摘要：要讓百姓吃上放心的蔬菜，對蔬菜中農(nóng)藥殘留量檢驗尤為重要，有機磷含量檢測是一個十分重要的環(huán)節(jié)，客觀公正檢測市場中流通蔬菜的有機磷含量，是質(zhì)量檢驗人員的職責和義務(wù)，本文從專業(yè)角度介紹該指標檢測的理論依據(jù)和實施的具體方法措施等。

關(guān)鍵詞：蔬菜 農(nóng)藥殘留 有機磷

根據(jù)調(diào)查報告中提到的有關(guān)農(nóng)副產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留問題，它不僅關(guān)系到消費者的身體健康，也關(guān)系到食品貿(mào)易的發(fā)展，因此已成為政府和百姓普遍關(guān)心的熱點問題之一，而對老百姓日常生活每天都要購買和食用的蔬菜尤顯重要。在栽培過程中濫用農(nóng)藥的現(xiàn)象也非常普遍，由蔬菜引起的食物中毒也頻頻發(fā)生。本設(shè)計方案從專業(yè)角度介紹蔬菜農(nóng)藥殘留中有機磷含量的檢測。

1 農(nóng)藥殘留檢測方法的種類及特點

農(nóng)藥殘留含量的檢測方法分為兩大類，即生物測定方法和理化分析方法。生物測定方法，如活體生物測定法（利用細菌或敏感家蠅）、免疫生測定法（酶聯(lián)免疫法）、生化生物測定法（酶抑制法）等，其優(yōu)點是檢測方便、快速、經(jīng)濟，缺點是僅以定性分析為主，很難判斷各組分的準確含量。理化分析方法即儀器分析法，是采用專業(yè)大型儀器對農(nóng)藥殘留含量進行精確的定量分析，靈敏度高，可靠性強。為了定量準確測定，本文主要以理化分析為主，介紹有機磷含量檢測的方案。

2 檢測的依據(jù)（有機磷的特點和儀器分析原理）

農(nóng)藥殘留中有機磷的種類很多，如敵敵畏、樂果、毒死蜱、久效磷、甲基對硫磷、喹硫磷等。有機磷是含有C-P鍵或C-O-P、C-S-P、C-N-P鍵的有機化合物，大部分不溶于水，而溶于有機溶劑，在中性和酸性條件下穩(wěn)定，不易水解，在堿性條件下易水解而失效。

氣質(zhì)聯(lián)譜是將氣相色譜儀和質(zhì)譜儀聯(lián)用的一種現(xiàn)代化大型專業(yè)檢測儀器。氣相色譜儀中利用物質(zhì)在流動相與固定相中分配系數(shù)的不同，當兩相作相對運動時，被測樣品組分在兩相之間進行反復(fù)多次分配，諸組分的分配系數(shù)縱然只有微小差異，隨著流動相（氣體）的移動也可以有差距，最后被測樣品組分可得到分離，并被測定。但對組分定性時，若僅依據(jù)保留值，則難以對復(fù)雜未知物作出最終判斷。在質(zhì)譜儀中，有機分子在高真空下，受電子流轟擊或強電場作用，離解成各具特征質(zhì)量的碎片離子和分子離子。這些帶正電荷的離子，具有不同的質(zhì)荷比m/z（即相對離子質(zhì)量與電荷之比），在磁場中它們被分離。收集、記錄這些離子的信號及其強度，便可得到各組分的質(zhì)譜圖。根據(jù)圖中質(zhì)譜峰出現(xiàn)的位置進行定性分析，根據(jù)質(zhì)譜峰的強度進行定量分析。

蔬菜試樣中有機磷農(nóng)藥經(jīng)提取、分離、凈化后，在富氫焰上燃燒，以氫磷氧碎片的形式，放射出波長526nm的特性光，這種特性光通過濾光片選擇后，由光電倍增管接收，轉(zhuǎn)換成電信號，經(jīng)微電流放大器放大后被記錄下來。試樣的峰面積或峰高與標準品的峰面積或峰高相比，計算出試樣相當?shù)暮俊?/p>

3 樣本的采集要求

在評價分析結(jié)果的可靠性時，樣本的規(guī)范采集是保證質(zhì)量的一個重要方面。采樣的原則是：所采集的樣本必須具有代表性，否則，再先進的儀器設(shè)備，再仔細地操作，再好的重復(fù)性，結(jié)果也將毫無價值。采集的方法有：對角線法、S型法、Z型法、棋盤法、五點法等。采集的數(shù)量：3kg（不少于5個點）。采集的樣本需放入無污染的容器內(nèi)，如聚乙烯塑料袋（盒），并寫好標簽，標簽需放置于包裝內(nèi)外各一個，寫明編號、取樣日期等。包裝好的樣品應(yīng)立即送到實驗室，運輸途中避免樣本受損、污染。

