• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      脊髓損傷后大鼠甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的表達及甲基強的松龍干預后的變化*

      2012-12-05 01:41:34羅奮棋徐杰
      中國醫(yī)學創(chuàng)新 2012年31期
      關鍵詞:二肽甲強龍肽酶

      羅奮棋 徐杰

      脊髓損傷后,神經(jīng)細胞增生肥大,胞漿呈嗜酸性,突起變粗,分支增多。這些改變可起到減輕損傷及填補組織損傷而形成的空洞等作用,為神經(jīng)再生創(chuàng)造條件;但聚集的星形膠質細胞所形成的膠質性瘢痕及其所分泌和表達的抑制性因子形成機械及化學屏障對上下行神經(jīng)元軸突的再生有明顯的阻礙作用[1]。N2末端為甘氨酰2脯氨酰的肽鍵能被GDPA特異地水解,而該肽鍵正是構成膠質的基本結構[2],因此,推測GPDA在緩解星形膠質細胞所構成的機械和化學屏障中起到作用,從而改善脊髓繼發(fā)性損傷的進一步發(fā)展。本文對GDPA基因在多種情況下表達的變化進行研究,并探討脊髓損傷早期,GDPA對繼發(fā)性脊髓損傷的影響,現(xiàn)報告如下。

      1 材料與方法

      1.1 動物及分組 Sprague-Dawley大鼠(中科院上海實驗動物中心提供,10周齡)36只,體重180~240g。根據(jù)隨機表分為三組。假手術組、脊髓損傷未使用藥物干預組(創(chuàng)傷組)、脊髓損傷+甲強龍干預組 (甲強龍組)。每組12只。在大鼠脊髓損傷后24 h將損傷的脊髓組織切取,進行逆轉錄PCR反應。檢測GDPA的表達。

      1.2 手術方法 腹部消毒后腹腔內注射戊巴比妥鈉30 mg/kg麻醉,腰背部備皮消毒,充分暴露T8~9脊髓腰膨大。采用改良的Allen打擊法(5 g×5 cm)制作脊髓損傷模型,甲強龍組大鼠靜脈注射甲基強的松龍(30 mg/kg),假手術組未做任何處理關閉切口,創(chuàng)傷組大鼠靜脈內注射等量的0.9%氯化鈉溶液。24 h后切除脊髓損傷部位上下1 cm的脊髓組織切取,進行RT-PCR反應。

      1.3 逆轉錄PCR反應

      1.3.1 脊髓神經(jīng)細胞總的RNA使用Trizol液提取 1 ml Trizol液中加入1 g組織,反復吹打數(shù)次?;旌暇鶆蚝蠹尤?.2 ml氯仿,并予以離心(12 500 r/min,10 min)。吸取上部清液,加入0.5 ml異丙醇,離心(12 500 r/min,10 min)。沉淀物加入30 μl DEPC溶化。

      1.3.2 RNA定量和鑒定 紫外分光光度計定量RNA,計算OD260、OD280及比值。取總RNA3 μg,電泳(瓊脂糖凝膠)30 min,使用紫外光顯示28 s及18 s兩條rRNA帶,說明RNA提取完整性好。

      1.3.3 以Vector NTI Suite軟件設計檢測引物 引物序列:正義:5’TTGCGTGCTGCTATAGTGG 3’,反義:5’ ACTGCGCCACGAATTTGGG 3’,擴增產(chǎn)物長度:254bp。β-Actin檢測引物序列如下:正義:5’ GGGCAATGG TCAGTAGGAT 3’(176-196),反義:5’ CAGTGTGTGACGAG TCCGT 3’(277-257)。擴增長度為 264 bp。

      1.3.4 用One-tube RT-PCR system(Roche公司)進行一步法反轉錄和擴增。

      1.4 取5 μl PCR擴增產(chǎn)物電泳,掃描DNA密度,分析基因表達的相對豐度。

      1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件在計算機上進行分析。計量資料以(±s)表示,兩組間采用t檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

      圖3 甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶mRNA的RT-PCR結果

      2 結果

      假手術組GDPA的mRNA的表達的相對豐度為1.5403±0.1604;脊髓損傷24 h后創(chuàng)傷組GDPA的表達的相對豐度為0.5994±0.3414,與假手術組相比差異有非常顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01);GDPA在脊髓損傷后使用甲強龍干預組中的表達相對豐度為1.8432±0.1294,與創(chuàng)傷組比較差異有非常顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。表明大劑量甲基強的松龍的早期使用能促進脊髓損傷后甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶的表達恢復,發(fā)揮細胞保護作用。(表1,圖1)。β-Actin的RT-PCR結果見圖2,甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶mRNA的RT-PCR結果見圖3。

