宋衛(wèi)華

近年來，實驗室監(jiān)測在重大動物疫病的診斷及防控中發(fā)揮了不可取代的重要作用。而實驗室監(jiān)測結(jié)果的準(zhǔn)確性、有效性除受實驗方法、實驗設(shè)備、監(jiān)測試劑、實驗操作等因素影響外，還要受到樣品的采集、運輸、保存等因素的影響。樣品的采集、運輸、保存是監(jiān)測工作順利開展的基礎(chǔ)，決定了實驗結(jié)果的可靠性，檢驗結(jié)果能否反映疾病的主要病原、病因、一定程度上依賴于樣品的代表性和質(zhì)量。實驗室監(jiān)測結(jié)果的準(zhǔn)確性、有效性，是否能夠反映出疫病的真實情況，都與檢測樣品的采集有重要關(guān)系。筆者通過自己從事動物疫病監(jiān)測工作多年的做法和體會，動物疫病監(jiān)測樣品采集、運送、保存應(yīng)注意以下幾方面的問題：

1.樣品采集要有代表性、合理性

開展疫病監(jiān)測工作采樣時，要根據(jù)監(jiān)測方案的整體要求、目的、方法和措施，結(jié)合當(dāng)?shù)貐^(qū)域分布，選擇具有代表性的點或養(yǎng)殖場（戶），做到采樣布局合理，應(yīng)盡可能全面、充分地反映總體的特征。同時，還要考慮動物的日齡、飼養(yǎng)密度、體質(zhì)強弱，地勢特點、交通特點等因素。只有這樣采集樣品，通過監(jiān)測結(jié)果，才能綜合評估出總體疫病流行、分布趨勢。

2.樣品采集要有時效性、適量性

由于監(jiān)測對象和監(jiān)測項目的不同，樣品采集是有時間要求的，應(yīng)嚴(yán)格按監(jiān)測對象和項目所要求的時間及時采樣。目前疫病監(jiān)測主要通過檢測抗體和病原兩種方法。但是，疫苗免疫或病原感染后，機體內(nèi)的抗體或病原濃度在不同時期是不同的，往往監(jiān)測到的數(shù)值是不一樣的。所以要根據(jù)監(jiān)測的目的選取不同的時間采取樣品，如果檢測疫苗的保護效價，一般在免疫后10～15d采集。監(jiān)測病原時，由于感染初期病原在機體內(nèi)存在較少，并在各組織內(nèi)分布不均，所以要根據(jù)不同時期，采集不同部位的組織進(jìn)行監(jiān)測。病死后的動物要立即采集樣品，尤其夏季不應(yīng)超過6h，冬季不能超過24h，拖延過久，則組織變性、腐敗，影響監(jiān)測結(jié)果。另外，采集樣品的數(shù)量要滿足診斷監(jiān)測的需要，并留有余地，以備必要的復(fù)檢使用。

3.樣品采集要有典型性、針對性

動物疫病監(jiān)測采集樣品時，要根據(jù)檢測的目的，以及實驗室監(jiān)測方法的不同，進(jìn)行有針對性的采集樣品。同時應(yīng)根據(jù)發(fā)病動物典型臨床癥狀、病變、是否治療和有無并發(fā)癥等情況，選擇未治療、病變明顯、兼顧并發(fā)癥等準(zhǔn)確采樣、采集典型樣品。監(jiān)測抗體一般采集免疫后10～15d的動物靜脈血液，靜置后析出血清；監(jiān)測病原采集樣品，活畜采集其血液、口鼻分泌物、乳汁、膿汁或局部滲出液、生殖道分泌物等。對死亡動物尸體，應(yīng)剝?nèi)テつw，打開胸腹腔，有選擇的采集相應(yīng)含菌（毒）量最多的臟器或內(nèi)容物。如口蹄疫監(jiān)測中應(yīng)當(dāng)采集發(fā)病動物（牛、羊、豬）未破裂的舌面或蹄部、鼻鏡、乳頭等部位的水泡皮和水泡液，屠宰后采集淋巴結(jié)、脊髓、肌肉等；結(jié)核病細(xì)菌性檢查時，死畜可采淋巴結(jié)及其它組織，活畜可采其痰、乳、精液、子宮分秘物、尿和糞便等。

4.樣品采集要有無菌性、安全性

對于準(zhǔn)備進(jìn)行病原學(xué)及血清學(xué)監(jiān)測的樣品，所用包裝工具、容器和采集器械必須經(jīng)過高壓滅菌處理，容器必須完整無損，密封不漏出液體，采樣必須按無菌常規(guī)操作，同時要注意樣品和環(huán)境的污染。采樣時要做好個人防護，穿工作服、戴手套、口罩等，防止病原感染和外來病的擴散，避免事故發(fā)生。如疑似炭疽則不能剖檢，而應(yīng)采取局部皮膚或耳尖的血液，涂片鏡檢排除炭疽后方可解剖采樣。樣品采集后要及時對尸體進(jìn)行無害化處理，被污染的場地要進(jìn)行徹底消毒。

5.樣品運送要有及時性、快速性

裝載樣品的容器可選擇玻璃的或塑料的，可以是瓶式、試管式或袋式，對所采集的樣品，原則上講，要一種樣品一個容器，立即密封。如果選用塑料袋，則應(yīng)用兩層袋，分別用線結(jié)扎袋口，防止液體漏出或水污染樣品。然后，要根據(jù)樣品的保存要求及監(jiān)測的目的，盡快送往實驗室。如供細(xì)菌監(jiān)測、寄生蟲檢驗及血清學(xué)監(jiān)測的冷藏樣品，必須在24h內(nèi)送到實驗室；供病毒監(jiān)測的樣品，必須在數(shù)小時內(nèi)送達(dá)實驗室；經(jīng)凍結(jié)的樣品須在24h內(nèi)送到，24h內(nèi)不能送到的，在運送途中須樣品處于-20℃以下。送檢樣品過程中，要妥善包裝，盡可能的平穩(wěn)運輸，防止碰撞，容器破損，造成污染。需要注意的是所有盛裝送檢樣品的容器，應(yīng)貼上能防止因各種可能原因（冷凍、擠碰等）脫落的標(biāo)簽，同時應(yīng)標(biāo)明采樣時間、地點、編號和樣品名稱、畜禽品種等，并附疫情相關(guān)資料一并送達(dá)實驗室。

6.樣品保存要有妥善性、低溫性

樣品采集后要及時送檢，不能及時監(jiān)測的，要妥善低溫保存。但保存時間過長，樣品由于血液或組織中的酶、微生物的影響，蛋白質(zhì)分解代謝，甚至腐敗、變質(zhì)，加之病原自身分解和死亡，導(dǎo)致監(jiān)測濃度偏低，或者監(jiān)測不到，疫病監(jiān)測也就失去了預(yù)警意義。血清樣品若要長時間保存，則將血清置于冰箱-20℃凍存，但不可以反復(fù)凍融，如短時間保存，可置4℃冷藏；全血置冰箱4℃保存。采集的實質(zhì)性器官樣品存放在消毒過的容器內(nèi)密封，最好用蠟封固，置于裝有冰塊的冰瓶中快速送檢，若不能及時送檢，最佳的保存方法應(yīng)為冷凍。一般情況下，供細(xì)菌檢測的樣品應(yīng)在4℃保存，或可用滅菌后的30%～50%的甘油生理鹽水保存；供病毒檢測的樣品應(yīng)在0℃以下低溫保存，也可用滅菌后的30%～50%的甘油生理鹽水保存。