半枝蓮化學(xué)成分研究＊

李園園，唐旭利，李平林，李國強(qiáng)＊＊

（中國海洋大學(xué)1.醫(yī)藥學(xué)院，海洋藥物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2.化學(xué)化工學(xué)院，山東 青島266003）

半枝蓮（Scutellaria barbata D.Don）為唇形科黃芩屬植物，又名牙刷草，狹葉韓信草等，以干燥全草入藥。其名最早見于《外科正宗》，味辛、苦，性寒，具有清熱解毒、化瘀利尿之功效，是一種常用中藥，多用于治療疔瘡中毒、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌撲傷痛、水腫、黃疸等［1］。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，半枝蓮具有明顯的解熱［2］、抗 癌、護(hù) 肝［3］和 抑 菌［4］等 活 性。 臨 床 可 治 療 肝炎，肝硬化腹水，腎炎等，近年來其在治療癌癥如直腸癌、肺癌、淋巴癌等方面的積極功效引起人們的極大關(guān)注［5－6］。為了尋找半枝蓮中的有效成分，對(duì)半枝蓮Scutellaria barbata D.Don進(jìn)行了較系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。從甲醇提取物中，共分離鑒定了10個(gè)單體化合物（見圖1）：齊墩果酸（1）、熊果酸（2）、反式－4－甲基肉桂酸（3）、金色酰胺醇酯（4）、對(duì)羥基苯甲醛（5）、對(duì)羥基苯乙酮（6）、5－羥基－7，3′，4′，5′－四甲氧基黃酮（7）、芹菜素（8）、5，7，4′－三羥基－8－甲氧基黃酮（9）、5，7，4′－三羥基－6－甲氧基黃酮（10）。本文報(bào)道以上10個(gè)化合物的分離純化以及結(jié)構(gòu)鑒定工作。

圖1 化合物1－10的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Structure of ompounds 1－10

1 儀器與材料

NMR由日本Jeol公司JNM－ECP600型核磁共振儀測(cè)定，TMS為內(nèi)標(biāo)；HPLC在美國Agilent 1100高效液相色譜儀上完成；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國Heidolph公司）；BSZ－100自動(dòng)部分收集器（上海滬西分析儀器廠有限公司）。薄層硅膠和柱層析硅膠（青島海洋化工廠）；柱層析ODS（北京金歐亞科技發(fā)展有限公司）；Sephadex LH－20（Amersham Pharmacia Biotech AB公司）。常用有機(jī)試劑均為國產(chǎn)分析純。

半枝蓮樣品于2007年10月采自安徽桐城，種屬由山東中醫(yī)藥藥大學(xué)周鳳琴教授鑒定為半枝蓮Scutellaria barbata D.Don。標(biāo)本存放于中國海洋大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院天然藥物化學(xué)一室。

2 提取與分離

將半枝蓮干燥全草樣品（干重5kg）粉碎后，室溫下用甲醇10L動(dòng)態(tài)冷浸提取3次，合并提取液，真空濃縮，得總浸膏426.7g，粗提物浸膏用水溶解，分別用石油醚（2L×4）、乙酸乙酯（2L×4）、水飽和正丁醇（2L×4）萃取。將各萃取相分別減壓回收溶劑，得石油醚部分59.5g、乙酸乙酯部分63.5g、正丁醇部分68g。取乙酸乙酯部分63.5g，經(jīng)100～200目硅膠減壓柱層析，氯仿／甲醇梯度洗脫（100%～0%），分為9個(gè)粗部位（Y－1～Y－9），經(jīng)反復(fù)正、反相硅膠柱層析、Sephadex LH－20柱層析和半制備高效液相色譜分離純化，從部位Y－2中得到化合物1（15mg），2（13mg），3（8.8mg），4（17mg），5（4.5mg），6（3.5mg），7（4.7mg）；取正丁醇部分68g，經(jīng)100～200目硅膠減壓柱層析，氯仿／甲醇梯度洗脫（100%～0%），分為7個(gè)粗部位（Z－1～Z－7），經(jīng)反復(fù)正相硅膠柱層析、Sephadex LH－20柱層析分離純化，從部位Z－2中得到化合物8（20mg），9（7mg），10（9mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針晶（氯仿），mp 308～310℃，硫酸－香草醛反應(yīng)顯藍(lán)色，Liebermann－Burchard反應(yīng)陽性，提示其為 甾 體 或 三 萜 類 化 合 物，1H－NMR （600MHz，CDCl3）δH：5.28（1H，t，J＝3.40Hz，H－12），3.23（1H，dd，J＝11.5，4.4Hz，H－3），2.82（1H，dd，J＝13.74，4.4Hz，H－18），1.11 （3H，s，CH3－27），0.99（3H，s，CH3－23），0.93（3H，s，CH3－25），0.91（3H，s，CH3－29），0.91 （3H，s，CH3－30），0.78 （3H，s，CH3－24），0.75 （3H，s，CH3－26）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道基本一致，經(jīng)薄層層析檢查與齊墩果酸對(duì)照品的Rf值，斑點(diǎn)顏色也一致，混合斑點(diǎn)不分離，故鑒定化合物1為齊墩果酸。

