嬰幼兒喘息治療前后炎性因子與細(xì)胞因子水平變化及意義

高素華 應(yīng)延風(fēng) 宋春函 應(yīng)佩蓓 胡國(guó)華 王有成

嬰幼兒喘息是一種呼吸道變態(tài)反應(yīng)性疾病，其病理學(xué)特征之一是嗜酸粒細(xì)胞(EOS)增多，且主要是活化的［1］。血清嗜酸細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)是EOS活化后脫顆粒釋放的一種炎癥介質(zhì)，在形成氣道炎癥的過(guò)程中起主要作用，也是反映氣道炎癥活動(dòng)的重要指標(biāo)物，又Thl/Th2細(xì)胞間的失衡是哮喘發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制［2］。測(cè)定血清ECP、EOS及Thl/Th2相關(guān)的IL-6和IFN-γ水平可反應(yīng)氣道炎癥的嚴(yán)重程度及臨床病情，以便指導(dǎo)哮喘的抗炎治療。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選自2010年9月～2012年9月浙江省金華市人民醫(yī)院呼吸門(mén)診或住院的喘息嬰幼兒60例，符合我國(guó)兒童哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，隨機(jī)分為喘息急性發(fā)作期組30例，其中男性16例，女性14例，平均年齡(16.4±9.1)個(gè)月，平均病程(12.1±8.8)h;喘息緩解期組30例，其中男性18例，女性12例，平均年齡(17.1±8.8)個(gè)月;平均病程(3.2±1.0)周;另設(shè)健康查體者30人，男性17人，女性13人，平均年齡(16.8±9.8)個(gè)月，排除過(guò)敏性疾病和其他與變態(tài)反應(yīng)有關(guān)的慢性疾病、并除外神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞因子測(cè)定 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè) IL-6、IFN-γ，采靜脈血5 ml，在20 ～25℃室溫下凝血60 min，以3000 r/min離心 l0 min，分離血清，-20℃保存，待測(cè)定。試劑盒購(gòu)自深圳晶美生物有限公司，嚴(yán)格按試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)操作。

1.2.2 炎性因子測(cè)定 采用Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀。瑞典Pharmacia公司的UniCAPl000熒光酶免疫分析儀及ECP測(cè)定試劑盒(法碼西亞公司)，抽取靜脈血(同上)，且嚴(yán)格按檢測(cè)要求操作。入院第2天清晨空腹抽取乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝靜脈血2～3 ml伊紅染色，顯微鏡下檢測(cè)EOS計(jì)數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo) 用藥前和緩解期(治療后2周病情好轉(zhuǎn))分別測(cè)定外周血嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、干擾素γ(IFN-γ)及血清嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，本組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以(±s)表示，組間差異采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

喘息發(fā)作期組 ECP、EOS與 IL-6明顯高于健康組及緩解期組(P＜0.01)。即使緩解期，上述3項(xiàng)指標(biāo)仍不能達(dá)到健康組水平(P＜0.01);IFN-γ喘息發(fā)作期組明顯低于健康組及緩解期組(P＜0.01)，即使緩解期有明顯上升，仍達(dá)不到健康組水平(P＜0.01)，見(jiàn)表1。

表1 喘息嬰幼兒炎性因子與細(xì)胞因子測(cè)定結(jié)果(±s)

表1 喘息嬰幼兒炎性因子與細(xì)胞因子測(cè)定結(jié)果(±s)

注:與健康組比aP＜0.01，與緩解期組比bP＜0.01

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3 討論

近年來(lái)有關(guān)研究表明，哮喘發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制［4］是Thl/Th2細(xì)胞間的失衡，如代表Thl型細(xì)胞因子的IFN-γ減少，Th2分泌的前變應(yīng)細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-13等的增多。Yokoyama等［5］認(rèn)為哮喘發(fā)作期及無(wú)癥狀的IL-6均高于正常人，支氣管上皮細(xì)胞IL-6基因表達(dá)在癥狀性哮喘患者中可見(jiàn)增強(qiáng)。其培養(yǎng)上清液中的水平也明顯增高［6］。又有證明IL-6主要由氣道非纖毛上皮細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生，其水平在非過(guò)敏性哮喘患者支氣管肺泡灌洗液中明顯高于正常組，故認(rèn)為在哮喘炎癥反應(yīng)中IL-6起著至關(guān)重要的作用［7］。研究結(jié)果表明哮喘發(fā)作期IL-6含量顯著增高，INF-γ明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明患者Th2細(xì)胞處于活化狀態(tài)，而Thl細(xì)胞活性較低。即存在Thl細(xì)胞表達(dá)抑制及Th2細(xì)胞過(guò)度表達(dá)［8］。隨著炎癥程度減輕達(dá)緩解期時(shí)IL-6降低，IFN-γ增高，但仍達(dá)不到健康組水平。