4 樣本的預(yù)處理

采集的樣本送到實驗室，對易揮發(fā)的農(nóng)藥要立即進行分析。如在近日內(nèi)進行分析的樣本，放在0～-5℃的冰箱內(nèi)保存，如近期不能分析的須將樣本放在-20℃的冰箱內(nèi)保存。植物樣本貯存時，細胞已凍壞，從冰箱取出后要立即分析。

5 樣本的前處理：提取、濃縮與凈化

樣品的前處理在色譜分析過程中是一個既耗時又極易引進誤差的步驟，樣品前處理的好壞直接影響色譜分析的最終結(jié)果。因此要加強前處理，盡量去除基體；對相互干涉的目標化合物可采用預(yù)分離方法，分成幾組再分別進行測定等。樣品前處理的方法有好多種，使用時主要根據(jù)整個樣品和欲測組分的物理化學性質(zhì)以及所要使用的色譜對樣品的要求，同時也要考慮處理所需的時間和費用。下面介紹的是有機磷含量測定中樣品前處理較為常用的兩種方法：

5.1 將待測樣品用四分法縮分至100g左右，細切均勻后，稱取50.0g放入攪拌杯內(nèi)（不銹鋼或玻璃制），加入50ml水和100ml丙酮，用攪拌機細碎3分鐘，勻漿液經(jīng)鋪有硅藻土的濾紙減壓抽濾，取濾液100ml移至500ml分液漏斗中。向濾液中加入10～15g氯化鈉，使溶液處于飽和狀態(tài)，猛烈振搖2～3分鐘，靜置10分鐘，使丙酮與水相分層，將水相放入250ml分液漏斗中，加50ml二氯甲烷振搖2分鐘，再靜置分層，放去下層水相，將二氯甲烷提取液與丙酮提取液合并，經(jīng)裝有20～30g無水硫酸鈉的玻璃漏斗脫水，濾入250ml圓底燒瓶中，再以約40ml二氯甲烷分數(shù)次洗滌容器和無水硫酸鈉，并入燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（蒸發(fā)水浴溫度為40℃）濃縮至約2ml，加二氯甲烷定量至5ml。

5.2 稱取細切均勻的樣品50.0g放入搗碎器中，加入100ml乙腈-乙醇混合液（95+5，現(xiàn)配）搗碎5分鐘，加入15g氯化鈉，繼續(xù)搗碎5分鐘。轉(zhuǎn)移40ml上層有機相于200ml離心瓶中，加入15g無水硫酸鈉充分振蕩，高速離心5分鐘。定量移取30ml至200ml濃縮管中，通氮氣在35℃下濃縮至約5ml。在Envi-Carb固相萃取柱中加約2cm無水硫酸鈉，用5ml甲苯淋洗。1500mg SAX（陽離子）固相萃取柱和PSA（陰離子）固相萃取柱分別用5ml甲苯淋洗。將75ml淋洗液儲備管、Envi-Carb固相萃取柱、SAX固相萃取柱和PSA固相萃取柱從上至下，按順序相連，用5ml乙腈-甲苯（3+1，現(xiàn)配）預(yù)淋。將濃縮液轉(zhuǎn)移到儲備管中，通氮氣將樣品推入Envi-Carb柱中。每次用10ml乙腈-甲苯液淋洗，共淋洗4次，收集淋洗液于200ml濃縮瓶中并濃縮至小于1ml。加入約10ml丙酮再濃縮至2ml。

6 儀器測定

6.1 色譜柱：①弱極性毛細管柱：CP-sil5CB 30m×0.25mm（ID）×0.25um，相當于SE-30填充柱。②中等極性毛細管柱：CP-sil24CB 30m×0.25mm（ID）×0.25um，相當于OV-70填充柱。

6.2 檢測器：氮磷檢測器（TSD）。①載氣流量：2.0ml/

min。②檢測器氣體流量：氮氣28ml/min，氫氣4.4ml/min，空氣175ml/min。③溫度：拉箱：采取程序升溫過程，根據(jù)不同的待測農(nóng)藥采用不同的溫度。a50℃（保持1min）升至250℃（保持4min），升溫速率15℃/min。b80℃（保持0.5min）升至280℃（保持6min），升溫速率20℃/min。汽化室：300℃。檢測器：300℃。

6.3 測定。①吸取標準溶液注入氣相色譜儀中，確定各組分的保留時間。②配制有濃度梯度的混合標準液，吸取1μl注入色譜儀，建立標準曲線，以峰高或峰面積作為參考值。③吸取1μl試樣提取凈化液注入色譜儀分析，以保留時間定性，以所得的峰高或峰面積與標準比較定量。④若出峰異常或檢出結(jié)果差別較大，則吸取一定量的試樣提取凈化液注入色質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)進行確證，將得到的質(zhì)譜圖同標準質(zhì)譜圖相比較，來判斷檢出物質(zhì)的存在性。

