趙 樂韓 玲

（1 河南省南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽 472000；2 河南省南陽市控制中心，河南 南陽 472000）

核酸原位雜交技術(shù)在細胞病理學(xué)的應(yīng)用

趙 樂1韓 玲2

（1 河南省南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽 472000；2 河南省南陽市控制中心，河南 南陽 472000）

核酸原位雜交技術(shù)；細胞病理學(xué)

雜交的技術(shù)原理是核酸堿基互補，指DNA互補鏈，DNA與RNA或RNA互補鏈間發(fā)生雜交。原位雜交是互補堿基序列形成氫鍵的過程。構(gòu)成穩(wěn)定的復(fù)合體或雜交體。主要工具是標(biāo)記的特定序列探針。目前應(yīng)用的探針標(biāo)記物多是非放射性核位素。探針種類主要有四類：雙鏈DNA，單鏈DNA，反義RNA和自動化合成的寡核苷酸探針。它們各有其本身特點。

原位雜交的雜交形式主要有三類：①DNA原位雜交。在細胞和組織水平上，多用于感染因子的檢測，如人乳頭狀瘤病毒（HPV）、乙型肝炎病毒（HBV）等。②熒光原位雜交，多用于細胞遺傳性疾病，在間期核和染色體水平上分析染色體異常如三體病、基因擴張、基因易位。③RNA原位雜交，主要用于RNA病毒和基因表達水平檢測，如腫瘤的某種生物標(biāo)志物以及病原微生物基因表達的RNA，EB病毒編碼的小RNA。

在感染性疾病、細胞遺傳性疾病和腫瘤三大類疾病中，都有應(yīng)用原位雜交技術(shù)的成功經(jīng)驗。

1 人類乳頭狀病毒

HPV是國際公認(rèn)的第一類致癌物，特別被列為女性高發(fā)腫瘤宮頸癌的重要病因?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)HPV有200多種亞型，HPV可感染多種器官，其中30余亞型或更多與生殖道感染有關(guān)。從HPV于癌發(fā)生的相關(guān)性，可分為高危型和低危型。通常可以采用HPV廣譜探針原位雜交作為病原診斷的初篩。HPV原位雜交所采用的探針通常是雙鏈DNA，將HPV原位雜交檢測與液基細胞學(xué)結(jié)合起來可應(yīng)用于宮頸癌篩查和預(yù)防。適用于臨床篩查HPV感染及對HPV進行基因分型。

2 乳腺癌Her2/neu（c-erbB_2）基因

采用原位雜交技術(shù)檢測乳腺Her2/neu（c-erbB_2）基因擴增是診斷細胞遺傳性疾病染色體結(jié)構(gòu)畸變的一個例子。有Her2/neu基因擴增的乳腺癌患者預(yù)后差，與乳腺癌復(fù)發(fā)時間、總體生存高度相關(guān)。大量研究證明有Her2/neu基因擴增的乳腺癌，對人源性單克隆抗體曲妥珠/赫賽汀治療有良好的反應(yīng)。

3 EB病毒

EB病毒除了作為感染源引起人類感染性疾病，如傳染性單核細胞增多癥，慢性活動性EB病毒感染等。更重要的是它與許多惡性腫瘤有關(guān)。在國際上也被列為第一類致癌物。常見的有Burkitt淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，鼻咽癌以及胃腺癌等，另外也包括一些免疫缺陷相關(guān)的淋巴組織增生性疾病如器官移植后淋巴組織增生性疾病，HIV病毒感染相關(guān)淋巴瘤等。對上述疾病進行相關(guān)病原檢測，最佳選擇是采用DNA探針，與EB病毒編碼的小RNA進行原位雜交。其優(yōu)勢在于感染的細胞通常有106～107小RNA拷貝數(shù)，最容易被捕捉而獲得確切結(jié)果。在中國90%以上人存在有EB病毒的潛伏感染。因此在人體的淋巴結(jié)和扁桃體中發(fā)現(xiàn)這類潛伏感染細胞并無特殊診斷價值。檢測到疾病感染狀態(tài)細胞，還要注意分析感染的細胞類型，密切結(jié)合常規(guī)組織學(xué)和細胞學(xué)才能分清EBER陽性信號的診斷價值和意義。

R361+.3

：A

：1671-8194（2013）02-0377-02