張 宇

(天津市人民醫(yī)院，天津 300120)

氧化應(yīng)激反應(yīng)是由于體內(nèi)活性氧(ROS)產(chǎn)生過度、抗氧化機(jī)制減弱，二者平衡失調(diào)引起組織損傷的一種病理生理過程［1，2］，在維持性血液透析(MHD)患者中較為常見，常導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化及相關(guān)的心血管疾病，甚至死亡［3］。MHD患者產(chǎn)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)還與貧血、營養(yǎng)不良等密切相關(guān)［4］。因此，對(duì)于MHD患者，改善其體內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)狀態(tài)至關(guān)重要。已有研究表明燈盞花素對(duì)慢性腎衰患者血管內(nèi)皮具有保護(hù)作用，但作用機(jī)制是否與改善氧化應(yīng)激狀態(tài)尚未可知。2008年6月～2012年8月，我們觀察了燈盞花素對(duì)慢性腎衰MHD患者氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 同期于我院血液凈化中心行MHD的慢性腎衰患者共80例，男34例，女46例;年齡36～62(42.5±12.1)歲。透析時(shí)間為(61.3 ±26.5)個(gè)月，收縮壓為(134.5 ±27.6)mmHg，舒張壓為(72.6 ±17.2)mmHg，血紅蛋白為(113.7 ±28.4)g/L。納入標(biāo)準(zhǔn):①慢性腎小球腎炎、高血壓性腎病、糖尿病性腎病、慢性腎盂腎炎、慢性間質(zhì)性腎炎、狼瘡性腎病、尿酸性腎病、多囊腎、藥物性腎損害所致慢性腎衰及原因不明的終末期腎病等;②近3個(gè)月內(nèi)未服用維生素E、維生素C等，且未行靜脈性鐵劑治療;③無活動(dòng)性自身免疫性疾病、未服用免疫抑制劑，無惡性腫瘤病史;④近1個(gè)月內(nèi)無外傷、手術(shù)、輸血等病史，無心腦血管疾病、急慢性感染等。所有患者按照就診的先后順序，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為燈盞花素組與常規(guī)組各40例。另選擇健康成年志愿者共20例為對(duì)照組，年齡38～56(40.3±11.5)歲，男12例、女8例。三組年齡、性別等一般資料具有可比性。

1.2 血液透析及燈盞花素的應(yīng)用方法 80例患者均進(jìn)行MHD治療，每周3次，每次4 h。透析面積為1.7 m2;應(yīng)用碳酸氫鹽透析液，以自身動(dòng)—靜脈內(nèi)瘺為血管通路，血流量為200～300 mL/min，透析液流量為500 mL/min，Kt/V=1.3。密切觀察患者透析中的體溫、血壓、心率、呼吸等情況，及時(shí)處理并發(fā)癥。在此基礎(chǔ)上，燈盞花素組加用燈盞花素50 mg+5%葡萄糖250 mL靜滴，1次/d，4周為1個(gè)療程，連用8周。

1.3 血漿氧化應(yīng)激指標(biāo)測定 三組均于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采取外周靜脈血3 mL，其中燈盞花素組與常規(guī)組治療前(入組日透析前5 min)、治療后(療程節(jié)結(jié)束，再次返院透析前5 min)分別采血一次。血液標(biāo)本先靜置30 min，然后以3000 r/min離心15 min，用移液槍收集上清液體密封分裝，標(biāo)記日期后于-40℃以下凍存。①丙二醛(MDA):采用硫巴比妥酸反應(yīng)底物法測定。②晚期蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物(AOPP):采用高效液相色譜儀和電化學(xué)檢測器(1640型)，血液標(biāo)本中加入0.3 mL氯胺T標(biāo)準(zhǔn)品，依次添加pH值為7.4的磷酸鉀緩沖液2.7 mL和濃度1.16 mmol/L的碘化鈉溶液150 μL，搖勻并靜置1 min，再加入300 μL冰醋酸，采用紫外分光光度法，在340 nm條件下測定AOPP含量。③晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs):采用熒光分光光度計(jì)為測定標(biāo)本的熒光強(qiáng)度單位，測定條件:激發(fā)波長360 nm、發(fā)射波長430 nm、狹縫寬度5 nm;計(jì)算機(jī)通過熒光強(qiáng)度單位分析每毫克蛋白中AGEs含量(以熒光強(qiáng)度單位U表示)。④CRP:用辣根過氧化物酶ELISA法測定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包。計(jì)量數(shù)據(jù)以表示，多組間數(shù)據(jù)比較采用方差分析，兩組間或組內(nèi)治療前后比較采用t檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

