廣東省韶關市食品藥品檢驗所(512028)何紹萍 陳華龍 羅蔚
磺胺脒片是磺胺類藥,主要用于細菌性痢疾、腸炎等,收載于《衛(wèi)生部藥品標準化學藥品及制劑》第一冊[1],質量標準中采用永停滴定法測定其含量,其測定結果容易因為人員的操作出現誤差、重現性差。本文采用HPLC法測定磺胺脒片的含量,該方法靈敏度高、專屬性強、重現性好、結果準確,是一種行之有效的檢測方法,值得推廣使用。
1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀,UV-2550紫外分光光度計(日本島津),XS105DU十萬分之一電子天平(梅特勒托利多儀器有限公司),ZYT-1型自動永停滴定儀。
附表1 加樣回收率試驗結果(n=6)
附表2 含量測定結果(n=3)
1.2 試藥 甲醇:色譜純;水為純化水;其他試劑為分析純;磺胺脒對照品(供含量測定用,規(guī)格:約100mg,批號:100412-200401,中國藥品生物制品檢定所);磺胺脒片(廣東臺城制藥股份有限公司,規(guī)格:0.5g,批號:20090905、20101205、20110311)。
2.1 色譜條件 色譜柱:依利特Hypersil ODS2(5μm,4.6mm×200mm);流動相:水-冰醋酸-甲醇(69∶1∶30);流速:1.0mL/min;檢測波長:263nm;進樣量:20μL;柱溫:25℃。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取磺胺脒對照品11.90mg,置100mL量瓶中,加甲醇適量,振搖使溶解,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得;精密量取10mL,置另一25mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.2.2 供試品溶液的制備 取本品20片,精密稱定,研細,精密稱取適量(約相當于磺胺脒50mg),置50ml量瓶中,加甲醇適量,振搖使溶解,加甲醇稀釋至刻度,搖勻;精密量取2mL,置另一50mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.3 方法學驗證
2.3.1 線性關系考察 取上述對照品溶液,分別進樣2,4,8,16,32μL,按上述色譜條件測定,以進樣量(X)對峰面積(Y)進行回歸,得回歸方程Y=25907.452X-1502.657,r=0.9998(n=5)。結果表明,磺胺脒進樣量在0.0952~1.5232μg范圍內與峰面積線性關系良好。
2.3.2 專屬性試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各20μL,注入液相色譜儀,測定。色譜圖見附圖。
2.3.3 精密度試驗 精密吸取“2.2.1”中對照品溶液20μL,重復進樣5次,測得磺胺脒峰面積的RSD為0.2%(n=5)。精密度良好。
2.3.4 重復性試驗 取同一批號樣品(批號:20090905)6份,分別按供試品溶液制備方法制備,測定磺胺脒含量,RSD為0.5%(n=6)。
2.3.5 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液,分別在0,2,4,6,8h進樣20μL,測定磺胺脒峰面積?;前冯叻迕娣e積分值RSD為0.3%(n=5),這表明供試品溶液在8h內穩(wěn)定,說明其穩(wěn)定性良好。
2.3.6 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品(批號:20090905,標示含量97.4%)適量6份,分別精密加入磺胺脒對照品溶液適量,按“2.2.2”項中供試品溶液的制備方法制備,按上述色譜條件測定,計算加樣回收率,結果見附表1。
2.4 樣品含量測定 取3批樣品按供試品溶液制備法制備,并按上述色譜條件測定峰面積,以外標法計算其含量,并將測得結果與原標準(《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準化學藥品及制劑》第一冊)的永停滴定法測定結果進行比較比較,結果見附表2。
3.1 HPLC法測定磺胺脒片的含量,簡化了磺胺脒片的含量測定方法。
3.2 檢測波長的選擇 取磺胺脒對照品適量,用甲醇溶解,在200~400nm波長掃描,磺胺脒在202nm與263nm處有均最大吸收,由于202nm已靠近紫外吸收區(qū)的末端,故采用了263nm作為檢測波長。
3.3 流動相的選擇 比較了不同比例的甲醇-水、水-冰醋酸-甲醇、乙腈-0.025mol/L冰醋酸溶液作流動相進行試驗[2][3],結果表明,以水-冰醋酸-甲醇(69∶1∶30)為流動相磺胺脒的峰形好,保留時間適中,柱效高。
3.4 永停滴定法對儀器的精度要求很高,精度不高則會對檢出限有一定的限制,終點讀數也會由于人員的操作容易出現誤差,造成重現性差。本文采用HPLC法測定磺胺脒片,方法簡便準確、重現性好。