邢艷艷 （河南省湯陰縣畜牧獸醫(yī)總站 456150）

雞新城疫是我國家禽的頭號疫病。從80年代隨著生物學的興起，在傳統(tǒng)的滅活苗和弱毒苗的基礎上又研究開發(fā)出各種各樣的基因工程疫苗，如亞單位疫苗、核酸疫苗、肽疫苗，這些疫苗在一定程度上克服了滅活疫苗免疫力弱和弱毒苗具有感染的危險[1,2]。世界上有些國家和我國部分省市堅持只用弱毒疫苗和油乳劑滅活苗，主要的理由是怕散毒，協(xié)同調節(jié)機體的先天性防御反應與獲得性免疫反應和其他一些特征[3]。

人們一直尋找適合應用于畜禽的免疫增效劑，生物活性多糖是一種廣譜的免疫增強劑，具有抗感染、抗衰老及抗腫瘤等作用[4]。甲殼素又稱甲殼質，是自然界中產(chǎn)量僅次于纖維素的天然多糖，與葡萄糖或纖維素相比，甲殼素的生物活性來得更高，因此其主體結構與葡萄糖分子相近，其整體結構又與植物纖維素相似，具有支持及保護有機生命體的作用，甲殼素還能提高巨噬細胞(Mφ)的吞噬能力，促進抗體生成，抑制腫瘤細胞的生長[5]。本項目試圖將甲殼素與氫氧化鋁膠和蜂膠對雞新城疫(ND)免疫應答的影響進行比較，從中篩選出適宜，有效的免疫增強劑，為應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑及儀器 甲殼素(山東奧康生物科技公司)；雞新城疫疫苗(吉林省生物制品廠2007 062208)；氫氧化鋁膠和蜂膠、雞新城疫甲殼素疫苗(甲殼素的含量為0.2%)、雞新城疫鋁膠疫苗(鋁膠含量為0.2%)、雞新城疫蜂膠疫苗(蜂膠含量0.2%)均自制；ND濃縮抗原、3.8% 枸櫞酸鈉溶液、V型微量血凝板、50μl定量移液管。

1.1.2 試驗動物 未免疫的1日齡健康AA雛雞，共300只。

1.2 方法

1.2.1 雞接種前的準備 將實驗組和對照組的雛雞適應環(huán)境后，分別對每只雞采血1.5ml；分離血清，冰箱冷凍備用。

1.2.2 1%雞紅細胞制備方法 先用滅菌注射器吸取3.8%枸櫞酸鈉溶液(其量為所需血量的1/5)，從雞翅靜脈抽血至需要血量，置滅菌離心管內，加滅菌生理鹽水為抗凝血的2倍，以2500r/min離心10min，棄上清夜，再加生理鹽水懸浮血球，同上法離心沉淀，如此將紅細胞洗滌三次，最后用滅菌生理鹽水配成1%懸液。

1.2.3 雞的接種 采血后第2d對雞接種，分別肌肉注射各種佐劑疫苗；A組：接種雞新城疫甲殼素滅活苗每只4頭份；B組：接種雞新城疫蜂膠滅活苗每只4頭份；C組：接種雞新城疫鋁膠滅活苗4頭份;D組：空白對照組肌肉注射同等劑量的生理鹽水。

1.2.4 接種后雞的采血和制備血清 接種后第3、4、5、6、7、9、11、13、15、20、25 d,分別對雞采血1.5ml。每次采完血后，分別制備血清，置冰箱冷凍備用。

1.2.5 血球凝集試驗(HA) 取V型微量血凝板，每空加入50μl生理鹽水，取50μl雞新城疫病毒加入第一孔，倍比稀釋至第11孔，第12孔作對照；然后每孔加入1%(體積分數(shù))雞紅細胞50μl，振蕩混勻，37℃靜置15min后判定，以凝集50%紅細胞的最高稀釋倍數(shù)為病毒血凝價。

1.2.6 血凝抑制試驗(HI) 取25μl待測血清于V型微量血凝板，倍比稀釋，然后每孔加入4單位抗原(4U)25μl，37℃靜置15min后判定，以能抑制100%紅細胞凝集的最高稀釋倍數(shù)為血清凝集抑制價。

