。但直接法也存在缺點(diǎn)。首先,直接法需要系列3-MCPD酯參比物,而不同3-MCPD酯有效商業(yè)參比物非常有限。這些參比物不得不由實(shí)驗(yàn)室自行合成,從而帶來一個(gè)問題,參比物的純度會影響分析結(jié)果的可靠性。其次,相對于LC-MS,單個(gè)3-MCPD酯的GC-MS檢出限較高。LC-MS法中使用的質(zhì)譜檢測器多為高分辨率質(zhì)譜檢測器,增加了分析成本,給實(shí)驗(yàn)室日常應(yīng)用帶來了困難。此外,Haines等[22]提出的LC-TOFMS法中,質(zhì)譜系統(tǒng)污染問題需要解決;Eliska Moravcova等[23]提出ESI和DART法中需要解決3-MCPD單酯離子化效率低的問題。

      由于間接法可操作性強(qiáng),在一定時(shí)期內(nèi)3-MCPD酯測定方法仍將主要采用間接法。目前間接法研究主要限于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的研究,缺乏系統(tǒng)嚴(yán)格評價(jià)。應(yīng)系統(tǒng)對比各種間接法,研究現(xiàn)有間接法的可靠性,找出主要關(guān)鍵點(diǎn),選擇適合方法進(jìn)行協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn),最后成為可靠的官方方法。直接法受有效商業(yè)參比物、儀器等限制,離實(shí)驗(yàn)室日常應(yīng)用還有一段距離。但直接測定3-MCPD、3-MCPD單酯和雙酯的含量,對于毒理學(xué)評價(jià)、形成機(jī)理研究有著重要的意義,因此直接法測定3-MCPD酯是未來發(fā)展趨勢。隨著將來有效參比物品種不斷增加、高端儀器的普及,直接法實(shí)驗(yàn)室日常應(yīng)用將成為可能。此外,在現(xiàn)有基礎(chǔ)上應(yīng)進(jìn)一步改進(jìn)間接法和直接法,比較間接法和直接法的一致性。

      對于我國來說,油脂科研人員應(yīng)積極參與3-MCPD酯檢測方法研究,并在國外相對成熟3-MCPD酯檢測方法基礎(chǔ)上,建立一套適合我國國情、可推廣的3-MCPD酯標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。

      [1]楊嬌,金青哲.食用植物油中3-氯丙醇酯的研究進(jìn)展[J].中國油脂,2011,36(9):1 -4

      [2]Seefelder W,Varga N,Studer A,et al.Esters of 3 - chloro-1,2-propanediol(3 - MCPD)in vegetable oils:significance in the formation of 3-MCPD[J].Food additives& contaminants.Part A,Chemistry,analysis,control,exposure & risk assessmen,2008,25(4):391 -400

      [3]Koning S,Zelinková Z,Hrncirik K,et al.Analysis of 3 -MCPD esters in edible oils using large volume injection coupled to comprehensive gas chromatography–time-offlight mass spectrometry[EB/OL].http://www.atasgl.com/ap-note/112-PEG4D-3-MCPD-ESTERS-IN-EDIBLE -OILS.pdf

      [4]Weisshaar R.Fatty acid esters of 3-MCPD:overview of occurrence and exposure estimates[J].European Journal of Lipid Science and Technology,2011,113:304 -308

      [5]Weisshaar R.Determination of total 3 - chloropropane-1,2-diol in edible oils by GC-MS after ester cleavage with sodium methoxide[J].European Journal of Lipid Science and Technology,2008,110:183 -186

      [6]Weiβhaar R,Perz R.Fatty acid esters of glycidol in refined fats and oils[J].European Journal of Lipid Science and Technology,2010,112:158 -165

      [7]Karasek L,Wenzl T,Ulberth F.Determination of 3 - MCPD esters in edible oil-methods of analysis and comparability of results[J].European Journal of Lipid Science and Technology,2011,113:1433 -1442

