申 森，楚紅英

（黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 開(kāi)封 475004）

0 引言

在分類(lèi)學(xué)上，秀珍菇屬于真菌門(mén)、擔(dān)子菌綱、傘菌目、側(cè)耳科側(cè)耳屬。 秀珍菇不僅味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，其蛋白質(zhì)含量也比較高，接近肉類(lèi)，比一般蔬菜高3～6 倍， 纖維含量少，含有17 種以上氨基酸。 更為可貴是，它含有人體自身不能制造而食物中通常又缺乏的蘇氨酸、賴(lài)氨酸、高氨酸等，還含有多種維生素及微量元素。磷是人體生命代謝中具有獨(dú)特地位的一種重要元素，是牙齒和骨骼不可或缺的組成部分之一，同時(shí)磷還參與體內(nèi)酸堿平衡的調(diào)節(jié)及脂肪的代謝［1］，因此，分析秀珍菇中的磷非常必要。 磷的測(cè)定方法主要有熒光法、極譜法、ICP－AES 法、離子色譜法、分光光度法等［2～5］。分光光度法是一種最為經(jīng)典的方法。其中鉬藍(lán)分光光度法因使用儀器簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度較高而較為常用，所以，本實(shí)驗(yàn)采用磷鉬藍(lán)分光光度法測(cè)定秀珍菇中總磷含量，對(duì)其深加工及食用營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的進(jìn)一步研究具有一定的參考意義。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

實(shí)驗(yàn)所用秀珍菇為開(kāi)封市西區(qū)秀珍菇生產(chǎn)基地生產(chǎn)的秀珍菇。 所用試劑包括： 磷酸二氫鉀、硫酸、抗壞血酸、鉬酸銨、酒石酸銻鉀（以上試劑均為分析純）。 實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)儀器包括：PB1502－L 型分析天平（瑞士梅特勒－托利多公司生產(chǎn)）；ZRD－8210 電熱風(fēng)干燥箱（上海智誠(chéng)分析儀器制造有限公司生產(chǎn)）；TU－1810型紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì) （北京普析通用儀器限責(zé)任公司生產(chǎn)）。

1.2 溶液的制備

1.2.1 磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

稱(chēng)取約2 g 磷酸二氫鉀在干燥器中干燥2 h，并放冷，取0.2170 g 溶于適量純水，移入1000 mL 的容量瓶中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的硫酸5 mL，再用水稀釋至標(biāo)線(xiàn)，1 mL 溶液含50 μg 磷。 用吸量管吸取磷酸鹽儲(chǔ)備液10 mL 于250 mL 容量瓶中， 用水稀釋至標(biāo)線(xiàn)，此溶液1 mL 含2 μg 磷。

1.2.2 鉬酸鹽溶液的制備

將0.35 g 酒石酸銻鉀溶解于100 mL 水中，使其充分溶解。將12.3600 g 鉬酸銨溶解于100 mL 水中，在不斷攪拌后， 將其加入到300 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的硫酸中，再加配好的酒石酸銻鉀溶液100 mL混合均勻（此溶液摩爾濃度為0.02 mol／L）。

1.3 磷標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作

用8 支50 mL 的比色管分別吸取磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使 用 液0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、6.00 mL、10.00 mL、14.00 mL、20.00 mL、30.00 mL，并加水至50 mL。向比色管中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的抗壞血酸1 mL，混勻30 s 后，加2 mL 的鉬酸鹽溶液，充分混勻，并放置15 min。 以不加磷酸鹽的試劑空白溶液作為參比液， 用1 cm 比色皿在700 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣的吸光度值。 以吸光度值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（如圖1 所示）。 求得其線(xiàn)性回歸方程為：A＝0.0045c－0.0007，其相關(guān)系數(shù)r＝0.9999。

圖1 磷標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig.1 Standard curve of phosphorus

1.4 樣品處理

將秀珍菇洗凈、自然風(fēng)干后，在瓷研缽中研細(xì)，過(guò)100 目篩子，置于干燥器中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.1 濕法消解秀珍菇樣品

準(zhǔn)確稱(chēng)取秀珍菇樣品1.0000 g 置于錐形瓶中，向錐形瓶中加入20 mL 濃硝酸和4 mL 濃硫酸，并用小燒杯蓋口靜置過(guò)夜。 將錐形瓶放在電爐上煮沸至棕色，冷卻后逐滴加1～2 mL 的濃硝酸，再煮沸，再加濃硝酸，再煮沸，反復(fù)多次，直至溶液不再變棕色時(shí)，停止添加濃硝酸。然后，繼續(xù)煮溶液，直到其冒白煙，再持續(xù)幾分鐘，至溶液為淡黃色止［4～5］。溶液冷卻后，過(guò)濾，取清液，用蒸餾水清洗，定容至50 mL 容量瓶中，作為儲(chǔ)備液。

1.4.2 干法消解秀珍菇樣品

準(zhǔn)確稱(chēng)取秀珍菇樣品1.0000 g，放入坩堝中。 將坩堝放在電爐上，使秀珍菇灼燒成灰白色，然后放在馬弗爐里灰化。將灰化后的灰燼用2 mL 濃硝酸加熱溶解、 蒸干， 再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的硝酸5 mL 溶解，并轉(zhuǎn)移至容量瓶中。用濃度為0.01 mol／L 的硝酸溶液定容至50 mL［4～5］，作為儲(chǔ)備液。