喘息患兒下氣道的主要炎癥細(xì)胞是EOS，其病理組織學(xué)改變是氣道黏膜活化的EOS顯著增多，并與氣道高反應(yīng)(AHR)的嚴(yán)重程度和氣道上皮細(xì)胞損傷脫落密切相關(guān)。ECP是EOS活化標(biāo)志，EOS活化后釋放的強(qiáng)堿性顆粒蛋白主要有ECP，在氣道炎癥過(guò)程中，ECP能誘導(dǎo)肥大細(xì)胞釋放組胺，它具有極強(qiáng)的細(xì)胞毒性作用，從而損傷氣道上皮和角質(zhì)細(xì)胞，ECP能反映哮喘患者氣道炎癥的發(fā)生、發(fā)展等的變化及提示氣道炎癥的嚴(yán)重程度［9-11］。

本文研究結(jié)果顯示:喘息發(fā)作期組 ECP、EOS與 IL-6明顯高于健康組及緩解期組(P＜0.01)。即使緩解期上述3項(xiàng)指標(biāo)明顯下降，但仍不能達(dá)到健康組水平(P＜0.01);IFN-γ喘息發(fā)作期組明顯低于健康組及緩解期組(P＜0.01)，而緩解期組即使有明顯上升，仍達(dá)不到健康組水平(P＜0.01)。提示ECP、EOS、IL-6、IFN-γ能夠敏感、準(zhǔn)確地反映喘息患兒的氣道炎癥變化。因此，測(cè)定血細(xì)胞與炎性因子(EOS、ECP、IL-6、IFN-γ)不但可提示喘息患兒氣道損害與炎癥的嚴(yán)重程度，還可反應(yīng)臨床病情的嚴(yán)重程度。對(duì)診斷、療效和預(yù)后判斷等有較大的臨床實(shí)用價(jià)值。

［1］應(yīng)延風(fēng)，胡野.前列腺素D2對(duì)支氣管哮喘免疫細(xì)胞功能調(diào)節(jié)作用.國(guó)際呼吸雜志，2007，27(11):837-842.

［2］王西潔.布地奈德霧化吸入對(duì)輕中度支氣管哮喘患者Th1/Th2細(xì)胞因子平衡的影響.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2013:8(7):177-178

［3］中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)呼吸學(xué)組.中國(guó)兒童哮喘診斷與防治指南.中華兒科雜志，2008，46(10):745-753.

［4］李文益，陳述枚.兒科學(xué)新理論和新技術(shù).北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:446-455

［5］Yokoyama A，Rohno N，F(xiàn)ujino S，et al.Circulating interleukin-6 levels in patients with bronchial asthma.Am J Respir Crit Care Med 1995 151(5):1354-1358.

［6］Mavini M，Vitrou E，Hollembong J，et al.Expression of the Potent intlammatory cytomnes，anuloeyte-maerophagecolony stimulating factor and inlerleukin-6 and inledeukin-8 in bronchial epithelial cells of patientswithasthma.J Allergy Clin Immunol，1992，89(6):1001-1009.

［7］Mattoh S，Mattoso VL，Soloperto M，et al.Cellular and biochemical characteristics of bronchoalveolar lavage fluid in symptomatic nonallergic asthma.J Allergy Clin Immumol，1991，87(4):794-802.

［8］姜軍合，范學(xué)政.布地奈德對(duì)變應(yīng)性鼻炎患者Th1/Th2細(xì)胞因子的影響.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2007，23(21):3357-3358.

［9］匡玉寶，黃英河.嬰兒喘息支氣管哮喘患者治療前后ECP和EOS 對(duì)比分析.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010，16(28):98.

［10］張方琪，楊學(xué)敏，唐元元，等.酸性粒細(xì)胞在哮喘發(fā)病機(jī)制中的研究進(jìn)展.中華肺部疾病雜志(電子版)，2013，6(2):55-58.

［11］應(yīng)延風(fēng)，胡野，金耀建，等.大鼠哮喘模型中嗜酸性粒細(xì)胞上前列腺素D2受體改變研究.金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，8(2):5-7.