治療前燈盞花素組及常規(guī)組血漿MDA、AOPP、AGEs及CRP均顯著高于對(duì)照組，F(xiàn)值依次為2.89、2.97、2.74 及2.52(P 均 ＜0.05)。治療 8 周后，燈盞花素組與常規(guī)組血漿MDA、AOPP、AGEs、CRP均較治療前顯著下降，t值燈盞花素組分別為2.957、3.368、3.016 及2.946，常規(guī)組分別為 2.021、2.117、2.014 及2.132，P 均 ＜0.05;但燈盞花素組下降幅度顯著大于常規(guī)組，t值分別為2.133、2.254、2.324及 2.548，P 均＜0.05。詳見表1 。

表1 三組血漿氧化應(yīng)激指標(biāo)比較()

表1 三組血漿氧化應(yīng)激指標(biāo)比較()

組別 n MDA(nmol/L) AOPP(nmol/L) AGEs(U) CRP(mg/L)40治療前 7.43 ±2.15 191.23 ±49.12 3.86 ±1.12 7.83 ±5.68治療后 4.68 ±2.18 98.53 ±38.26 2.45 ±1.07 4.26 ±1.64常規(guī)組 40治療前 7.39 ±2.32 189.97 ±46.76 3.82 ±1.24 7.66 ±6.02治療后 6.84 ±2.41 161.64 ±43.53 3.43 ±0.98 6.58 ±5.87對(duì)照組 20 3.16 ±1.34 90.87 ±32.17 1.41 ±0.33 2.21 ±0.67燈盞花素組

3 討論

3.1 慢性腎衰患者的氧化應(yīng)激狀態(tài) 慢性腎衰時(shí)，患者體內(nèi)ROS產(chǎn)生增多，使得腎組織原有的氧化/還原反應(yīng)失去平衡，即腎組織在原有的破壞基礎(chǔ)上又處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。這種氧化應(yīng)激狀態(tài)又通過多種機(jī)制加重對(duì)腎臟組織的破壞，形成惡性循環(huán)［5，6］。氧化應(yīng)激狀態(tài)造成腎臟及全身血管損傷的主要機(jī)制如下［7］:①激活蛋白激酶C(PKC)，啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)一連串細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致腎臟細(xì)胞合成膠原蛋白增加，細(xì)胞外基質(zhì)增多，進(jìn)一步加重腎衰;使血管內(nèi)皮細(xì)胞受損、血管壁纖維化，血管失去光滑內(nèi)壁極易發(fā)生心血管事件。②攻擊體內(nèi)不飽和脂肪酸，生成大量脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞胞膜，使毛細(xì)血管通透性增加;破壞血細(xì)胞包膜脂質(zhì)，使其流動(dòng)性明顯減低且易破裂，同時(shí)促進(jìn)血細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附作用，易造成心腦血管事件、增加腎衰患者貧血程度［8］。③可損傷全身多器官細(xì)胞核內(nèi)及線粒體內(nèi)的DNA(尤以血管內(nèi)皮細(xì)胞為著)，進(jìn)而增加毛細(xì)血管通透性以及心血管事件，并進(jìn)一步加重腎功能障礙。④促進(jìn)體內(nèi)生成過多的過氧化氫(H2O2)和超氧陰離子(O2-)，后兩者可通過擴(kuò)散自由穿過細(xì)胞膜，對(duì)全身臟器造成不可逆損傷［9］。⑤引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載，使細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵酶PKC等蛋白激酶激活，形成級(jí)聯(lián)反應(yīng)［10］。對(duì)于腎衰患者，其體內(nèi)氧化應(yīng)激產(chǎn)物增多的同時(shí)，機(jī)體的抗氧化能力亦顯著降低。慢性腎衰患者腎細(xì)胞內(nèi)的超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)等抗氧化酶處于耗竭狀態(tài)，腎組織抗氧化能力明顯降低;此外，腎臟細(xì)胞中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)明顯減低，血漿中的抗氧化劑維生素E、維生素C以及輔酶Q10等水平均下降。因此，治療慢性腎衰應(yīng)聯(lián)用能夠減輕體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)、增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力的藥物。

3.2 體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)的標(biāo)記物 MDA是包膜及細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝產(chǎn)物之一，其在氧化應(yīng)激狀態(tài)引起氧化反應(yīng)增加及血管損傷時(shí)水平均可升高，故為血管硬化危險(xiǎn)度評(píng)估的重要指標(biāo)。AOPP作為尿毒癥患者氧化應(yīng)激狀態(tài)下蛋白質(zhì)受到氧化破壞的產(chǎn)物，為目前尿毒癥最為敏感的標(biāo)記物，血液透析患者血清中AOPP明顯增高。AGEs是機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)、脂蛋白及蛋白質(zhì)內(nèi)氨基等與還原型糖類中的醛基產(chǎn)生糖基化反應(yīng)的產(chǎn)物，該反應(yīng)在氧化應(yīng)激狀態(tài)下無需酶促即可發(fā)生，處于氧化應(yīng)激狀態(tài)的尿毒癥患者血清AGEs明顯增加。CRP可作為尿毒癥患者氧化應(yīng)激狀態(tài)慢性炎癥反應(yīng)加劇的敏感預(yù)測指標(biāo)。本研究顯示，MHD患者各項(xiàng)氧化應(yīng)激指標(biāo)均明顯高于對(duì)照組，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。故檢測MHD患者血漿MDA、AOPP、AGEs和CRP等能夠明確患者體內(nèi)氧化應(yīng)激程度。