1.5 顯色溫度和時(shí)間的確定

分別以干法和濕法處理的秀珍菇為樣品， 以磷標(biāo)準(zhǔn)使用液代替樣品液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)， 發(fā)現(xiàn)反應(yīng)體系在室溫下（20～30 ℃）可較快顯色，且經(jīng)過(guò)試驗(yàn)15 min后，吸光度不再增大。 故本試驗(yàn)溫度采用在室溫：顯色時(shí)間15 min 的條件下測(cè)定吸光度。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 抗壞血酸加入量對(duì)總磷含量的影響

取10 支50 mL 比色管， 用移液管分別移取1 mL 經(jīng)濕法處理的秀珍菇樣品于其中，并加蒸餾水定容至50 mL。然后，分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的抗壞血 酸0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、1.20 mL、1.40 mL、1.60 mL、1.80 mL、2.00 mL， 混 勻30 s 后，各加2.00 mL 的鉬酸鹽溶液，充分混勻。 將混合溶液放置15 min 后，以不加抗壞血酸的試劑空白溶液作為參比， 用1 cm 比色皿在700 nm 波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，結(jié)果如圖2 所示。

圖2 抗壞血酸對(duì)總磷測(cè)定的影響Fig.2 Ascorbic acid effect on total phosphorus measuring

從圖2 可以看出，隨著抗壞血酸體積的增加，吸光度值先增加后減小。 當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的抗壞血酸加入量為1 mL 時(shí)，吸光度值達(dá)到最大。

2.2 鉬酸鹽的加入量對(duì)總磷含量的影響

取10 支50 mL 比色管， 用移液管分別移取1 mL 經(jīng)濕法處理的秀珍菇樣品于其中，并加蒸餾水定容至50 mL。然后，向比色管中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.00 mL 10%的抗壞血酸，混勻30 s 后，分別加入濃度為0.02 mol／L 的鉬酸鹽0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL、3.00 mL、3.50 mL、4.00 mL、4.50 mL、5.00 mL，充分混勻、放置15 min 后，以不加鉬酸鹽的試劑空白溶液作為參比， 用1 cm 比色皿和700 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，結(jié)果如圖3 所示。

圖3 鉬酸鹽對(duì)總磷測(cè)定的影響Fig.3 Molybdate effect on total phosphorus measuring

由圖3 可以看出，隨著鉬酸鹽體積的增加，吸光度值先增加后減小。 當(dāng)濃度為0.02 mol／L 的鉬酸鹽加入量為2 mL 時(shí)，吸光度值達(dá)到最大。

2.3 秀珍菇中磷的含量

吸取一定量的濕法處理的樣品， 每間隔10 min測(cè)一次， 測(cè)得吸光度值分別為0.244、0.245、0.245、0.244、0.246、0.244。 吸 光 度 相 對(duì) 標(biāo) 準(zhǔn) 偏 差RSD＝0.36% ，即在60 min 內(nèi)，測(cè)試儀器穩(wěn)定。 然后，從干法和濕法處理的樣品儲(chǔ)備液中各吸取1.00 mL 到50 mL 比色管中（每個(gè)樣品平均做三次），向比色管中加入1 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的抗壞血酸，混勻30 s 后，加2 mL 濃度為0.02 mol／L 的鉬酸鹽溶液， 充分混勻，放置15 min，分別測(cè)定其吸光度值。 當(dāng)吸光度值代入回歸方程，計(jì)算出秀珍菇中磷的含量（如表1 所示）。

表1 不同樣品處理方法測(cè)定的秀珍菇中磷的含量Table 1 Content of phosphorus in Pleurotus geesteranus of different samples

從表1 中看出， 用濕法和干法處理樣品的結(jié)果有一些差異。濕法處理的秀珍菇中，磷的含量分別為2.663 mg／g、2.730 mg／g、2.666 mg／g。 用干法處理的秀珍菇中磷的含量分別為2.725mg／g、2.746 mg／g、2.782 mg／g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.05%～1.41%之間。在干法消解中，高溫灰化可能對(duì)樣品中的有機(jī)物破壞比較徹底。 在濕法消解中， 有機(jī)物破壞得不徹底，這可能是導(dǎo)致濕法消解數(shù)值偏低的原因。

2.4 精密度試驗(yàn)

吸取一定量的濕法處理的樣品， 在50 mL 比色管中用水定容至50 mL，向比色管中加入1.00 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的抗壞血酸，混勻30 s 后，加2 mL 的鉬酸鹽溶液，充分混勻，放置15 min，用1 cm 比色皿在700 nm 波長(zhǎng)處以0 濃度為參比測(cè)吸光度，做6 份平行樣， 測(cè)得吸光度值分別為0.249、0.244、0.251、0.237、0.242、0.246。 吸光度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.06%。

2.5 回收率試驗(yàn)

取6 個(gè)50 mL 比色管，分別取已知含量（5 μg）的樣品6 份， 再分別精確加入不同量的磷標(biāo)準(zhǔn)使用液，各份均按處理樣品的方法進(jìn)行處理，以測(cè)定磷含量， 結(jié)果如表2 所示。 平均回收率97.3%，RSD 為0.02%。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Recovery test results

3 結(jié)語(yǔ)

采用鉬酸鹽分光光度法， 以700 nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)，在室溫（20 ℃～30 ℃）條件下，分別用干法消解和濕法消解處理秀珍菇樣品，測(cè)定秀珍菇中磷的含量。結(jié)果表明： 用濕法處理的秀珍菇中磷的含量平均為2.686 mg／g； 用干法處理的秀珍菇中磷的含量平均為2.751 mg／g。通過(guò)對(duì)試驗(yàn)儀器的穩(wěn)定性，數(shù)據(jù)的精密度，以及試驗(yàn)的回收率進(jìn)行測(cè)定，證明該本方法具有快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。 該試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)秀珍菇資源提供一定的理論依據(jù)。

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