      表1 脊髓損傷后24 h二肽氨基肽酶表達情況(±s)

      表1 脊髓損傷后24 h二肽氨基肽酶表達情況(±s)

      圖1 GPDA表達的相對豐度

      圖2 β-Actin的RT-PCR結果

      3 討論

      外傷后脊髓的功能完全恢復的可能性是比較小的,在受到外傷后很短時間內就會發(fā)生繼發(fā)性的損傷,所以給予早期保護治療非常的重要。甲基強地松龍為激素類藥物,其可對此疾病進行治療,現(xiàn)今多應用于急性脊髓損傷的早期治療。

      早在1966年,Hopsu-Havu等[3]發(fā)現(xiàn)甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶。而后多位專家經(jīng)過分析證明了該酶的活性[4]。為了探索其他哺乳動物組織中是否含有此酶, 他們首先以鼠肝為樣品進行了研究,同樣證實在鼠肝和鼠腎中都存在這種新的二肽氨基肽酶,即現(xiàn)在所稱的GPDA[5-6]。

      文中建立的模型應用打擊法,造成模型脊髓損傷,此模型和人體受到外傷的情況比較相似,相關性比較好。本研究發(fā)現(xiàn)脊髓組織有甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶的表達,脊髓損傷24 h后,甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶的表達顯著降低,大劑量甲基強的松龍能促進甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶的表達,到達治療效果。

      [1]Park S J,Oh I S,Kwon J Y,et al.The effect of irradiation and methylprednisolone in spinal cord injured rats[J].Spine,2011,36(6):434-440.

      [2]Hall E D.Antioxidant therapies for acute spinal cord injury[J].Neurotherapeutics,2011,8(2):152-167.

      [3]Hopsu-Havu V K,Glenner G G.A new dipeptide naphthylamidase hydrolyzing glycyl-prolyl-beta-naphthylamide[J].Histochemie,1966,7(3):197-201.

      [4]Liu H D,Ni R Z,Xiao M B,et al.Clinical significance of serum GPDA-F determined by immunoelectrophoresis in diagnosis of hepatocellular carcinoma[J].Immunology,2006,5(2):247-249.

      [5]Thompson Coon J,Rogers G,Hewson P,et al.Surveillance of cirrhosis for hepatocellular carcinoma:systematic review and economic analysis[J].Health Technol Assess,2007,11(34):201-206.

      [6]Stammers A T,Liu J,Kwon B K.Expression of inflammatory cytokines following acute spinal cord injury in a rodent model[J].J Neurosci Res,2012,90(4):782-790.

      猜你喜歡
      二肽甲強龍肽酶
      基于肺康復運動方案聯(lián)合甲強龍靜脈輸液對慢性阻塞性肺疾病老年患者肺功能 運動耐力及生活質量的影響
      大型海藻中環(huán)二肽類抑藻活性化合物的分離純化
      海洋通報(2022年6期)2023-01-07 02:49:22
      小劑量甲強龍治療小兒難治性支原體肺炎的療效分析
      豬δ冠狀病毒氨基肽酶N的研究進展
      左旋多巴與脯氨酸或谷氨酸構成的環(huán)二肽的合成及其DPPH自由基清除活性測試
      電化學發(fā)光分析法測定糖尿病相關二肽
      分析化學(2017年12期)2017-12-25 12:24:55
      二肽的生物合成及應用研究進展
      甲強龍鼓室內注射聯(lián)合全身激素應用治療全聾型突發(fā)性耳聾患者的聽力恢復觀察
      2型糖尿病患者代謝綜合征組分與血清谷氨酰轉肽酶的相關性研究
      普米克令舒聯(lián)合甲強龍輔助治療小兒毛細支氣管炎的效果觀察
      政和县| 迭部县| 张家界市| 恩平市| 集贤县| 永新县| 米脂县| 伊金霍洛旗| 简阳市| 蓬安县| 荥经县| 资源县| 成都市| 桂林市| 辉县市| 谷城县| 岱山县| 芜湖市| 和顺县| 香港| 京山县| 仪征市| 徐州市| 资阳市| 深圳市| 霍山县| 兴城市| 三穗县| 肥东县| 太保市| 桐梓县| 和顺县| 松江区| 阿瓦提县| 富源县| 宜城市| 屏山县| 崇礼县| 长垣县| 峡江县| 武宣县|