      [8]C-III 18(09)Ester-bond 3-chloropropane-1,2-diol(3-MCPD-esters)and glycidou(glycidyl esters)[S].DFG Standard Method Section C–Fats

      [9]Kaze N,Sato H,Yamamoto H,et al.Improvement of accuracy in quantification of 3-monochloropropane-1,2-diol esters by Deutsche Gesellschaft fu¨r Fettwissenschaft standard methods C - III 18[J].European Journal of Lipid Science and Technology,2011,113:1168 -1171

      [10]王力清,陳洪濤,廖繼承,等.同位素稀釋GC-MS/MS方法測定油脂中3-MCPD脂肪酸酯和縮水甘油脂肪酸酯的總量[J].農(nóng)業(yè)機(jī)械,2011(8):61-63

      [11]Kaze N,Sato H,Yamamoto H,et al.Bidirectional conversion between 3-monochloro-1,2-propanediol and glycidol in course of the procedure of DGF standard methods[J].Journal of the American Oil Chemists Society,2011,88:1143 -1151

      [12]C-VI 17(10)Ester-bound 3-chloropropane-1,2-diol(3-MCPD ester)and glycidol(glycidyl ester)summation method for the determination in fats and oils by GC-MS[S].DGF Standard Methods

      [13]C-VI 18(10)Fatty-acid-bound 3-chloropropane-1,2-diol(3-MCPD)and 2,3-epoxipropane-1-ol(glycidol)determination in oils and fats by GC/MS(Differential measurement)[S].DGF Standard Methods

      [14]Kuhlmann J.Determination of bound 2,3 - epoxy-1 - propanol(glycidol)and bound monochloropropanediol(MCPD)in refined oils[J].European Journal of Lipid Science and Technology,2011,113:335 -344

      [15]Hrncirik K,Zelinkova Z,Ermacora A.Critical factors of indirect determination of 3-chloropropane-1,2-diol esters[J].European Journal of Lipid Science and Technology,2011,113:361 -367

      [16]Divinova V,Svejkovska B,Dolezal M,et al.Determination of free and bound 3-chloropropane-1,2-diol by gas chromatography with mass spectrometric detection using deuterated 3 -chloropropane-1,2 -diol as internal standard[J].Czech Journal of Food Sciences,2004,22:182 -189

      [17]Ermacora A,Hrncirik K.Evaluation of an improved indirect method for the analysis of 3-MCPD esters based on acid transesterification[J].Journal of the American Oil Chemists'Society,2012,89(2):211 -217

      [18]Razak R A A,Kuntoma A,Siew W L,et al.Detection and monitoring of 3-monochloropropane-1,2-diol(3-MCPD)esters in cooking oils[J].Food Control,2012,25:355-360

      [19]Hamlet C G,Asuncion L.Single - laboratory validation of a method to quantify bound 2-chloropropane-1,3-diol and 3-chloropropane-1,2-diol in foodstuffs using acid catalysed transesterification,HFBI derivatisation and GC/MS detection[J].European Journal of Lipid Science and Technology,2011,113:345 -355

      [20]BfR Method_82_FC -008e01.Determination of 3 -MCPD fatty acid esters in edible oils and solid fats by GC-MS An indirect determination by detection of free 3-MCPD released from 3-MCPD esters by acid hydrolysis and by derivatization with phenylboronic acid[S].Federal German Institute for Risk Assessment,Dahlem,Germany,2009

      [21]Zelinková Z,Doleqal M,Velisek J.Occurrence of 3 - chloropropane-1,2 -diol fatty acid esters in infant and baby foods[J].European Food Research and Technology,2009,228:571-578

      [22]Haines T D,Adlaf K J,Rabert M,et al.Direct determination of MCPD fatty acid esters and glycidyl fatty acid esters in vegetable oils by LC - TOFMS[J].Journal of the American Oil Chemists'Society,2011,88:1 -14

      [23]Moravcova E,Vaclavik L,Lacina O,et al.Novel approaches to analysis of 3-chloropropane-1,2-diol esters in vegetable oils[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry,2012,402(9):2871-2883.

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