7 檢測結(jié)果數(shù)據(jù)的處理

i組分有機磷農(nóng)殘含量按下式計算：

X■=■

Xi：i組分有機磷的含量，單位為mg/kg；

X：試樣提取液在分析后同標準曲線比較得到的含量，單位為mg/l；

V1：試樣提取液總體積，單位為ml；

V2：從濾液中取出用來凈化的體積，單位為ml；

V3：濃縮后的定容體積，單位為ml；

m：試樣的質(zhì)量，單位為g。

以青豆中毒死蜱為例計算：稱取樣品50.0（g），按5.1法前處理，得到試樣提取液總體積V1=150（ml），從中取出V2=100（ml）進行凈化，濃縮后定容體積V3=5.0（ml）。吸取1μl（與標樣相同的量）試樣凈化濃縮液注入色譜儀中測定得色譜圖，同標準曲線比較得到毒死蜱含量X=20.67（mg/l）代入計算式：

X■=■=■=3.1（mg/kg）

根據(jù)GB18406.1-2001《無公害蔬菜安全要求》，無公害蔬菜中有機磷農(nóng)藥毒死蜱的最高殘留限量是1.0（mg/kg）故該青豆中農(nóng)藥毒死蜱含量超標。

一般情況下，分析人員都需做平行性試驗，即同一實驗室內(nèi)，分析人員、分析設(shè)備和分析時間都相同時，用同一分析方法對同一樣品進行的雙份平行試驗，根據(jù)測定結(jié)果之間的符合程度確定分析結(jié)果的可靠性。

8 影響分析數(shù)據(jù)準確性的因素

8.1實驗室環(huán)境：實驗室內(nèi)的溫度、濕度、氣壓、空氣中的懸浮微粒的含量等參數(shù)，都有可能影響儀器的性能或改變實驗條件。例如溫度過高會促使樣品變質(zhì)，稱量不準確。相對濕度低于40%，靜電作用變得明顯起來，對儀器和樣品都可能產(chǎn)生影響?？諝庵械膽腋∥⒘．a(chǎn)生靜電荷，處理樣品或貯存樣品的塑料袋極易吸附帶電微粒，引起樣品的沾污。

8.2 水和試劑：純水是分析工作中用量最大的，水的純度直接影響分析結(jié)果的可靠性。由金屬或玻璃蒸餾器蒸餾出的水不能滿足痕量分析工作的需要，多數(shù)情況下要先經(jīng)過離子交換，然后用石英蒸餾器進行雙蒸餾。溶劑的選擇是提取的關(guān)鍵，既要注意溶劑本身的性質(zhì)，又要考慮樣品的狀況、農(nóng)藥的極性以及農(nóng)藥在試劑中代謝的情況。溶劑與所用溶質(zhì)的純度應(yīng)相當，若其純度偏低，需經(jīng)蒸鎦或分鎦，收集規(guī)定沸程內(nèi)的鎦出液，必要時應(yīng)進行檢驗，質(zhì)量合格后再使用。

8.3 器皿和洗滌：分析中應(yīng)根據(jù)被測樣品的性質(zhì)及被測組分的含量水平，從器皿材料的化學組成和表面吸附、滲透性諸方面考慮選用合適的器皿。容器的洗滌也十分重要，不僅要洗去器壁表面上的臟異物，還要用一些特殊的方法洗去容器壁的吸附沾污。

8.4 儀器設(shè)備：通用的色譜檢測器價格便宜，操作簡單，但并不是所有的檢測器都能用于危害殘留物的痕量分析，要根據(jù)所測試樣組分的性質(zhì)、儀器的特點及應(yīng)用范圍正確選擇。綜合優(yōu)化前處理、色譜分離和檢測的操作條件，減少峰的重疊，使目標化合物峰盡量分開。

近年來，蔬菜食品中農(nóng)藥殘留量問題日趨突出，百姓反響強烈。為了人民群眾的身體健康，為了農(nóng)副產(chǎn)品市場的健康發(fā)展，必須加強對農(nóng)藥殘留量的檢測，提供準確、可靠的檢驗數(shù)據(jù)，給出公平、公正的檢驗結(jié)論，為執(zhí)法提供有力的依據(jù)，確保農(nóng)副產(chǎn)品的質(zhì)量安全水平。

參考文獻：

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[3]黃海.食品快速檢測技術(shù)與方法研究進展[J].價值工程，2011（31）.

作者簡介：

王巧林（1968-），女，江蘇常熟人，工程師，從事食品化工產(chǎn)品檢測。