化合物2：無色針晶（氯仿），mp 283～288℃，硫酸－香草醛反應(yīng)顯藍(lán)色Liebermann－Burchard反應(yīng)陽性，提示其為甾體或三萜類化合物，1H－NMR （600MHz，CDCl3）δH：5.26（1H，brs，H－12），3.23（1H，dd，J＝4.8，4.0Hz，H－3），2.87 （1H，d，J＝3.8Hz，H－18），1.08（3H，s，CH3－27），0.99 （3H，s，CH3－23），0.95（3H，d，J＝6.6Hz，CH3－29），0.93 （3H，s，CH3－25），0.86（3H，d，J＝6.6Hz，CH3－30），0.79 （3H，s，CH3－24），0.78（3H，s，CH3－26）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道基本一致，經(jīng)薄層層析檢查與熊果酸對(duì)照品的Rf值，斑點(diǎn)顏色也一致，混合斑點(diǎn)不分離，鑒定化合物2為熊果酸。

化合物3：無色油狀物 （氯仿），1H－NMR （600MHz，CDCl3）δH：7.51（1H，d，J＝15.9Hz，H－3），7.44（2H，d，J＝8.8Hz，H－5，9），6.90 （2H，d，J＝8.8Hz，H－6，8），6.61（1H，d，J＝15.9Hz，H－2），2.39（3H，s，CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道基本一致，鑒定化合物3為反式－4－甲基肉桂酸。

化合物4：白色針狀結(jié)晶（氯仿），mp 179～181℃，1HNMR （600MHz，CDCl3）δH：7.71 （2H，d，J＝7.7 Hz，H－j，j′），7.52 （1H，d，J＝7.7Hz，H－I），7.44（2H，dd，J＝7.7，7.15Hz，H－k，k′），7.29（1H，m，H－h(huán)），7.26 （2H，m，H－g，g′），7.22 （2H，m，H－f，f′），7.17 （1H，m，H－d），7.14 （2H，m，H－c，c′），7.07（2H，d，J＝7.7Hz，H－b，b′），6.77（1H，d，J＝7.7Hz，Benzoyl－NH），6.00（1H，d，J＝8.3Hz，CH－CO－NH－CH），4.77 （1H，m，H－2′），4.35 （1H，m，H－2），3.93（1H，dd，J＝11.0，4.4Hz，H－1b），3.83（1H，dd，J＝11.0，4.4Hz，H－1a），3.21（1H，dd，J＝13.7，6.8Hz，H－3′b），3.06（1H，dd，J＝13.7，8.3Hz，H－3′a），2.75 （2H，m，H－3），2.02（3H，s，CH3－CO）。13C－NMR （150MHz，CDCl3）δC：64.5 （C－1），49.4 （C－2），37.4 （C－3），170.3 （C－1′），55.0（C－2′），38.4 （C－3′），136.7 （C－a），129.1 （C－b，b′），128.5 （C－c，c′），126.7 （C－d），136.6 （C－e），128.7（C－f，f′），129.3 （C－g，g′），127.1 （C－h(huán)），167.1 （C－m），133.6 （C－i），127.0 （C－j，j′），128.6（C－k，k′），131.9（C－l），20.8 （CH3－CO），170.8 （CH3－CO）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道基本一致，鑒定化合物4為金色酰胺醇酯。

化合物5：無色針晶（石油醚），mp 111～113℃，三氯化鐵－鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，示有酚羥基存在。1H－NMR（600MHz，DMSO－d6）δH：10.60 （1H，s，4－OH），9.78（1H，s，CHO），7.75（2H，d，J＝8.8Hz，H－2，6），6.92 （2H，d，J＝8.8Hz，H－3，5）。13C－NMR（150MHz，DMSO－d6）δC：191.2 （C＝O），128.4 （C－1），132.5（C－2，6），116.4（C－3，5），164.4（C－4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道基本一致，鑒定化合物5為對(duì)羥基苯甲醛。