3.3 燈盞花素對(duì)MHD患者氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響燈盞花又名燈盞細(xì)辛、東菊，是菊科植物短亭飛蓬的干燥全草［11］。燈盞花素具有降低血液黏稠度、擴(kuò)張血管、改善局部血流及抗血小板的功效，臨床常用來治療腦血管意外后遺癥(癱瘓)、缺血性卒中等，亦可治療風(fēng)濕痛、胃痛、牙痛、感冒、骨髓炎等。最新研究發(fā)現(xiàn)，燈盞花素尚具有抑制氧化應(yīng)激和增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力的作用，減輕慢性腎衰患者全身并發(fā)癥的效果顯著［1］。本研究顯示，MHD患者治療后血漿MDA、AOPP、AGEs及CRP等均顯著降低，但燈盞花素組更為顯著可能機(jī)制為燈盞花素有如下作用:主要藥效成分燈盞花總黃酮即4，5，6-三羥基黃酮-7-葡萄糖酸甙，可清除體內(nèi)過多的ROS，且效果隨ROS含量增加而增強(qiáng)，為ROS濃度依賴性藥物;清除自由基能力較強(qiáng)，可減輕細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及酶類的氧化;促進(jìn)體內(nèi)SOD生成并提高其活性，從而使O2-生成明顯減少;還可通過提高GSH-PX和CAT的活性，及時(shí)清除SOD在消除O2-過程中生成的過量H2O2，進(jìn)一步減少-OH及脂類自由基的產(chǎn)生;還能提高機(jī)體H2O2酶的活性及多種抗氧化體系的功能，從多角度、多方面增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力［12］。

綜上所述，燈盞花素能通過多種機(jī)制抑制慢性腎衰MHD患者體內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)，同時(shí)可增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化功能。

［1］王月芬，葉山東，邢燕.吡格列酮對(duì)STZ糖尿病大鼠腎組織氧化應(yīng)激的影響［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2013，29(1):85-88.

［2］Lezo A，Biasi F，Massarenti P，et al.Oxidative stress in stable cystic fibrosis patients:do we need higher antioxidant plasma levels［J］.J Cyst Fibros，2013，12(1):35-41.

［3］Jumbo-Lucioni PP，Hopson ML，Hang D，et al.Oxidative stress contributes to outcome severity in a Drosophila melanogaster model of classic galactosemia［J］.Dis Model Mech，2013，6(1):84-94.

［4］Olveira G，Olveira C，Dorado A，et al.Cellular and plasma oxidative stress biomarkers are raised in adults with bronchiectasis［J］.Clin Nutr，2013，32(1):112-117.

［5］Trpkovic A，Todorovic-Markovic B，Trajkovic V.Toxicity of pristine versus functionalized fullerenes:mechanisms of cell damage and the role of oxidative stress［J］.Arch Toxicol，2012，86(12):1809-1827.

［6］Sayir F，Kavak S，Meral I，et al.Effects of crush and axotomy on oxidative stress and some trace element levels in phrenic nerve of rats［J］.Brain Res Bull，2013，92(1):84-88.

［7］杜飛，高原，王興紅，等.燈盞花素治療糖尿病大鼠血清對(duì)近端小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2008，9(2):168-169.

［8］關(guān)望，王海英，陳志芳，等.外源性硫化氫對(duì)急性肺損傷大鼠氧化應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010，16(18):7-8.

［9］黃伯梯，王志強(qiáng)，薛振懷.燈盞花素聯(lián)合丹參粉針治療不穩(wěn)定心絞痛的療效觀察［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2009，28(2):9-10.

［10］梁冰，李淑芳，宛蕾，等.復(fù)方燈盞花滴丸對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性急性心肌梗死的保護(hù)作用［J］.中藥藥理與臨床，2007，23(4):38-40.

［11］敖曼.大孔樹脂純化多舌飛蓬中燈盞花素的工藝研究［J］.醫(yī)學(xué)信息(中旬刊)，2011，24(5):2091-2093.

［12］Liu H，Yang XL，Wang Y，et al.Protective effects of scutellarin on superoxide-induced oxidative stress in ratcortical synaptosomes［J］.Acta Pharmacologica Sinica，2003，24(11):1113-1117.