2 結果

2.1 血凝抑制實驗結果

血凝抑制實驗結果見下表1。

表1 各組血凝抑制實驗結果

由表1可見，在各組雞中反復隨機抽取10只雞，在3種佐劑中，甲殼素疫苗能增強特異的病毒血凝抑制抗體的效價，蜂膠疫苗在增強特異的病毒血凝抑制抗體的效價上低于甲殼素疫苗高于鋁膠疫苗，對照組在增強特異的病毒血凝抑制抗體方面最低。此結果表明，甲殼素疫苗對雞免疫雞新城疫滅活疫苗具有免疫增強作用。

2.2 接種前血清HI抗體檢測結果

對接種前采集的血清樣品進行檢測。A、B、C和對照組雞血清的HI抗體效價均為4.67log2(表2)。

2.3 接種后血清HI抗體檢測結果

分別用雞新城疫甲殼素滅活苗、雞新城疫鋁膠滅活苗、雞新城疫蜂膠滅活苗，對3組雞進行接種，接種后，A組HI抗體效價均值上升了5.33log2，B組HI抗體效價上升了4.66log2，C組HI抗體效價均值上升了2.33log2(表2)。

表2 不同佐劑疫苗免疫雞抗體(HI)效價均值 (log2)

3 討論

3.1 雞體的健康狀況

只有在雞群健康的情況下，機體的各項生理指標均正常，機體對疫苗才能產(chǎn)生最有效的免疫應答，產(chǎn)生最佳的特異性抗體[6]，本次試驗選用健康的AA雛雞。當雞感染病毒性傳染病可使雞的免疫器官和功能受到損害，從而降低了雞群的抵抗力，降低雞群對雞新城疫疫苗免疫接種的應答反應，易造成雞新城疫免疫失敗，也容易引發(fā)混合感染或繼發(fā)感染。

3.2 母源抗體的水平及其干擾

不注意母源抗體水平也是促使免疫效果不良的因素。接種雞新城疫疫苗后，產(chǎn)生新城疫抗體，該抗體經(jīng)卵黃而傳遞給雛雞，雛雞獲得這種來源于母體的新城疫抗體稱之為母源抗體[7]，正是因為有母源抗體的保護，才使得雛雞在出殼后一段時間內能抵抗病毒的侵害。母源抗體在保護雞體免受新城疫病毒侵害的同時，也能抑制雛雞新城疫免疫反應的發(fā)生，導致雛雞免疫失敗[8]。所以對雛雞接種3種佐劑苗前，先飼喂10d，依次來消除母源抗體的干擾，以保證試驗的順利進行。

4 小結

甲殼素、蜂膠和氫氧化鋁膠佐劑疫苗對雛雞免疫接種后，甲殼素佐劑苗可顯著提高雛雞的免疫力，促進抗體的產(chǎn)生，但抗體水平下降的幅度比較快，蜂膠組居中，鋁膠組抗體上升較慢維持時間較長。由此可見，甲殼素佐劑苗對雞新城疫疫苗免疫調節(jié)作用在3種佐劑苗中效果最佳。

[1]成大榮, 金山, 楊艷菊等. 不同新城疫弱毒苗對新城疫病毒的免疫保護試驗[J]. 畜牧與獸醫(yī). 2004(8): 5-6.

[2]肖桂, 游凌. 雞新城疫滅火苗的應用特點[J]. 當代畜牧雜志, 1994(2): 21-22.

[3]劉國信. 養(yǎng)雞場常用疫苗及使用方法[J]. 中國動物保健, 2006(2):26-27.

[4]王潤蓮, 孔祥浩. 甲殼糖對家禽生產(chǎn)性能及脂肪代謝的影響[J].中國畜牧雜志科技版, 2006(5): 57-59.

[5]陳洪亮. 植物多糖的制備及對肉仔雞免疫功能影響的研究[J]. 中國農業(yè)科學院, 2002: 30-31.

[6]張友, 陳永紅, 林志雄等. 供港雛雞H5禽流感病毒潛伏狀態(tài)及母源抗體衰減規(guī)律的調查[J]. 中國獸醫(yī)雜志, 2006(3): 40-41.

[7]張倩, 王志亮等. 母源抗體對測定新城疫病毒毒力的影響[J]. 中國獸醫(yī)雜志, 2006(9): 18-19.

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