化合物6：無色針晶（石油醚），三氯化鐵－鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，示有酚羥基存在。1H－NMR （600MHz，DMSO－d6）δH：10.37（1H，brs，4－OH），7.82（2H，d，J＝8.8Hz，H－2，6），6.84 （2H，d，J＝8.8Hz，H－3，5），2.46（3H，s，CH3）。13C－NMR（150MHz，DMSO－d6）δC：196.1 （C＝O），128.7（C－l），130.8 （C－2，6），115.3（C－3，5），162.1（C－4），26.4（CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道基本一致，鑒定化合物6為對(duì)羥基苯乙酮。

化合物7：黃色粉末（氯仿），mp 187～190℃，三氯化鐵－鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，示有酚羥基存在，鹽酸－鎂粉反應(yīng)陽 性，示 為 黃 酮 類 化 合 物。1H－NMR （600MHz，CDCl3）δH：12.73（1H，s，5－OH），7.12（2H，s，H－2′，6′），6.59（1H，s，H－3），6.56（1H，s，H－8），5.93（1H，s，H－6），4.01 （6H，s，3′，5′－OCH3），3.99（3H，s，4′－OCH3），3.94 （3H，s，7－OCH3）。13CNMR （150MHz，CDCl3）δC：158.1（C－2），154.8 （C－3），182.7（C－4），162.6（C－5），98.5（C－6），166.0（C－7），93.1（C－8），166.0（C－9），104.1 （C－10），141.8（C－l′），106.0 （C－2′），158.1 （C－3′），162.6 （C－4′），106.0（C－5′），126.9 （C－6′），61.5 （OCH3－7），56.7 （OCH3－3′），56.8 （OCH3－5′），56.2 （OCH3－4′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道基本一致，鑒定化合物7為5－羥基－7，3′，4′，5′－四甲氧基黃酮。

化合物8：黃色針狀結(jié)晶（甲醇），mp 347～348℃，三氯化鐵－鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，示有酚羥基存在，鹽酸－鎂粉反應(yīng)陽性，示為黃酮類化合物。1H－NMR （600MHz，DMSO－d6）δH：13.00（1H，s，5－OH），10.78（1H，s，7－OH），7.93 （2H，d，J＝8.8Hz，H－2′，6′），6.93（2H，d，J＝8.8Hz，H－3′，5′），6.79（1H，s，H－3），6.49（1H，d，J＝2.2Hz，H－8），6.20（1H，d，J＝2.2Hz，H－6）。13C－NMR （150MHz，DMSO－d6）δC：164.1 （C－2），103.7 （C－3），181.8 （C－4），157.3 （C－5），98.8（C－6），163.8 （C－7），94.0 （C－8），157.2 （C－9），102.9（C－10），121.2 （C－1′），128.5 （C－2′），116.0 （C－3′），161.5（C－4′），116.0 （C－5′），128.6 （C－6′）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道的芹菜素基本一致，故鑒定化合物8為芹菜素。

化合物9：黃色針狀結(jié)晶（甲醇），mp 299～301℃，三氯化鐵－鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，示有酚羥基存在；鹽酸－鎂粉反應(yīng)陽性，示為黃酮類化合物。1H－NMR （600MHz，DMSO－d6）δH：12.65（1H，s，5－OH），7.94（2H，d，J＝8.8Hz，H－2′，6′），6.97（2H，d，J＝8.8Hz，H－3′，5′），6.81（1H，s，H－3），6.29（1H，s，H－6），3.84（3H，s，8－OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］對(duì)照基本一致，鑒定化合物9為5，7，4′－三羥基－8－甲氧基黃酮（4′－羥基漢黃芩素）。

化合物10：黃色針狀結(jié)晶（甲醇），mp 228～230℃，三氯化鐵－鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，示有酚羥基存在；鹽酸－鎂粉反應(yīng)陽性，示為黃酮類化合物。1H－NMR （600MHz，DMSO－d6）δH：12.65（1H，s，5－OH），7.94（2H，d，J＝8.8Hz，H－2′，6′），6.93（2H，d，J＝8.8Hz，H－3′，5′），6.79（1H，s，H－3），6.60（1H，s，H－8），3.75（3H，s，8－OCH3）；13C－NMR （150MHz，DMSO－d6）δC：164.0（C－2），102.5（C－3），182.1（C－4），152.9 （C－5），131.4（C－6），157.2 （C－7），94.2 （C－8），152.5 （C－9），104.1 （C－10），121.2 （C－1′），128.4 （C－2′），116.1（C－3′），161.2 （C－4′），116.1 （C－5′），128.5 （C－6′），60.0（6－OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］對(duì)照基本一致，鑒定化合物10為5，7，4′－三羥基－6－甲氧基黃酮。

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